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【摘要】 目的 考察注射用头孢替安的细菌内毒素检查方法。方法 按《中国药典》2005年版二部收载的细菌内毒素检查方法进行试验。结果 实验表明当头孢替安稀释成2mg/ml时，对鲎试剂的凝集反应无抑制作用。结论 可以用细菌内毒素检查法替代家兔热原法来注射用头孢替安的质量。
【关键词】 注射用头孢替安；鲎试剂；细菌内毒素
The study of the bacterial endotoxin in cefotiam for injection
TANG Jian-zhong.Suzhou Medicine Technical Science School,Suzhou 215009,China
【Abstract】 Objective To test the bacterial endotoxin in cefotiam hydrochloride for injection.Methods Bacterial edotoxin test of the Chinese pharmacopoeia was used.Results The test showed that inhibitory effect was not shown when the cefotiam hydrochloride was diluted to 2mg/ml.Conclusion Bacterial edotoxin test can be used in place of rabbit method for pyrogen monitoring of cefotiam hydrochloride for injection.
【Key words】 cefotiam for injection; bacterial endotoxin;horseshoe crab agent
注射用盐酸头孢替安（Cefotiam Hydrochloride for Injection, CHI）为抗生素类药，主要用于敏感的各种葡萄球菌、各种链球菌（肠球菌除外）、肺炎双球菌、流感嗜血杆菌、大肠杆菌、克雷白氏菌属、枸橼酸杆菌、变形杆菌属、普通变形杆菌等引起的感染。临床上最大用量为每次2g，静脉滴注。现行药品质量标准采用家兔法检查其热原【1】
1 实验材料
CHI，规格0.5g，批号B20070112、B20070113、B20070301（为市售品、同一公司生产，经热原检查均符合规定）。细菌内毒素工作标准品，批号2007-5，效价100EU/支（中国药品生物制品检定所）。鲎试剂（TAL）批号：0602160（湛江博康海洋生物有限公司，规格：0.1ml/支）；批号0705250（湛江安度斯生物有限公司, 0.1ml/支）。灵敏度（λ）均为0.25EU/ml，且经灵敏度复核均符合规定。细菌内毒素检查用水（BET水）批号2006.12，内毒素含量≤0.015EU/ml（中国药品生物物品检定所）。
2 方法与结果
2.1 CHI的细菌内毒素限值（L）的计算【2】 根据公式L=K/M计算, K（人体致热阈值）为5.0EU/kg,CHI每小时最大用量为2g,人均体重按60kg计，即每小时剂量M为33mg/kg，因此，CHI的细菌内毒素限值L为:K/M=0.15EU/mg；CHI药品质量标准的热原检查方法为：1ml中含CHI 40mg的注射用水溶液，每1kg家兔注射1ml，即每小时剂量M为40mg/kg，则根据公式L=K/M计算，CHI的细菌内毒素限值L为:K/M=0.125EU/mg，结合二种计算方法结果，确定其细菌内毒素限值为:L=0.125EU/mg。
2.2 供试液的制备 取本品1瓶，加BET水5ml将样品稀释成每1ml中含CHI为100mg的溶液，作为供试液。
2.3 供试液最大有效稀释倍数（MVD）的确定 按照公式MVD=L/λ计算，由于供试液的浓度为100/ml,则其相对应的内毒素限度L为12.5EU/ml。λ为市售TAL的常用最高灵敏度0.031EU/ml，计算得供试液的最大有效稀释倍数为400倍。实验时按市售常用鲎试剂灵敏度0.03～0.5EU/ml,则供试液的稀释倍数可取25、50、100、200、400倍。
2.4 干扰试验
2.4.1 干扰试验预试验 为考察供试品本身对TAL与细菌内毒素凝胶反应可能存在的干扰，将CHI先用BET水稀释成100mg/ml的溶液，再做25、50、100、200、400倍稀释，用此溶液作为溶剂溶解并稀释内毒素，使每个稀释度中内毒素的含量均为2λ，用灵敏度为0.2EU/ml的二批TAL分别进行试验，同时作阳性和阴性对照，结果见表1。从表1的结果看，CHI对鲎试剂的凝胶化反应存在一定的干扰作用，但当供试液作50倍稀释（即CHI浓度为2mg/ml）时，供试液对鲎试剂的反应基本无干扰。
2.4.2 干扰试验 分别用BET水及上述稀释倍数为50倍（对应于λ为0.25EU/ml的TAL）的供试品溶液作溶剂，将细菌内毒素工作标准品稀释成0.5、0.25、0.125、0.06EU/ml的稀释液，与λ为0.25EU/ml的TAL进行反应，结果见表2。从表2的结果看，TAL在BET水和3个批号供试品中的λ值均在0.5～2.0 范围内，符合中国药典对细菌内毒素检查有效性的规定【2】。〖HT5”H〗表1 CHI干扰试验预试验结果（供试品批号B20070112）表2 CHI干扰试验结果
2.5 供试品的细菌内毒素检查 CHI的L值为0.125EU/mg,根据干扰试验结果，将CHI先用BET水稀释成100mg/ml的溶液，再做50倍稀释，与λ为0.25EU/ml的TAL分别进行试验，结果见3。从表3的结果看出，供试品和阴性对照管均呈阴性，供试品阳性管和阳性对照管均呈阳性，实验结果成立，3个批号供试品的细菌内毒素检查均符合规定。表3 CHI的细菌内毒素检查结果 - ++ - ++
2.6 CHI的细菌内毒素检查与热原检查比较 CHI的细菌内毒素检查方法按2.5项下依法操作；热原检查按药品标准方法进行，即用无菌注射用水将CHI配制成40mg/ml的溶液，每公斤家兔注射1ml，共检查3批，两法检查均符合规定，结果一致。
3 小结
实验结果表明，CHI对鲎试剂的凝胶化反应存在一定的干扰作用，但这种干扰作用随着供试品的稀释（当样品稀释成2mg/ml时）可有效消除。用细菌内毒素检查法来替代家兔热原法对CHI进行质量控制是可行的，其细菌内毒素的限值为0.125EU/mg，具体的检查的方法为：用BET水将CHI稀释成100mg/ml的溶液，再做50倍或更大倍数的稀释，选用λ为0.25EU/ml或灵敏度更高的TAL来进行试验。
【参考文献】
1 国家药品监督管理局.标准（试行）YB15202004.
2 国家药典委员会.中华人民共和国药典，二部.北京：化学工业出版社,2005,附录85.
作者单位：215009 江苏苏州，苏州医药科技学校