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【摘要】 目的 建立高效液相色谱法测定注射用黄芪中黄芪甲苷的含量。方法 采用Hyper C18柱，乙腈-水（1﹕2）为流动相，202nm为检测波长。结果 测得线性范围0.2～1.0μg（r=0.9992），平均回收率为98.6%，RSD为1.9%（n=6）。结论 本法简便、准确。
【关键词】 HPLC法；注射用黄芪；黄芪甲苷
黄芪为常用中药，具有益气固表、利尿脱毒之功效，临床上常以不同炮制品种入药。黄芪甲苷为黄芪的活性成分之一，而其制剂一般采用紫外测定其总苷含量，提取方法繁琐，测定结果重现性差［1］。本文采用HPLC法测定，方法简单，重现性好，结果准确可靠。
1 仪器与试药
1.1 仪器 美国凯德SSI-222D高效液相色谱仪。
1.2 对照品 黄芪甲苷购自中国药品生物制品检定所。注射用黄芪（冻干粉）由药厂提供。
1.3 试剂 乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Hyper C18（200mm×4.6mm），流动相：乙腈-水（1﹕2），检测波长：202nm，灵敏度：0.02AFMS。
2.2 标准曲线的绘制 取黄芪甲苷对照品适量，精密称定。加甲醇溶解并制成每毫升含1mg的溶液。分别进样2、4、6、8、10μl，按上述色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，回归方程Y=0.0001X-0.0031,r=0.9992，线性范围为0.2～1.0 μg。
2.3 重复性实验 精密吸取上述对照品溶液10μl，连续进样5次，测定峰面积分别为7097、7059、7037、7123、6870，RSD为1.4%（n=6）。
2.4 稳定性实验 样品溶液在室温下放置，每隔2h测定1次，共测定4次，其含量（mg/ml）分别为0.536、0.507、0.517、0.541，RSD为2.0%。实验表明样品溶液中黄芪甲苷的含量在室温下放置8h是稳定的。
2.5 回收率实验 采用加标回收法，分别精密量取样品5ml，共6份置125ml分液漏斗中，分别加入不同量的对照品溶液，按样品方法提取并测定，测得平均回收率98.6%，RSD为1.9%（n=6）。
2.6 样品测定 取本品3瓶，分别精密加水2ml，溶解后混匀。精密量取5ml置125ml分液漏斗中，用20ml乙醚振摇提取，分取水层。用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液提取2次，每次20ml，弃取氨液，提取液再用水洗涤2次，每次20ml，弃取水层。正丁醇置水浴上蒸干，残渣用甲醇溶解，定量转移至5ml量瓶中。经0.45μm微孔滤膜过滤后，进样10μl，按上述色谱条件测定，黄芪甲苷含量（mg/ml）为：0.435、0.458、0.536、0.517、0.509、0.541、0.551、0.486、0.534、0.434。
3 讨论
在样品测定中，用乙醚提取，先除去黄芪中的一些干扰成分，使黄芪甲苷的主峰与其他峰分离的更好。
本实验考察了用正丁醇提取样品溶液3次后，同样在提取第4次，两种提取液在同样测定条件下测定，结果表明第4次提取液中已不存在黄芪甲苷，所以经3次提取后有效成分已完全提出。
【参考文献】
1 钱伟文,王宝琴.黄芪类中药中芒炳花素和毛蕊异黄酮的HPLC测定.中成药,1991，13（9）：32.
作者单位：150001 黑龙江哈尔滨，黑龙江省药品检验所