点击显示 收起
【摘要】 目的 对莱菔子中芥子碱硫氰酸盐进行定量研究。方法 采用高效液相色谱法对莱菔子中芥子碱硫氰酸盐进行含量测定。色谱柱：依利特 Hypersil ODS柱(4.6 mm×250mm，5μm）, 流动相：乙腈-0.01mol/L磷酸二氢钾溶液－三乙胺－磷酸（8 : 92 : 0.4 : 0.3）。检测波长：326nm。柱温：30℃。进样量:20μl。柱温：30℃。结果 含量测定芥子碱硫氰酸盐在0.2645 ～4.232μg范围内，进样量与峰面积呈良好线性，相关系数r=0.9999(n=5）；芥子碱硫氰酸盐平均回收率为98.99%,RSD=1.68%(n=6）。结论 对莱菔子中芥子碱硫氰酸盐进行了定量研究，方法简单可行，结果准确可靠。
【关键词】 莱菔子 芥子碱硫氰酸盐 高效液相色谱
【关键词】 莱菔子；芥子碱硫氰酸盐；高效液相色谱
【Abstract】 Objective To establish the qualitative study methods for Sinapine thiocyanate in Raphanus sativus L.Methods The contents of Sinapine thiocyanate in Raphanus stativus L.was determined by HPLC. Hypersil of ODS-C18 was used with acetonitrile-0.01mol/L monobasic potassium phosphate-triethylamine phosphoric acid(8:92:0.4:0.3） as mobile phase.The flow rate was 1.0mL／min and the column tempreture was 30℃. The determination wavelegth was 326nm. Results The linear range of sinapine thiocyanate was 0.2645 ～4.232μg(r=0.9999）, the average recovery was 98.99%, with RSD of 1.68%. Conclusion The qualitative study method for Sinapine thiocyanate is simple, reliable and accurate .
【Key words】 raphanus sativus L;sinapine thiocyanate; HPLC
莱菔子为十字花科植物萝卜（Raphanus satirus L.）的干燥成熟种子［1］，始载于《本草衍义补遗》．一些古籍又称之为温菘子、土酥子、羌精子、登松子、楚菘子、芦菔子、紫花松子、萝白子等。其主要功效是消食除胀、降气化痰，主治饮食停滞、脘腹胀痛、大便秘结、积滞泻痢等病症［1］。药理研究证实莱菔子具有抑菌［2］、祛痰镇咳平喘［3,4］、增强消化道运动［5,6］的作用；芥子碱硫氰酸盐具有降压 ［7,8］的作用。目前有关莱菔子中芥子碱硫氰酸盐定量方面的研究还未见报道。本文采用了高效液相色谱法对莱菔子中芥子碱硫氰酸盐进行定量分析，为初步建立莱菔子药材质量控制方法，为其制剂的质量标准研究提供了依据。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪：岛津LC-2010AHT液相色谱仪。色谱柱：依利特 Hypersil ODS柱(4.6 mm×250mm，5μm）。分析天平：LIBROR AEL-160型万分之一电子分析天平，TG332A型十万分之一分析天平。试剂：芥子碱硫氰酸盐对照品购于中国生物制品检定所（批号：111702-200501）。乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。莱菔子药材产自贵州，经贵州大学生命科学院关萍老师鉴定为姜科姜属植物莱菔子（Zingiber Corallinum Hance）；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷干燥恒重的芥子碱硫氰酸盐对照品适量，加50％甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得。
2.2 供试品溶液的制备 取莱菔子药材粗粉0.3g，精密称定，精密加入 50％甲醇25ml，称重，超声处理1h，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，过微孔滤膜，即得。
2.3 色谱条件 色谱柱：依利特 Hypersil ODS2柱(4.6mm×250mm，5μm）。流动相：乙腈-0.01mol/L磷酸二氢钾溶液－三乙胺－磷酸（8 : 92 : 0.4 : 0.3）。检测波长：326nm。柱温：30℃。进样量:20μl。理论板数按芥子碱硫氰酸盐峰计算应不低于3000。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见图1，2。
2.4 线性关系考察 精密量取不同浓度的芥子碱硫氰酸盐对照品溶液 （13.2250，26.4500，52.9000，105.8000,211.6000μg/ml）20μl注入液相色谱仪，进行芥子碱硫氰酸盐测定，以芥子碱硫氰酸盐峰面积 A 对芥子碱硫氰酸盐浓度 C 进行线性回归，线性回归方程：A=54256C - 10351，线性范围：0.2645 ～4.232μg ，相关系数 r = 0.9999。根据实验结果，芥子碱硫氰酸盐浓度在0.2645 ～4.232μg范围内，峰面积与进样量呈良好的线性关系。
2.5 精密度考察 取同一对照品，分别重复进样5次，测定结果，对照品溶液中芥子碱硫氰酸盐RSD=0.16%（n=5）。
2.6 重复性试验 取本品5份，精密称定样品，按［样品含量测定］项下的方法操作，制成供试品溶液，测定芥子碱硫氰酸盐的平均含量为3.88mg/g，RSD为1.52%。
2.7 稳定性试验 将配置好的供试品溶液在室温下放置，分别于0，2，4，6，8，10h测定，结果样品溶液在10 h内基本稳定，芥子碱硫氰酸盐峰面积积分值前后无明显变化。RSD为0.83%。
2.8 加样回收率试验 取本品0.15g，6份，精密称定，于25ml容量瓶内，精密加入26.45μg/ml芥子碱硫氰酸盐对照品溶液（50％甲醇溶液溶解）25ml，称定重量，超声60min，放冷，再称定重量，用50％甲醇溶液补足减失的重量，搖匀，滤过，取续滤液过微孔滤膜，即为供试品溶液，照［含量测定］方法，进行芥子碱硫氰酸盐含量测定，结果芥子碱硫氰酸盐平均回收率为98.99%, RSD=1.68%( n=6） ，结果见表1。表1 芥子碱硫氰酸盐回收率实验结果注：X=98.99% RSD=1.68%
2.9 莱菔子中芥子碱硫氰酸盐的含量测定 按2.2项下方法,制备供试品溶液,测定10份莱菔子药材中芥子碱硫氰酸盐的含量,测定结果见表2。表2 莱菔子中芥子碱硫氰酸盐的含量测定结果
3 讨论
3.1 对提取溶剂进行考察，根据芥子碱硫氰酸盐的理化特性，我们分别以甲醇、乙醇、50％甲醇、50％乙醇溶液作为提取溶剂，超声30min；实验结果表明，用甲醇、乙醇、50％乙醇作提取溶剂，出现双峰，50％甲醇溶液作为供试品溶液制备中的提取溶剂，分离良好，故选用50％甲醇溶液作为供试品提取溶液。
3.2 对提取方法进行考察，比较了超声、加热回流和冷浸的提取效果,发现超声提取的芥子碱硫氰酸盐分离较好，达到基线回归,同时芥子碱硫氰酸盐的峰面积也明显大于其他两种提取方法,因此本实验的样品采用超声提取。
3.3 对超声提取时间进行考察，比较了15min、30 min、45 min、60 min、75 min，90 min的超声提取效果,发现芥子碱硫氰酸盐在1～1.5h内芥子碱硫氰酸盐的含量提高不明显,因此本实验的样品提取时间采用1h。
目前,对莱菔子药材的研究较少, 有关莱菔子定量方面的研究还未见报道,本实验建立了莱菔子药材中的芥子碱硫氰酸盐含量测定方法,且方法简单可行，重复性好,结果准确可靠,可为莱菔子药材及其制剂的质量标准的建立提供一定的参考。
【参考文献】
1 国家药典委员会.中国药典（1部）.广州:广东科技出版社，1995,245.
2 江苏新医学院.中药大辞典(下册）.上海:上海科学技术出版社，1986,1801.
3 刘继林,钟荞,张世波.莱菔子降气化痰的实验研究.成都中医学院学报,1990,13(2）:29-30.
4 张巍峨,梁文波,张学梅，等.莱菔子提取物镇咳祛痰平喘作用研究.大连大学学报,2002,23(4）:93-95.
5 王君,孔彦,王辉.莱菔子对豚鼠离体回肠的动力作用. 大连大学学报,2000,21(4）：80-81.
6 李玲,谈斐.莱菔子、蒲公英、白术对家兔离体胃、十二指肠肌的动力作用.中国中西医结合脾胃杂志,1998,6(2）:107-108.
7 莱萌.治疗高血压病性新药-莱菔子降压片的研究.医学研究通讯,1986,15(6）:185-186.
8 施波.莱菔子对家兔急性缺氧性肺动脉高压的降压作用研究.中草药,1990,21(10）:25-27.
9 国家药典委员会.中国药典(一部）.北京：化学工业出版社，2005，附录ⅥB.
作者单位：550002 贵州贵阳，贵州省生物技术研究开发基地（△通讯作者）