点击显示 收起
【摘要】 目的 用HPLC法测定丹七片中丹参素的含量。方法 HPLC用外标一点法，Diamonsil ODS1 C18柱，甲醇- 水－冰乙酸（8：91：1）为流动相，流速为1.0ml/min，λ=281nm。结果 丹参素在0.0747～0.224mg/ml范围内呈良好线性,回归方程为Y=7033980.19X-34659.73，r=0.9999，平均加样回收率99.4%，RSD为1.5%（n=6）。结论 方法简便，准确，专属性强，测定结果重复性好，为丹七片中丹参素的定量分析提供了科学有效的方法。
【关键词】 丹七片 丹参素 HPLC
【Abstract】 Objective To establish the method for detemining the content of Danshensu in Danqi Pian by HPLC.Methods Using Diamonsil ODS1 C18 Column, Methyl alcohol- wate- Acetic acid glacial（8：91：1） as the mobile phase,detection wavelength as 281nm and flow rate was 1.0ml/min.Results The calibration curve was linear at a range of 0.0747mg/ml ～0.224mg/ml for the Danshensu and linear equation was Y=7033980.19X-34659.73，r=0.9999. The average recovery was 99.4% and the related standard deviation（RSD） was 1.5%（n=6）.Conclusion This method was simple and accurate and proper,which can be provide for scientific quantitative analysis method of Danshensu in Danqi Pian and the reduplication of the result was good.
【Key words】 Danqi Pian；Danshensu； HPLC
丹七片收载于部颁药品标准中药成方制剂第一册中，功能主治：活血化瘀。用于血瘀气滞，心胸痹痛，眩晕头痛，经期腹痛［1］。处方由丹参、三七组成，原标准中只有鉴别查项，没有含量控制项。为了更好地控制丹七片的质量，提高丹七片的质量标准，笔者对丹七片处方进行了分析，处方中主药丹参是用水提取的，参考《中国药典》2005年版一部复方丹参滴丸质量标准［2］，进行本品中丹参素含量测定，并进行了方法学研究，控制药品质量。采用高效液相色谱法测定丹参素含量，方法简便快速，稳定可靠，专属性强。
1 仪器与试药
1.1 仪器 高效液相谱仪：SPD—10A 日本岛津；紫外分光仪：上海康化生化仪器制造厂；超声波清洗器：SK3200H 上海科导超声仪器有限公司。
1.2 试药 丹参素钠对照品（批号110805-200508，供含量测定用）由中国生物制品检定所提供；丹七片（批号：20070401、20070402、20070403）由河南百年康鑫药业有限公司提供；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件［2］ 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇- 水－冰乙酸（8：91：1）为流动相；检测波长为281nm。理论板数按丹参素峰计算应不低于2000。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 取丹参素钠对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.16mg的溶液（相当于每1ml含丹参素0.144mg），即得。色谱图见图1。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品20片，研细，取1.0g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，超声处理30min使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，取上清液，滤过，即得。色谱图见图2。
2.2.3 阴性样品的测试 取缺丹参的样品，按供试品制备法制备阴性样品后测定，在丹参素相应位置无峰出现，说明阴性样品的其他成分无干扰。色谱图见图3。图1 丹参素对照品色谱图图2 丹七片色谱图图3 阴性样品色谱图2.3 线性关系的考察 精密称丹参素钠对照品适量，用甲醇稀释制成不同浓度的对照品溶液，浓度分别为0.0747mg/ml、0.1128mg/ml、0.1494mg/ml、0.1868mg/ml、0.2241mg/ml，照上述色谱条件各进样10μl测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，丹参素的浓度为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程Y=7033980.19X-34659.73，r=0.9999（n=5）,表明丹参素在0.0747～0.2241mg/ml之间呈良好的线性关系。
2.4 精密度试验 取本品20片（批号：20070402），研细，称取1.0g，精密称定，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，吸取10μl，连续进样6次，测定峰面积，测定结果RSD为2.17%，表明精密度良好。
2.5 重现性试验 取本品20片（批号：20070402），称取总重后研细，分别称取6份，每份1.0g，精密称定，然后按供试品溶液制备方法制备供试品溶液。按照正文含量测定方法，连续测定6次含量，测定每份样品中丹参素的含量，结果RSD为0.62%，重现性良好。
2.6 稳定性试验 取本品20片（批号：20070402），研细，称取1.0g，精密称定，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，分别在0、2、4、6、8h测定峰面积，RSD为1.38%（n=5）。表明制备的供试品溶液在8h内稳定。
2.7 加样回收率试验 取本品20片（批号：20070402），称取总重后研细，分别称取6份，每份0.5g，精密称定。分别置之25ml量瓶中，精密加入用1.0764mg/ml的丹参素对照品溶液2ml，按照供试品溶液制备方法，制备供试品溶液，进样量10μl，测定丹参素含量，平均回收率为99.4%，RSD为1.5%（n=6）。见表1。表1 加样回收率试验
2.8 样品测定 按照供试品溶液制备方法对3批中试产品进行测定，测定结果见表2。表2 样品测定结果
3 讨论
根据3批测定结果，每片含丹参以丹参素（C9H10O5）计，均不少于1.0mg,由于各地丹参药材的差别较大，因此暂规定：本品每片含丹参以丹参素（C9H10O5）计，均不少于0.8mg。供试品溶液制备方法的考察。为了考察拟定供试品溶液制备方法的合理性，分别取3份样品，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，超声处理15、30、45min使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，取上清液，滤过，即得。按照色谱条件进含量测定，实验结果表明，超声处理30min已将供试品中丹参素提取完全，故采用超声处理30min。
【参考文献】
1 国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂.北京：卫生部药典委员会，1989，48.
2 国家药典委员会.中国药典，2005年版一部.北京：化学工业出版社，2005，528.
作者单位：477150 河南郸城，河南百年康鑫药业有限公司