HPLC法测定强阳灵口服液中淫羊藿苷的含量

【摘要】  　　目的　　建立强阳灵口服液中淫羊藿苷的含量测定方法,提高强阳灵口服液的质量标准。方法　　强阳灵口服液采用稀乙醇作溶剂提取淫羊藿苷，并以 Diamonsil C18 柱 （250mm×4.6mm）为填充柱；以乙腈：水（28：72）为流动相；检测波长为270nm；流速为1ml/min；柱温为35℃。结果　　在此色谱条件下测定强阳灵口服液中淫羊藿苷的含量，淫阳藿苷在0.02～0.2mg/ml范围内线性关系良好，平均回收率为96.24％，RSD为0.55％。结论　　本方法简便，快速，准确，精密度高，重复性好，可为评价强阳灵口服液的质量提供依据。

【关键词】  　强阳灵口服液；淫阳藿苷；含量测定；高效液相色谱法

   　　　　强阳灵口服液为苏州市某医院的医院制剂，是由中药仙灵脾（淫羊藿）、熟地黄、锁阳、鹿角片、狗脊、五味子、菟丝子、川牛膝等十五味中药组成的中药复方制剂，具有壮阳健肾的功效，临床用于治疗早泄、阳痿及性功能障碍等。该制剂的质量标准中没有含量测定项，因此本文采用HPLC法测定该制剂中主药淫羊藿的有效成分淫羊藿苷的含量，为该制剂的质量控制提供了有效的含量测定方法。

　　1　　仪器、试剂与试药

    强阳灵口服液，批号071010、071104、080102 （规格为10ml/瓶，由苏州市立医院提供）；淫羊藿苷对照品，批号200414（中国药品生物制品检定所提供）；对照药材（熟地黄、锁阳、鹿角片、狗脊、五味子、菟丝子、川牛膝 、巴戟天、肉苁蓉、怀牛膝、杜仲、陈皮、丹参、甘草，均由中国药品生物制品检定所提供）；高效液相色谱仪 （日本岛津公司LC-10AD，岛津LC-10AD泵，SCL-10Avp系统控制器,SPD-10A紫外检测器，CTO-10A柱温控制箱，SIL-10ADvp自动进样器，CLASS-VP LC色谱工作站）。

　　2　　方法与结果

    2.1　　对照品溶液的制备　　精密称取淫羊藿苷对照品26.11mg，置于25ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，按“2.4项下”测定，见图1A。

    2.2　　供试品溶液的制备　　精密量取强阳灵口服液1ml，置于10ml的容量瓶中，加入稀乙醇稀释并定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，滤液按“2.4项下”测定，见图1C。

    2.3　　阴性对照溶液的制备　　按处方取不含淫羊藿的其他药材，照本制剂的制备工艺制成阴性对照样品，再按“2.2 项下”测定，结果在对照品淫羊藿苷的色谱峰相应位置上，无色谱峰出现，说明在本试验条件下测定，阴性样品溶液无干扰，见图1B。

    2.4　　色谱条件　　色谱柱为Diamonsil C18柱 （250mm×4.6mm）;流动相为乙腈：水（28：72）；检测波长为270nm；流速为1ml/min，柱温为35℃；进样量为10μl；理论板数按淫羊藿苷峰计算，应大于1500。

    A.淫羊藿苷对照品　　B.阴性溶液　　 C.样品溶液

    图1　　强阳灵口服液HPLC图谱2.5　　系统适应性试验　　在上述色谱条件下，供试品溶液中淫羊藿苷的保留时间约为8.46min，吸收峰达到基线分离，分离度大于1.5，说明上述色谱条件适用于本品的含量测定。

    2.6　　线性关系考察　　分别精密量取对照品溶液1.0、2.0、3.0、5.0、10.0ml，各置于50ml的容量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，摇匀，在“2.4项下”的色谱条件下，各取10μl进样，测定对照品溶液中淫羊藿苷的峰面积值，以淫羊藿苷浓度（mg/ml）为横坐标，测得的淫羊藿苷的峰面积为纵坐标，得到的标准曲线回归方程为Y＝2225893.4508X－13881.5000（n=5，γ＝0.9996），结果表明在0.02～0.2mg/ml浓度范围内，淫羊藿苷的峰面积（A）和淫羊藿苷的浓度（C）呈现良好的线性关系。

    2.7　　精密度试验　　精密量取对照品溶液10μl，重复进样6次，测得对照品溶液峰面积，其峰面积的RSD为1.58％。

    2.8　　稳定性试验　　取批号071010的强阳灵口服液，制备供试品溶液，分别于0、2、4、6、8h各取10μl进样，测定供试品溶液中淫羊藿苷的峰面积，计算RSD，以此来测定供试品溶液在室温条件下的稳定性，其测得供试品的峰面积值积分的RSD为0.51％。表明供试品溶液在室温条件下8h内稳定。

    2.9　　重复性试验　　取强阳灵口服液（批号：071010），按供试品溶液的制备方法制备5份供试品溶液，按“2.4项下”色谱条件，分别测定强阳灵口服液中淫羊藿苷的含量，其平均含量为0.227mg/ml,RSD为0.31％。

    2.10　　加样回收率试验　　精密吸取已知含量的样品（取重复性项下的强阳灵口服液，批号：071010）5份，每份0.5ml，分别置50ml的容量瓶中，各精密加入淫羊藿苷对照品适量，加入稀乙醇，摇匀，按“2.4项下”方法测定淫羊藿苷的含量。结果淫羊藿苷的平均回收率为96.24％，RSD为0.55%（n=5）。

    2.11　　样品含量测定　　精密量取强阳灵口服液（批号为071010、071104、080102）各1ml，置于10ml的容量瓶中，加入稀乙醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得，取滤液10μl进样，测定，用外标一点法计算样品含量,结果见表1。表1　　强阳灵口服液中淫羊藿苷的含量测定

    3　　讨论

    3.1　　流动相的选择及其比例的调整　　文献报道淫羊藿苷的含量测定大多采用甲醇-水系统［1，2］，但在测定样品溶液时淫羊藿苷的峰前有一肩峰，使得淫羊藿苷不能与其他杂质达到很好的分离，本文采用乙腈：水（28：72），在此条件下淫羊藿苷的峰与其他成分峰的基线达到了很好的分离。

    3.2　　供试品溶液提取条件的考察　　精密量取批号为071010的强阳灵口服液1ml，置于10ml的容量瓶中，加入稀乙醇超声处理10min，放冷，再加入稀乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm.）滤过，即得。按“2.4项下”色谱条件测定淫羊藿苷的含量，考察超声处理对淫羊藿苷含量的影响。结果表明超声处理对供试品溶液的含量测定影响不大，因此本次实验未采用超声提取的方法。

【参考文献】
  1　　崔晓红，袁志芳，张兰桐.益肾强身片中淫羊藿苷的含量测定.中国新药杂志,2005,14（11）:1323-1325.

2　　金红宇,杜勇,王京辉,等.HPLC测定3种含动物中药口服液中淫羊藿苷的含量.中国中药杂志,2005,30（14）:1122-1124.

作者单位：215002 江苏苏州，江苏省苏州药品检验所