芦荟凝胶对豚鼠过敏性哮喘的影响

【摘要】  目的 探讨芦荟凝胶对豚鼠过敏性哮喘的影响。 方法 将豚鼠随机分为哮喘组、芦荟组和正常组3组，用10%卵清蛋白（OVA）生理盐水200mg/kg合并等体积1mg/ml氢氧化铝致敏豚鼠，2周后抗原OVA第二次攻击，复制豚鼠过敏性哮喘模型；芦荟组隔天芦荟灌胃两周，其余两组生理盐水灌胃。对比观察其行为学差异和血及支气管肺泡灌洗液（BALF）中嗜酸粒细胞（EOS）数目的差异。 结果 芦荟组嗜酸粒细胞数目较哮喘组明显降低（P<0.05），且其哮喘症状有明显差异。 结论 芦荟凝胶可有效地减轻过敏性哮喘的症状，其缓解哮喘发作可能是通过减轻过敏性哮喘豚鼠肺内炎性反应实现的。

【关键词】  芦荟；过敏性哮喘；豚鼠

 Effect of aloe gel on allergic asthma in guinea pigs

   XING Wen-juan,YANG Lu,DING Ming,et al.Department of Stomatology, Fourth Military Medical University of Chinese PLA，Shanxi 710032, China 

    【Abstract】  Objective  To investigate the effects of aloe gel on allergic asthma in guinea pigs.Methods  25 guinea pigs were divided into three groups randomly: asthma group（n=10）, aloe group （n=10）and the control group（n=5）. The guinea pigs were sensitized with injection intraperitoneally with 10% ovalbumin （OVA） and 1mg/mL aluminum hydroxide, then the antigen OVA was used for the second challenge two weeks later to establish the asthma guinea pig model. The guinea pigs of aloe group were given aloe by gavage every other day for two weeks, and those of other two groups were given saline. The differences in the behavior science and the count of eosinophil in blood and bronchoalveola lavage fluid （BALF） were compared among the three groups.Results  There were significant differences among three groups in the behavior science and the count of eosinophil in blood and BALF （P<0.05）.Conclusion  Our findings indicate that aloe gel can effectively alleviate the symptoms of allergic asthma in guinea pigs, and aloe may play its protective role by relieving inflammation.

  【Key words】  aloe; allergic asthma; guinea pig

   过敏性哮喘是临床上常见的一类病理性免疫反应，引起反复发作性的喘息、气急、胸闷或咳嗽等症状。长期反复发作可致胸廓变形、弥漫性肺气肿等严重后果。目前，临床用以治疗的组织胺H1受体阻断剂和糖皮质激素类等药物都有较多不良作用。芦荟是一种药用价值很高的植物，近年来国内外对芦荟的应用研究已成为热点，但有关芦荟对过敏性哮喘的影响尚未见报道。本实验从行为学和临床检验学观察芦荟对豚鼠过敏性哮喘的影响。

　 1  方法与材料

      1．1  材料  采用25只豚鼠（第四军医大学实验动物中心提供），体质量230～280g，雌雄不限。库拉索芦荟（陕西省西安市植物园），OVA（Ⅱ级，Sigma公司）。

      1．2  方法  25只豚鼠分哮喘组（n=10）、芦荟组（n=10）、正常组（n=5）3组做如下处理：（1）哮喘组（模型制作参照文献［1～3］改良）:第1、6、10天10% 卵蛋白生理盐水200mg/kg合并等体积1mg/ml氢氧化铝腹腔注射，第1～16天隔天生理盐水灌胃，2周后用1%卵蛋白生理盐水溶液雾化吸入连续2天,每天1次，每次3min。（2）芦荟组：除第1～16天隔天2g芦荟凝胶匀浆灌胃外，其余处理同哮喘组。（3）正常组：第1、6、10天腹腔注射生理盐水，第1～16天隔天生理盐水灌胃。2 周后用生理盐水溶液雾化吸入连续2天,每天1次，每次3 min。各组第15、16天雾化吸入后行为学观察各30min。第16天观察完豚鼠哮喘症状后乌拉坦麻醉，取颈静脉血，处死后取肺及支气管组织甲醛固定，进行嗜酸粒细胞计数。

      1．3  监测指标

      1.3.1  哮喘症状评分［4］  记录每次攻击后哮喘发生情况,共分四级：一级为呼吸困难；二级为呼吸困难+咳嗽；三级为呼吸困难+咳嗽+跌倒；四级为死亡。

      1.3.2  嗜酸粒细胞计数［5］  颈静脉取血，用Hinkelman稀释液稀释后用血细胞计数板进行嗜酸粒细胞计数。

      1.3.3  肺泡灌洗液（BALF）采集与细胞计数  暴露豚鼠气管、肺，用丝线结扎右肺门处，行气管插管灌洗左肺。灌生理盐水5ml（抽吸2次）×2次，灌洗回收率大于80%，4℃ 下4000r×10min离心，沉淀细胞以Hank’s液处理后将细胞浓度调至2×109/L，涂片，瑞氏染色，计数嗜酸粒细胞。

      1．4  统计学处理  哮喘症状评分采用秩和检验，嗜酸粒细胞计数采用方差分析和SNK-q检验。

　 2  结果

      2．1  哮喘发生症状  正常组表现正常，无哮喘症状发生，芦荟组与哮喘组两组豚鼠在第15、16天吸入OVA雾化气体时，均表现出挠鼻、咳嗽、喘息、紫绀、呼吸困难、烦躁、瘫软等症状。芦荟组症状较哮喘组轻。其中哮喘组两只豚鼠在第一次诱发哮喘后死亡（具体分级情况见表1，正常组不比较症状）。表1   哮喘组与芦荟组哮喘症状比较 注：第一次诱发哮喘，芦荟组vs哮喘组，P<0.05； 第二次诱发哮喘，芦荟组vs哮喘组，P<0.05

      2．2  颈静脉血嗜酸粒细胞计数  见表2。哮喘组与正常组对比外周血和BALF中嗜酸粒细胞计数差异有显著性（P<0.05），芦荟组与哮喘组对比外周血和BALF中嗜酸粒细胞计数亦有明显差异（P<0.05）。表2   三组嗜酸粒细胞计数比较 注：与正常组比较，aP<0.05；与哮喘组比较，bP<0.05

      3   讨论

　　 过敏性哮喘现在受到越来越多的关注。芦荟是一种具有抗炎、抗肿瘤、抗病毒、降血糖和降血脂等多种药理作用的植物［6］，芦荟凝胶中的多糖、糖蛋白以及汁液中的多种成分有免疫调节作用［7］，而芦荟几乎没有毒副作用［8，9］。但国内外尚未见有关芦荟对过敏性哮喘的报道。  本实验采取的模型制作方法是常用的哮喘模型制模方法。在第15、16天的二次攻击中，哮喘组、芦荟组两组豚鼠均出现不同程度的哮喘症状，并且在颈静脉取血嗜酸粒细胞计数中，发现有大量的具有过敏反应特征的嗜酸粒细胞。哮喘组与正常组对比哮喘症状和嗜酸粒细胞均有明显差异（P<0.05）。哮喘组豚鼠外周血和BALF中嗜酸粒细胞明显增多，符合过敏性哮喘的表现。以上可说明，模型制作是成功的。  过敏性哮喘是由于外界抗原刺激，而导致机体多种炎症细胞共同参与的一种变态反应。速发哮喘反应主要由肥大细胞介导，而迟发哮喘反应主要由嗜酸粒细胞介导。嗜酸粒细胞浸润是哮喘的基本特征。目前认为大多数细胞最终通过嗜酸粒细胞而产生效应，嗜酸粒细胞是哮喘气道炎症的主要效应细胞。嗜酸粒细胞除释放多种炎症介质外,尚能产生嗜酸粒细胞阳离子蛋白等多种毒性蛋白，直接引起支气管平滑肌收缩、血管通透性增高和腺体分泌增加。3组嗜酸粒细胞计数经方差分析有明显差异（P<0.05），芦荟组嗜酸粒细胞比哮喘组明显减少（P<0.05）。由哮喘症状可见，芦荟组哮喘症状明显轻于哮喘组（P<0.05）。由此可见，芦荟可对过敏性哮喘的豚鼠有明显的保护作用，能明显减轻豚鼠过敏性哮喘的症状。  现目前芦荟预防过敏性哮喘的机制尚不明确，有可能与抑制肥大细胞脱颗粒以及纠正Th1/Th2失衡有关。肥大细胞在过敏性反应中发挥着重要作用，其脱颗粒释放各种递质导致微血管通透性增加、黏膜水肿、分泌增加,引起相应气道症状，且能释放多种细胞因子,趋化嗜酸粒细胞等多种炎性细胞，也进一步引起肥大细胞脱颗粒和释放递质。有研究表明,芦荟中的一种糖蛋白能强烈抑制被Ag-Ab反应激活的肥大细胞释放递质［10］。另有研究发现，芦荟能使IL-4 mRNA水平下调, IL-2 mRNA 水平上调,纠正失衡的Th1/Th2 细胞因子网络,使体内Th细胞的分化偏移发生逆转,发挥局部和全身免疫调节作用［11］。此外，嗜酸粒细胞等炎症细胞从外周循环血液聚集到气道，是引起气道炎症、气道高反应性和迟发反应的关键效应细胞。自国外学者发现哮喘患者外周血和BALF中EOS明显增多后，大量研究表明：哮喘患者的气道以EOS持续浸润为特征，哮喘发作时患者外周血及气道内EOS均明显增多，而病情缓解时EOS又明显减少。因此，降低外周血及BALF中嗜酸粒细胞的数量，可减轻气道黏膜水肿、上皮破坏、微血管渗出等，从而减轻支气管腔的狭窄。本实验中，芦荟可能通过降低外周血及BALF中的嗜酸粒细胞的数量发挥其抗哮喘的作用。  综上所述，芦荟对过敏性哮喘的豚鼠有很明显的保护作用，这为临床工作中过敏性哮喘的保护提供了借鉴。

【参考文献】
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7 Son Won Byeon，Ronald P Pelley，Stephen EUllrich，et al．Aloe Barbadensis extracts reduce the production of interleukin-10 After exposure to ultraviolet radiation．The Journal of Investigative Dermatology,1998，110（5）：811.

8 黄祥远.芦荟药理研究及临床应用概况.右江医学,2006,34 （5）:550-552.

9 周忠光，苏云明，王志国，等.芦荟毒理作用研究. 哈尔滨商业大学学报（自然科学版）,2006,22（2）:7-8;11.

10 Ro JY, Lee BC ,Kim JY，et al. Inhibitory mechanism of aloe single component （alprogen） on mediator release in guinea pig lung mast cells activated with specific antigen-antibody reactions. J Pharmacol Exp Ther,2000,292：114-121.

11 于洪伟，董震，杨占泉.芦荟治疗大鼠实验性变应性鼻炎的分子生物学研究．临床耳鼻咽喉科杂志,2002,16（5）:229-231.

（编辑：邓 锋）

作者单位：710032 陕西西安，第四军医大学口腔医学系（△教学实验中心，通讯作者）