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【摘要】 近年来国内外掀起了对银杏叶提取物（EGB）研究的热潮，银杏叶用途广泛，有“活化石”之称。本文从银杏叶的主要有效成分出发，来探讨研究银杏叶有效成分的提取分离及银杏叶提取物主要的药理作用和应用。
【关键词】 银杏叶 有效成分 药效作 提取物 应用
银杏作为药用植物由来已久，是迄今为止银杏科仅存的一个属。《本草纲目》记载其性味甘苦而涩，入肺、肾二经，有定喘止咳、止带、缩尿的作用。其作为传统的植物药具平喘、润肺止咳等功效。随着银杏叶生物活性物质及其药理作用、保健作用、营养价值的不断深入研究，国内外都开发生产出各种银杏食品、保健品、药品等，具有巨大的社会经济效益。
1 银杏叶的有效成分
银杏叶主要含银杏黄酮、萜类两大主要成分及其他一些成分。
1．1 银杏黄酮类 银杏黄酮类是低分子量化合物，均衍生于其母体化合物黄酮，以糖苷和甲基化合物形式存在［1］。已知银杏叶含黄酮类化合物35种，其中双黄酮6种、银杏黄酮苷元7种、黄酮苷17种。
1．2 萜类 萜类成分包括银杏内酯类和双叶内酯。银杏内酯具有独特的十二碳骨架结构，嵌有一个叔丁基和六个五元环。
1．3 其他有效成分 除上述两大类成分外，还含有8种烷基酚酸类成分。即：4-羟基银杏酸（5a，6b），银杏酸（6a，6b，6c）和银杏酚（7a,7b,7c）。银杏叶还存在多种有机酸，包括17种氨基酸，白果醇，白果酮，十七碳烯水杨酸，3，3'-二甲氧基-4，4'-二烯基。二苯乙烯，生物碱，维生素，叶绿素，胡萝卜素，游离的矿物质Ca、Zn、P、B、Se，其他微量元素Fe、F、Cr的含量也较高［2］。
2 银杏叶有效成分的提取方法
2.1 水提取法 以水为溶剂的提取有水浸提取法和水蒸汽蒸馏法两种：这两种方法使用设备简单，成本低，产品安全，但是浸出率低，水溶性杂质含量高且不易去除，资源浪费严重，现在很少使用。
2.2 有机溶剂萃取法 这是目前国内外普遍采用的方法。提取的工艺程序较多，提取步骤大致可归纳为两步：第一步是有机溶剂萃取得粗提物。这种方法是将银杏叶干燥、粉碎过筛，然后用有机溶剂浸泡、萃取、过滤，滤液中的有机溶剂用减压蒸馏去除，得粗提物浸膏，通常为棕黑色，其中黄酮类含量为7％～10％，萜类内酯为0.6％～1％。这种方法影响有效成分产率主要因素是有机溶剂的选取，研究表明用不同的有机溶剂提取对黄酮产率的影响各不相同，其中以甲醇为溶剂，黄酮得率为17.96mg／g；以60％丙酮为溶剂，黄酮得率为18.11mg／g；以（NH4）2 SO4为溶剂，黄酮得率为6.03mg／g；以乙醇为溶剂，不同浓度乙醇对黄酮得率有一定影响，最佳萃取条件为：以70％乙醇为溶剂，温度控制在70℃，黄酮得率为17.87mg／g，以90％乙醇为溶剂，温度控制在50℃，黄酮得率为16.79 mg／g。研究发现丙酮提取效果最好，但丙酮成本较高；70％乙醇成本低，提取液黄酮含量较高，且蛋白质含量少（即纯度高），是较好的提取溶剂，值得推广。第二步是在第一步基础上进一步精制。此过程有液-液萃取和树脂吸附法两种。液-液萃取虽然设备简单，工艺成熟，但成本较高，操作繁琐，且有机溶剂残留多，污染环境，不宜工业化生产。葛洪等在传统工艺的基础上，采用新型膨化和连循环逆流6级萃取工艺，萃取率（以黄酮计）达99％，此方法操作简单，生产稳定［3］。王若谷等研究发现树脂吸附法近年来研究较多，相对于液—液萃取操作程序简单，成本低，回收率高，有机溶剂残留少，影响此工艺提取率的因素主要是树脂、溶剂浓度、溶剂量和温度。用此方法提取黄酮的得率为27.41％，内酯得率8.7％，超过国际标准。应国清等以水为溶剂，以D 201型树脂为吸附剂，20％乙醇为脱洗剂进行分离纯化，总黄酮的得率为71％［4］。
2.3 超临界CO2萃取法 利用超临界作为萃取剂从液体中提取某种高沸点成分，以达到分离纯化的目标。它综合了气相色谱法（GC）和高效液相色谱法（HPIC）的优点，近年来在中药现代化的产业开发中，此项分离技术研究和应用比较广泛。与溶剂法相比，该方法具有提取效率高，无溶剂残留，无毒性，活性成分和热不稳定性成分不易被分解破坏而保持其天然的特征等优点，同时还可以通过控制临界温度和压力以及加入极性改良剂（改变CO2极性）等达到分离和纯化的目的［4］。影响提取工艺效果的因素主要有萃取压力、萃取温度、CO2的流量和改良剂（调整CO2和溶剂极性）。侯峰等通过改良CO2的极性,在提取的过程中有效去除银杏酚酸而活性成分银杏黄酮、内酯几乎没有损失。邓启焕等以银杏叶有效成分分离为对象，建立了一套超临界流体小试、中试装置和实验方法，所得的提取物中银杏黄酮含量为28％，银杏内酯含量为7.2％，均高于国际现行公认标准。国内学者用该法与传统的溶剂提取法相比较，认为超临界CO2萃取法的回收率几乎高于传统溶剂法的一倍，但在萃取的过程中必须有改良剂的参与［5］。
3 银杏叶提取物的药用价值
3.1 对中枢神经系统的作用 应用银杏叶提取物（EGB-761）治疗脑缺血、缺氧的动物发现，EGB-761可升高动物脑组织葡萄糖浓度，大脑皮质磷酸肌酸和ATP的含量，降低乳糖浓度。EGB-761对小鼠局部缺血缺氧脑组织ATP酶有保护作用。这些都有效地调节了脑组织能量代谢［6］。阻断小鼠双侧颈动脉10min后恢复灌注，小鼠记忆力受到明显损伤。预先给予EGB-761（50，100mg／kg）的小鼠组织记忆力明显优于一般小鼠。提取物中黄酮醇可能是增加记忆力的主要成分，提取物EGB-761对脑血管疾病导致的记忆力下降有临床应用价值。EGB-761可提高成年Swiss小鼠学习和行为能力，该作用与海马的组织结构，特别是苔藓纤维有密切的联系［7］。钙拮抗剂作为神经元保护剂，长期使用造成神经元损伤，且有浓度和时间依赖性。B-50的免疫活性和细胞内Ca2+浓度在维拉帕米作用于神经元48h后均降低。EGB-761可减少维拉帕米对神经元的损伤，推测EGB-76l这种作用以减轻维拉帕米引起的细胞内钙阻断作用和轴突延长部分的抑制作用有关。因此，建议临床上维拉帕米和EGB-76l联合用药。
3.2 抗炎作用 银杏叶中黄酮衍生物在体内及体外有抗炎及免疫调节活性。目前体内研究的报告较少。其中已证实双黄酮类及银杏叶黄素为大鼠血小板分泌的Ⅱ型磷酯酶，A2（SPLA2）抑制剂。银杏黄素及其酮酚异构体异银杏黄素可抑制二萜甾醇酯或钙离子载体（A2318）诱发的大鼠腹膜巨噬细胞中花生四烯酸或代谢物的释放，也可抑制T或B细胞促细胞分裂原诱发的淋巴细胞增殖，表明银杏黄素具有体内抗关节炎活性。穗花粉黄酮和其他一些双黄酮局部或腹膜内注射给药，对急性炎症动物模型有抗炎活性，但未见报道双黄酮对慢性炎症的抗炎活性。因此，Kim H K等首次研究了银杏黄素在体内对慢性炎症的抗关节炎和止痛活性对佐剂诱发的关节炎动物模型（大鼠）腹膜内注射银杏黄素5、10、20mg/（kg·d）。结果显示：银杏黄素抑制活性分别达到80％～71％和86％，剂量10～20mg/（kg·d）时，具有强烈抗关节炎活性，而对照组泼尼松龙［5mg/（kg·d）］抑制活性为79％。通过对小鼠体重、胸腺及脾重的影响，表明银杏黄素的抗炎作用不同于传统的固醇类，如泼尼松龙。银杏黄素口服给药5～20mg/（kg·d）未发现有显著的抗关节炎活性，膝关节注射银杏黄素30天后，可明显减轻关节炎症，消除侵蚀和炎性细胞浸润。在止痛活性实验中，银杏黄素在腹膜内注射，对醋酸调发的动物扭体模型有剂量依赖性抑制作用，ED50值为8.9mg／kg，对照组吲哚美辛的ED50值为3.8mg／kg，表明银杏黄素对慢性炎症有强烈的止痛和抑制关节炎活性，有可能成为具有止痛作用的抗关节炎药物［8］。
3.3 对血流变学的影响 体外实验表明，EGB可明显延长大鼠的复钙时间，减缓血流粘弹性的增加速率，降低血液的最大粘弹性。EGB（ivl00，200mg／kg）可明显延长小鼠血液凝固时间,对血液纤维网的形成以及血凝块的退缩均有明显抑制作用，体外能抑制高、低浓度ADP诱导的血小板聚集，并对低浓度ADP诱导的血小板聚集有促进作用［9］，减少血小板粘附和聚集以及微血栓的形成，该作用与EGB抑制内源性ADP的释放密切相关［10］。
3.4 降血脂作用 高血脂及动脉硬化与心脑血管疾病有密切关系。EGB能有效降低血脂水平，其中可明显降低血清甘油三酯及低密度脂蛋白量，改善动脉粥样硬化状态下的脂质代谢。另有报道EGB761可抑制脂质过氧化，并作用于血管，减少脂质沉积。
3.5 对抗抑郁剂诱发的性功能障碍作用 一项开发性实验研究中发现，银杏叶对抗抑郁剂诱发的性功能障碍疗效显著，总有效率高达84％。男女患者有效率分别为91％和76％，对性欲反应周期的四个阶段均有积极的作用。其药理机制与EGB对PAF、前列素、一氧化氮、5-HT和去甲肾上腺素受体的调节作用密切相关［11］。
3.6 致突变作用 EGB为棕黄色粉，内含槲皮素10.30％，奈素10.50％和异鼠杏素3.19％。银杏叶提取物剂量达7.5g／kg 时，小鼠微核试验结果阴性［12］。
4 银杏叶提取物的应用
4.1 加工成超微粉末加入食品 将银杏叶超微粉碎，按5％～10％添加于糕点、饼干、面条、糖果、冰淇淋中，即可加工成具有保健作用的食品［13］。
4.2 银杏叶片剂、胶囊 银杏叶片剂、胶囊的主要原料为银杏提取物。目前国内生产银杏提取物的企业中，大多数采取乙醇提取和树脂吸附处理这两步基本工艺再加上适当的其他纯化步骤，可以获得黄酮苷含量24％以上，银杏内酯6％以上的银杏叶提取物。
4.3 银杏叶口服液 银杏叶经热水提取过滤，与蜂蜜混合，用适量糖和柠檬酸调到酸甜适度，升温至65℃保持0.5h后装入安瓿封口，经杀菌即得成品。
5 结语
银杏叶提取物成分复杂，对人体具有广泛的药理作用，且副作用较少。国外标准提取物成分相对稳定（代号EGB-716），含黄酮类24％，萜类6％（银杏苦内酯和白果内酯，其中银杏苦内酯0.8％），花青素7％及其他，但仍是多种成分的混合物。德国卫生部曾对近期临床应用EGB716的结果进行统计表明，EGB的主要副作用是胃肠道不适、皮肤过敏、头痛、眩晕和心悸，但发生率很低。总体看来，银杏叶提取物的研究和应用仍具有广阔的前景
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13 张云.银杏叶研究进展及应用.山西食品工业，2001，（1）：17-18;22.
（编辑：齐 永）
作者单位：430200 湖北武汉，武汉市江夏区中医医院 湖北武汉，武汉市江夏区第一人民医院