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首页医源资料库在线期刊中华实用医药杂志2009年第9卷第8期

高效液相色谱法测定解表清肺丸中黄芩苷的含量

来源:中华实用医药杂志
摘要:【摘要】目的建立高效液相色谱法测定解表清肺丸中黄芩苷的含量。方法采用HPLC对黄芩苷进行含量测定,流动相为甲醇-水-磷酸(50:50:0。结果黄芩苷线性范围为0。结论本法结果准确,灵敏度高,重复性好,方法简便可行,为控制解表清肺丸的质量提供了科学依据。...

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【摘要】  目的 建立高效液相色谱法测定解表清肺丸中黄芩苷的含量。方法 采用HPLC对黄芩苷进行含量测定,流动相为甲醇-水-磷酸(50:50:0.2);检测波长为277nm;柱温40℃,进样量10μl。 结果 黄芩苷线性范围为0.01005~0.1608μg/ml(r=0.9999),平均回收率101.38%,RSD%为0.97%。 结论 本法结果准确,灵敏度高,重复性好,方法简便可行,为控制解表清肺丸的质量提供了科学依据。

【关键词】  解表清肺丸;黄芩苷;高效液相色谱法

【Abstract】 Objective To establish an HPLC identification method of Jiebiao Qingfei Pill.Methods HPLC was used to detect the content of baicalin. The mobile phase of methanol-water-phosphoric acid (50:50:0.2); the detection wavelength was 277nm; column temperature at 40℃.Results The baicalin linear in the range of 0.01005~0.1608μg/ml (r=0.9999), the average recovery was 101.38%, RSD percentage was 0.97%. Conclusion The method is reliable and convenient, and it provides scientific foundation to control the quality of Jiebiao Qingfei Pill.

  【Key words】 Jiebiao Qingfei Pill; baicalin; HPLC

  解表清肺丸由黄芩、紫苏叶、桑叶、桔梗、前胡、青黛、天花粉等十三味中药组成。本品具有解表清热、止嗽化痰等作用。用于小儿内热外感引起的头痛身热、咳嗽痰盛、气粗作喘、咽喉疼痛、烦躁不安。黄芩中含有黄芩苷[1],经文献检索,对其中主要成分的高效液相色谱测定方法报道很多[2,3]。为了确保药品质量使临床疗效稳定可靠,本文以高效液相色谱法(HPLC)测定了黄芩苷的含量,为控制其内在质量提供了科学依据。本方法操作简便、快捷,稳定性好,测定结果准确、可靠,可作为本品质量控制的方法。

  1 仪器与试药

  1.1 仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪;VWD紫外检测器,R200D沙多利斯电子分析天平;KQ-300VDB超声波清洗器。

  1.2 试药 黄芩苷对照品(批号:110715-200212,购自中国药品生物制品检定所);磷酸(分析纯)(为北京化工厂生产);甲醇(色谱纯)(为Fisher Chemicals生产);解表清肺丸三批(同仁堂制药厂提供,批号:6013813、6013814、6013815)。

  2 实验方法与结果

  2.1 溶液的制备

  2.1.1 对照品溶液 精密称取黄芩苷对照品10.05mg,置25ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度。摇匀,作为浓溶液。精密量取浓溶液1.0ml,置10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度。摇匀,作为黄芩苷对照品溶液。

  2.1.2 供试品溶液 取装量差异项下的内容物,混匀,取约1g,精密称定,置25ml量瓶中,加入70%乙醇适量,密塞,超声处理(功率300W,频率45kHz)30min,放冷至室温,用70%乙醇定容至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液2ml,置10ml 容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液作为供试品溶液。

  2.1.3 阴性样品溶液 按处方比例,取不含黄芩成分的阴性制剂,同供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。

  2.2 色谱条件 色谱柱:ZORBAX SB-C18分析柱(4.6×250mm,5μm);流动相:甲醇-水-磷酸(50:50:0.2);流速:1.0ml/min;检测波长:277nm;柱温:40℃;进样量:10μl。分别取黄芩苷对照品溶液、供试品溶液(批号:6013814)、阴性对照溶液各10 μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,测得的分离色谱图如图1显示。结果表明,黄芩苷与其他成分分离良好,不干扰测定,测得理论塔板数按黄芩苷峰计算不低于2500,黄芩苷峰与相邻峰的分离度大于1.5,符合要求。

  图1 HPLC色谱图2.3 线性关系 精密吸取黄芩苷对照品浓溶液0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml分别置10ml量瓶中,各加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为标准溶液。照上述色谱条件测定,记录色谱图,以进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,进行回归处理。得黄芩苷回归方程:Y=34104.14488X-9.3665, r=0.9999,n=6,表明黄芩苷在0.01005~0.1608μg的浓度范围内线性关系良好。

  2.4 回收率试验 采用加样回收试验法。精密称取已测定过黄芩苷含量的样品(批号6013814)6份,分别精密加入黄芩苷适量,按供试品溶液制备及上述色谱条件操作,依法制备、进样、记录色谱图、计算回收率,结果见表1。表1 解表清肺丸中黄芩苷加样回收测定结果 (n=6)

  2.5 稳定性试验 取供试品溶液(批号为6013814),照上述色谱条件,分别在0、1、4、9、20、24h依法测定,记录峰面积,结果峰面积的RSD%=1.35%(n=6)。表明在24h内基本稳定。

  2.6 精密度试验 取供试品溶液,按上述色谱条件重复进样6次,峰面积的RSD%=1.68%(n=6)。

  2.7 供试品含量测定 精密吸取黄芩苷对照品溶液和供试品溶液各10μl,按上述色谱条件测定,以外标法计算样品中黄芩苷的含量,共测定3批供试品。结果见表2。表2 供试品含量测定结果

  3 讨论

  3.1 提取溶剂的选择 在本试验中称取同一批号的样品,分别加入50%的乙醇、70%乙醇、95%乙醇及甲醇等溶剂,进行超声处理30min,按照“供试品含量测定”项下方法进行测定,结果表明,采用70%乙醇为溶剂,提取较完全且分离良好,峰形良好。同时由于本品从配制起到室温放置24h内测定同一浓度溶液的峰面积,RSD%=1.35%(n=6),表明所选溶剂可行,本方法有良好的稳定性。

  3.2 提取方法的选择 在本试验中称取同一批号的样品,采用70%乙醇考察了回流提取、超声提取、冷浸提取等方法,结果表明,超声处理30min相当于1g样品的峰面积最大,因此采用较为简便的超声处理提取方法。

  3.3 方法适用性 本法色谱条件与系统,能较好的将解表清肺丸中黄芩苷与其他成分完全分离,说明本法能准确地测定解表清肺丸中黄芩苷含量,结果稳定、重现性好。为解表清肺丸制剂的质量控制提供了可靠的依据。

【参考文献】
    1 国家药典委员会.中国药典,一部.北京:化学工业出版社,2005,211.

  2 杨娟,黄敬群,李红. HPLC法测定乳结消片中橙皮苷和黄芩苷的含量. 沈阳药科大学学报,2008,25(9):732-735.

  3 范强,孙毅坤,史新元,等. 高效液相色谱法测定国公酒中3种成分的含量. 药物分析杂志,2007,(7):958-960.

  

作者: 郭丽红,郭 琪,杨 莹 2011-6-29
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