高效液相色谱法测定泄痢保童丸中盐酸小檗碱的含量

【摘要】  目的 建立高效液相色谱法测定泄痢保童丸中盐酸小檗碱的含量。方法 采用ZORBAX SB-C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱，乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（30：70）为流动相，检测波长为277nm，流速1.0ml/min，柱温40℃，进样量10μl。 结果 盐酸小檗碱在0.0203～2.03μg范围内有良好的线性关系（r=1.0）。平均回收率102.30%，RSD%为1.04%。结论 本法结果准确，灵敏度高，重复性好，方法简便可行，可用于测定泄痢保童丸中盐酸小檗碱含量。

【关键词】  泄痢保童丸；盐酸小檗碱；高效液相色谱法

　　HPLC determination of Berberine hydrochloride in Xielibaotong pills

　　YANG Ying，GUO Qi，GUO Li-hong，et al.Institute for Drug and Instrument Control of Beijing Military Region of PLA，Beijing 100071，China

　　【Abstract】  Objective  To establish a HPLC method of Berberine hydrochloride in Xielibaotong pills.Methods  Analysis was carried out on a ZORBAX SB-18column（250mm×4.6mm，5μm）elute ，Acetonitrile-0.05mol/L Potassium Phosphate Monobasec acid(30：70)as the mobile phase; the detection wavelength was 265 nm and flow rate was 1.0ml/min.And the temperature of column at 35 ℃. The sample injection volume was 10mL.Results  The Berberine hydrochloride linear in the range of 0.0203～2.03μg.（r=1.0），the average recovery was 102.30%，RSD percentage was 1.04%.Conclusion  The method is simple，reliable and specific with good reproducibility，and can be used for determination the constituents in Xielibaotong pills.

　　【Key words】  Xielibaotong Wan;Berberine hydrochloride;HPLC

　　泄痢保童丸为《中华人民共和国卫生部药品标准》（中药成方制剂）第20册收载品种［1］，是由人参、黄连、木香、丁香、白术等二十二味药材组成的复方制剂，具有健脾化湿、温中止泻的作用。用于小儿脾胃虚弱引起的久泻久痢，腹中作痛，饮食少进，精神疲倦。方中主药黄连的有效成分为小檗碱、黄连碱、甲基黄连碱等生物碱类化合物，现代药理试验证明，小檗碱有抗微生物及抗原虫等显著作用，因此选取盐酸小檗碱作为质量控制的指标成分。为控制产品质量，确保临床疗效，本试验采用高效液相色谱法对主药黄连中的有效成分盐酸小檗碱进行了测定。

　　1  仪器、药品与试药

　　1.1  仪器  Agilent 1100高效液相色谱仪，VWD检测器，Agilent 1100色谱工作站，KQ－300VDB双频数控超声波清洗器，AX205DR梅特勒－托利多天平。

　　1.2  试药  甲醇为色谱纯，水为超纯水，磷酸二氢钾为分析纯。盐酸小檗碱对照品（批号10173-200208，供含量测定用，中国药品生物制品检定所提供）。

　　1.3  药品  泄痢保童丸（批号6013834，6013835，6013836）同仁堂制药厂。

　　2  方法与结果

　　2.1  溶液的制备

　　2.1.1  对照品溶液  精密称取盐酸小檗碱对照品10.05mg，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml含盐酸小檗碱0.0201mg）。

　　2.1.2  供试品溶液  取重量差异项下的本品，剪碎，取约0.1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入盐酸－甲醇（1：100）混合溶液50ml，称定重量，超声处理（功率300W，频率45kHz）30min，放冷至室温，再称定重量，用盐酸－甲醇（1：100）混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

　　2.2  色谱条件与系统适应性条件［2］  色谱柱：ZORBAX SB-C18 （250mm×4.6mm，5μm）分析柱；流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（30：70）；检测波长：265nm。流速1.0ml/min；柱温：35℃；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000，各组分的分离度应符合规定。结果见图1。图1  盐酸小檗碱高效液相色谱图    A.对照品溶液；B.供试品溶液；C.阴性对照溶液；1.盐酸小檗碱

　　2.3  专属性（空白对照试验）  按处方量配制缺黄连药材的阴性对照样品，照正文含量测定项下方法测定，比较了供试品溶液、盐酸小檗碱对照品溶液、阴性对照样品液的色谱图，结果在上述色谱条件下，样品中盐酸小檗碱峰与其他组分色谱峰能达到基线分离，阴性对照液中色谱峰对测定无干扰，见图1。

　　2.4  线性关系的考察  精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇溶解并制成每1ml 含0.203mg的溶液，作为储备液。分别精密量取对照品储备溶液0.1、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0ml置于10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。分别精密吸取上述对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，按“2.1.1”所述色谱条件测定峰面积，以进样量（μg）为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），得回归方程为Y=3817.603613X－11.07431084， r=1.0。结果表明：盐酸小檗碱在0.0203~2.03μg范围内有良好的线性关系。

　　2.5  稳定性试验  精密称取供试品（批号6013834）1.00261g，照“2.1.2”方法制备供试品溶液，精密吸取10μl，分别在0、2、4、10、22、24h进样，测定盐酸小檗碱的峰面积。结果表明，供试品溶液在22h内基本稳定，本方法有良好的稳定性。

　　2.6  精密度试验  取本品（6013834）的供试品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，盐酸小檗碱峰面积的RSD为1.54%。表明本方法精密度良好。

　　2.7  重复性试验  取本品（6013834），按“2.1.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，进样测定其含量，结果RSD为2.09%，重复性良好。

　　2.8  加样回收率试验  精密称取已知含量的同一批样品（批号6013834，含量为0.8063305mg/g）约0.5g（6份），精密称定，分别精密加入盐酸小檗碱对照品溶液（0.02024mg/ml）各25ml，按“2.1.2”项下方法制备供试液，进样测定，记录色谱图，计算回收率。结果盐酸小檗碱平均回收率（n＝6）为102.30%，RSD为1.04%。

　　2.9  含量测定  取本品3批，按“2.1.2”项下所述方法制备供试品，进样测定，计算盐酸小檗碱的含量，结果见表1。表1  泄痢保童丸的测定结果(略)

　　3  讨论

　　3.1  提取溶剂的选择  在本试验中称取同一批号的样品，分别加入稀乙醇、盐酸－甲醇（1：100）混合液及甲醇等溶剂，超声处理30min，按照“2.1.1”含量测定项下方法进行测定，结果表明，采用盐酸－甲醇（1：100）混合液为溶剂，提取较完全且分离良好，峰形良好。

　　3.2  提取方法的选择  在本试验中称取同一批号的样品，采用盐酸－甲醇（1：100）混合液考察了回流提取、超声提取、冷浸提取等方法，其提取效果以超声提取的总体效果为佳。同时还考察了以盐酸－甲醇（1：100）混合液为提取溶剂，不同提取时间（15、30、45min）的提取效果。结果选择30min。

　　3.3  流动相的选择［2］  参考文献《中国药典》2005年一部狼疮丸项下含量测定方法所用的流动相，分别采用乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾（30：70，25：75，35：65）为流动相，进行实验，结果表明以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾（30：70）为流动相时，盐酸小檗碱基线分离，且峰形较好，故选择流动相为乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾（30：70）。

　　3.4  最大吸收波长的选择  盐酸小檗碱对照品甲醇溶液（浓度为0.02046mg/ml）经紫外吸收光谱扫描，在265nm处有最大吸收，故确定检测波长为265nm。

　　3.5  方法适用性  本法色谱条件与系统，能较好地将泄痢保童丸中盐酸小檗碱与其他成分完全分离，说明本法能准确地测定泄痢保童丸中盐酸小檗碱含量，结果稳定、重现性好。为泄痢保童丸制剂的质量控制提供了可靠的依据。

【参考文献】
  1 国家药典委员会.中国卫生部药品标准中药成方制剂.北京：卫生部药典委员会，1998，175.

2 国家药典委员会.中国药典，一部，2005年，北京：化学工业出版社，2005，572－573.