GC法测定奥硝唑注射液中丙二醇和二甘醇的残留量

【摘要】  目的 采用气相色谱法测定奥硝唑注射液中丙二醇和二甘醇的残留量。方法 采用DB-WAXETR毛细管柱，程序升温：初始温度80℃，以15℃/min升至220℃，保持5min;FID检测器温度：250℃;气化室温度：230℃;载气：氮气。结果 丙二醇线性范围为60.07～540.64mg/ml(r=0.9999，n=5)，平均回收率为99.2%，RSD为0.89%(n=9);二甘醇线性范围为4.12～37.08μg/ml(r=0.9990 ，n=5)。结论 本法准确、简单、灵敏度高，适合本品中丙二醇和二甘醇残留量的测定。

【关键词】  奥硝唑注射液;丙二醇;二甘醇;GC法

　Determination of propylene glycol and diethylene glycol in ornidazole injection by GC

　　LU Hong-guo，WEI Chun-yan，WANG Yan-song，et al. State Key Laboratory for Advanced Pharmaceutical, Formulation with High Technology，Yangtze River Pharmaceutical Group, Taizhou 225321,China

　　【Abstract】 Objective The purpose is to develop GC method for the assay of propylene glycol and diethylene glycol in ornidazole injection.Methods The test used DB-WAXETR capillary column. The initial temperature of column was 80℃,the temperature of column easily raised up to 220℃ with a rate of 15℃/min and kept for 5 min. The flame ionization detector was used ,and the temperature was 250℃.The temperature of injector was 230℃.The carrier gas was nitrogen.Results The linear range of propylene glycol was form 60.07～540.64mg/ml(r=0.9999，n=5). The average recover was 99.2% (RSD=0.89%, n=9). The linear range of diethylene glycol was form 4.12～37.08μg/ml(r=0.9990, n=5).Conclusion This method is simple, accurate and suitable for the assay of propylene glycol and diethylene glycol.

　　【Key words】 ornidazole injection; propylene glycol; diethylene glycol; GC method

　　奥硝唑是一种强力抗厌氧菌及抗原虫感染的药物，也是继甲硝唑后新研制成的疗效更好、疗程更短、耐受性更好、体内分布更广的第三代硝基咪唑类衍生物[1]。其抗菌活性与分子结构中的硝基有关，当药物进入菌体后，其分子中的硝基被细菌的硝基还原酶还原而产生一个短寿命的自由基，该自由基具有很强的细胞毒作用，可破坏细菌的DNA，从而发挥杀菌作用[2]。随着注射剂质量研究与标准的提高，本文就奥硝唑注射液中丙二醇和二甘醇进行了限度检查，以确保其质量的安全性和稳定性。

　　1 仪器与试药

　　Agilent 6890N气相色谱仪;氢火焰离子化检测器。丙二醇对照品(国药集团化学试剂有限公司/沃凯)，批号：20090825，纯度为99.89%;二甘醇对照品(国药集团化学试剂有限公司/沃凯)，批号：20100412，纯度为99.68%;奥硝唑注射液(自制，批号：10012201，10012502，10012203，规格：5ml：0.25g);甲醇(色谱纯)。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件[3～5] 色谱柱： DB-WAXETR(0.32mm×30m，0.25μm)，柱温：初始温度80℃，以15℃/min升至220℃，保持5min;FID检测器温度：250℃;气化室温度：230℃;载气：氮气。

　　2.2 对照品溶液的制备 取丙二醇对照品适量，精密称定，用甲醇稀释并制成每1ml中含300mg的溶液，作为丙二醇限度检查的对照品溶液。另取二甘醇对照品适量，精密称定，用甲醇溶解并稀释成每1ml中含20μg的溶液，作为二甘醇限度检查的对照品溶液。

　　2.3 供试品溶液的制备 精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml置20ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为丙二醇限度检查的供试品溶液。取本品2g，精密称定，置10ml量瓶中，用甲醇溶解并定量稀释至刻度，摇匀，作为二甘醇限度检查的供试品溶液。

　　2.4 线性关系试验 精密称取丙二醇对照品75.09mg，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并定量稀释至刻度，摇匀，作为线性试验的母液。再分别精密量取1.0ml、3.0ml、5.0ml、7.0ml及9.0ml,分别置于25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试溶液。精密量取各浓度溶液1μl，按上述色谱条件测定峰面积。以对照品峰面积A对浓度C进行线性回归，得丙二醇的回归方程为A=3.75C+15.13(r=0.9999，n=5)。表明丙二醇在60.07～540.64mg/ml线性范围内线性关系良好。

　　另精密称取二甘醇对照品51.50mg，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并定量稀释至刻度，摇匀，再精密量取5ml置50ml量瓶中，用甲醇定量稀释至刻度，摇匀，作为线性试验的母液。再分别精密量取1.0ml、3.0ml、5.0ml、7.0ml及9.0ml,分别置于25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试溶液。精密量取各浓度溶液1μl，按上述色谱条件测定峰面积。以对照品峰面积A对浓度C进行线性回归，得二甘醇的回归方程为A=1.95C+12.08(r=0.9999，n=5)。表明二甘醇在4.12～37.08μg/ml线性范围内线性关系良好。

　　2.5 精密度试验 分别取丙二醇和二甘醇对照品溶液，重复进样6次，记录色谱图，量取峰面积，计算得丙二醇的RSD=0.36%，二甘醇的RSD=1.12%。结果表明溶液精密度情况良好。

　　2.6 稳定性试验 取丙二醇和二甘醇对照品溶液分别于0、2、4、6、8、12h进样1μl，记录色谱图，量取峰面积，计算得丙二醇的RSD=0.85%，二甘醇的RSD=1.24%。结果表明溶液稳定性情况良好。

　　2.7 重复性试验 取同一批供试品(批号：10012201)，平行制备6份，照样品限度测定方法测定，量取峰面积，丙二醇的检出量为295.6mg/ml，RSD=1.85%，二甘醇未检出。

　　2.8 回收率试验 按本品规格的80%、100%、120%设计回收率试验，共测定3组9份样品，结果低、中、高3 种浓度溶液的丙二醇回收率分别为100.2%，100.5%，100.4%;RSD分别为1.04%，0.62%，0. 88%;丙二醇平均回收率(n=9)为100.4%。结果表明本检测方法准确。

　　2.9 检测限的测定[6] 取线性试验项下的最低浓度供试溶液，用甲醇逐级稀释，进样1μl，记录色谱图。当色谱峰的峰高约为噪音的3倍时(S/D=3)，测得丙二醇和二甘醇的检测限分别为1.8ng和0.85ng。

　　2.10 三批样品测定 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液1μl，按上述色谱条件检测，按外标法以峰面积计算，即得。三批样品检测结果见表1。表1 三批样品检测结果

　　3 讨论

　　根据上述试验及三批样品的检测结果，丙二醇的限度暂定为250～350mg/ml，二甘醇的限度暂定为不超过0.01%(w/w)。本实验建立了GC法测定奥硝唑注射液中丙二醇和二甘醇的残留量，经方法学研究，该法测丙二醇和二甘醇的线性关系、稳定性、回收率良好，准确度高，专属性强，可有效控制注射液的质量，便于推广和使用。

【参考文献】
  　　1 杨少武,曾祥平.奥硝唑复方制剂的开发及临床应用.长江大学学报,2009,12(6):210-211.

　　2 胡正波,冯海云,李航.奥硝唑注射液与18种药物配伍的稳定性.西南国防医药,2007,17(5):673-674.

　　3 李玮玲,邱娟.GC法测定葛根素注射液中丙二醇和二甘醇的残留量.中国药事,2008,22(6):479-480.

　　4 国家药典委员会.中华人民共和国药典,2010年版(二部).北京:化学工业出版社,2010,1190.

　　5 何建平,叶兴法.气相色谱法测定药物中二甘醇的含量.中国现代应用药学杂志,2007,6(24):232-233.

　　6 金鹏飞,何笑荣,邹定,等.GC-MS法应用于丙二醇的质量控制及二甘醇检查.药物分析杂志,2008,28(6):942-944.