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【摘要】 目的 观察更年健体胶囊的免疫调节作用。方法 各组动物每天灌胃一次[灌胃容量均为0.2ml/(10g·bw)]。 连续30天后对动物进行各项免疫指标测定， ConA 诱导小鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT)测定，小鼠碳粒廓清试验，抗体生成细胞检测(PFC)。结果 更年健体胶囊能提高小鼠单核-巨噬细胞系统对碳粒的廓清率;能提高抗体生成细胞数。而对细胞免疫功能未见有明显影响。结论 更年健体胶囊具有提高小鼠免疫调节功能的作用。
【关键词】 小鼠;免疫调节
【Abstract】 Objective To observe the effects of Gengnianjianti capsule on immunologic function in mice.Methods All animals with intragastric administration 30 days successively[0.2ml/(10g·bw)]and then determined these indexes with MTT, carbonic clearance, PFC.Results Gengnianjianti capsule has remarkably increased the clearance rate of iv charcoal particles and the numbers of PFC, but the cellular immunity has no significant changed.Conclusion Gengnianjianti capsule could improve the immunity of mice.
【Key words】 mice; immune regulation
更年健体胶囊系由麦冬、五味子等多味补益药物依据中医组方的基本原则组成的中药方剂。我们从免疫药理学的角度就该胶囊对小鼠免疫功能的调节作用进行观察。
1 材料与试剂
1.1 动物
由第四军医大学实验动物中心提供健康成年二级昆明种雌性小白鼠40只(医动字08-013号)，体重18～22g。饲料、垫料来源同上。
1.2 药品
更年健体胶囊内容物为棕褐色粉末,由陕西利威尔制药有限公司提供。人体推荐量为每人每日4g[4g/(kg·bw·d)]。用蒸馏水配制各剂量浓度。
1.3 仪器与试剂
SRBC、印度墨汁、琼脂糖、扭力天平、离心机、CO2恒温培养箱、恒温水浴箱、培养皿、小牛血清、HankS液、MTT液、ConA、RPMI1640培养液、甲醇、丙酮、酸性异丙醇、血球计数盘、752-C紫外可见分光光度计、24孔培养板、补体(豚鼠血清)等。
2 方法
2.1 动物分组及剂量选择
将120只雌性小鼠共分4项试验。每项用40只小鼠并随机分为四组, 每组10只。各项试验的剂量设计均为：120、60和30g/(kg·bw)，三个剂量组另设溶剂对照组(蒸馏水)。其剂量分别相当于人体推荐用量的30、15、7.5倍。对照组给予等容量蒸馏水。
2.2 实验方法
按文献方法[1]，依上述剂量各组每天灌胃一次[灌胃容量均为0.2ml/(10g·bw)]。连续30天后对动物进行各项免疫指标测定，试验方法如下。
2.2.1 ConA 诱导小鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT)测定
对各组小鼠无菌取脾，制脾细胞悬液，用RPMT1640完全培养液调整脾细胞浓度为2×106个/ml，按照程序中MTT法进行淋巴细胞增殖反应，最后在752-C紫外可见分光光度计570nm波长处测其光密度值(OD)，计算ConA+与ConA-各孔的光密度值差，结果与对照组比较进行方差分析。
2.2.2 抗体生成细胞检测
(PFC) 于灌胃第25天给小鼠腹腔注射2%SRBC 0.2ml/只，于免疫后第5天处死，解剖取脾制备脾细胞悬液，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为5×106个/ml，按程序方法制备琼脂糖玻片，在二氧化碳培养箱中温育(37℃、5%CO2)1.5h后加补体，再温育1.5h。计数每张琼脂薄层板上形成的溶血空斑数，结果与对照组比较进行方差分析。
2.2.3 小鼠碳粒廓清试验
按顺序给各组小鼠尾静脉注射印度墨汁(4倍稀释)0.1ml/(10g·bw)。每鼠均于注射墨汁后2min及10min分别准时内眦采血20μl，并迅速加入到2ml 0.1%碳酸钠溶液中并摇匀。以752-C紫外可见分光光度计600nm波长处测光密度值(OD)。同时取小鼠肝、脾称重，按公式计算吞噬指数(a)，结果与对照组比较进行方差分析。
2.3 统计学处理
所有数据均用spss10.0进行统计处理，组间比较用t检验。
3 结果
3.1 ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化试验
(MTT) 见表1。表1 更年健体胶囊对小鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT)的影响各剂量组小鼠ConA+与ConA-OD差值与对照组间差异均无显著性(P>0.05)，提示“更年健体胶囊”对小鼠细胞免疫未见明显影响。
3.2 抗体生成细胞检测
(PFC) 见表2。表2 更年健体胶囊小鼠抗体生成细胞试验结果各剂量组溶血空斑数均高于对照组，其中高、中剂量组小鼠溶血空斑数与对照间差异均有显著性(P< 0.01、P<0.05)，低剂量组小鼠溶血空斑数与对照组间差异均无显著性(P>0.05)。表明“更年健体胶囊”可明显提高小鼠体液免疫。
3.3 小鼠碳粒廓清试验
见表3。表3 更年健体胶囊小鼠碳廓清试验结果高、中、低剂量组小鼠碳廓清吞噬指数均高于对照组，其中高、中剂量组小鼠廓清吞噬指数与对照组间差异均有显著性(P< 0.05、P< 0.01)。结果表明更年健体胶囊可以明显增加小鼠巨噬细胞系统的吞噬能力，且具有一定的量效关系。
4 讨论
免疫功能是机体的一种重要防御机制，有研究证明机体气虚时这一功能显著低下。本实验研究结果显示，由麦冬、五味子等中药组方的更年健体胶囊能显著提高小鼠的体液免疫和非特异性免疫，作用于机体免疫系统的不同环节，具有显著的免疫调节作用。单核-巨噬细胞吞噬能力是衡量机体非特异性免疫功能的标志之一[2]，而巨噬细胞吞噬指数和吞噬百分数则可以反映其吞噬功能的强弱[3～5]。本实验证实:更年健体胶囊可显著提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数和吞噬百分率，增强网状内皮细胞吞噬能力，增强非特异性免疫功能。这为该药的进一步临床应用提供了理论依据。
【参考文献】
1 陈奇.中药药理方法学.北京：人民卫生出版社，1993.
2 Romao PR, Fonseca SG, Hothersall,et al.Glutathione protects macrophages and leishmania major against nitric oxide-mediated cytotoxity. Parasitology, 1999, 118:559.
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