比浊法测定抗生素效价的影响因素分析

【摘要】  本文结合工作实践对采用比浊法测定抗生素效价，可能影响结果的几方面因素进行了分析，并提出了相应的解决措施，以便尽可能减少或消除检验误差，保证检验结果的科学准确。

【关键词】  比浊法; 抗生素效价; 影响因素

　抗生素效价是否符合要求，是抗生素合格与否的一项重要指标。比浊法测定抗生素效价是利用抗生素在液体培养基中对试验菌生长的抑制作用，通过测定培养后细菌浊度值的大小，比较标准品与供试品对试验菌生长抑制的程度，以测定供试品效价的一种方法。由于比浊法要求严格，许多干扰因素都会造成检验结果误差。现结合工作实践，就容易引起误差的几方面影响因素分析如下。

　　1 试验菌的选取

　　一般检定用菌种均较为稳定，在规定条件下使用，不致发生问题。但是，传代过多，可能有变异。一般斜面传代3～4个月，可进行分离纯化1次，挑选典型菌落传代供试验用。具致病性或娇弱易变的微生物，均不适于作检定菌种。

　　2 菌液的浓度

　　在进行比浊测定时，如果控制的菌液浓度过高会使浓度-光吸收度不成直线关系，如果菌液浓度过稀，则读数偏低，误差增大。另外，分光光度法本身的最准确测量点在36.8%T处，因此，应控制最后读数在0.7～0.22A ( 20%～60%T )。

　　3 培养基的影响

　　3.1 配制的培养基必须调节pH值，保证培养基灭菌后其pH值在规定范围之内; pH值的测定使用酸度计或其他准确度较高的仪器，使用20%的氢氧化钠溶液或浓盐酸进行调整;调节pH时应避免反复调节。

　　3.2 实验用培养基的灵敏度应高，否则细菌生长速度慢，在规定时间内浊度达不到要求。

　　3.3 如果检测时培养基中留有气泡，则会导致测量结果不准确。

　　4 抗生素溶液制备过程的影响

　　4.1 称量

　　要求快速准确称取样品。称量前应将标准品取出，放至室温。最好用十万分之一天平称取，称样量不得少于20mg，若用万分之一天平称取，一般不少于100mg。

　　4.2 溶解稀释

　　稀释后的溶液不要放置时间太长。

　　4.2.1 必须保证标准样品完全溶解。

　　4.2.2 稀释步骤不宜太多，一般不超过3步。对需要进行多步稀释的样品，在稀释过程中一定要注意不要把上步高浓度溶液带到下步低浓度溶液中。例如，下步稀释不能用上步稀释用过的吸管和滤纸，洗滴头和吸管时不要把高浓度废液溅到吸管和滴头上。

　　4.2.3 稀释时尽量按照“稀溶液大体积”的原则，即每次吸取量一般不少于2.00ml。

　　4.2.4 稀释过程中防止玻璃仪器的吸附作用。如吸管用被吸液洗涤2～3次，容量瓶中预先加入部分缓冲液。

　　5 缓冲液制备

　　缓冲液配制后应澄明无色、无菌、无浑浊沉淀，应避免被毛点、纤维污染。若出现沉淀或浑浊应用耐酸滤过漏斗滤过，使溶液澄清。配制后应灭菌保存使用。

　　6 培养时间

　　在2～6h时细菌生长处于最快时期，此时如测量时间差别较大，会直接影响测量结果的准确性。

　　7 通气性

　　如果培养过程中各个试管均静止不动，则在培养过程中细菌慢慢沉降至底部，这样就会产生梯度的微生物生长区和梯度的代谢环境，影响细菌的生长，所以在培养过程中需要加入振摇过程。

　　8 实验器具的影响

　　8.1 防止抗生素污染

　　比浊法测定抗生素效价抗生素溶液的浓度非常低，抗生素在培养基中的最终浓度约为0.01～0.1u/ml，因此测定时所用的实验器具应严防抗生素残留和污染。比如，培养用比色皿至少用自来水冲洗6次、用纯化水冲洗3次，洗涤比色皿和大口吸管的水池与洗涤抗生素溶液的水池分开。

　　8.2 防止微生物污染

　　微生物污染对比浊法测定效价有很大影响，若实验用器具、材料被微生物污染，将导致生物反应紊乱，各管形成的吸收度精密度变差，可信限率显著增高，测定结果的精密度和准确度变差，所以实验过程中应严防微生物污染。因此，实验用比色皿、大口吸管、培养基、缓冲液等应灭菌后使用，稀释用精密计量器具必要时进行灭菌。总之，我们应以高度的责任心和严谨的工作态度认真对待每一个细小的操作环节，这样才能保证检验结果的科学准确，从而保障人民用药安全有效。