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【摘要】 目的 了解保定地区婴幼儿呼吸道感染与人类偏肺病毒的关系。方法 采用RT-PCR方法，对收集的547例呼吸道感染常见病原体检测阴性的标本，进行偏肺病毒（hMPV）基因检测。抽取10份阳性扩增产物进行测序和比较。结果 315份标本中共检测到82份阳性扩增产物，阳性率为26.0%。占总检测例数的15.0%。结论 保定地区部分患儿的急性呼吸道感染与hMPV有关。
【关键词】 人类偏肺病毒；儿童呼吸道感染；RT-PCR
偏肺病毒（hMPV）是近年来新发现的病毒，属于副黏液病毒属，可引起毛细支气管炎、支气管肺炎等。11月～次年2、3月为发病高峰期。随着检测手段的提高，各国对其研究日益增多。为了解保定地区婴幼儿hMPV感染情况，我们收集了2005年11月～2006年3月间门诊、病房呼吸道感染的患儿标本进行了hMPV基因检测，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 本研究中用RT-PCR技术检测的315份标本来自保定市一中心医院和儿童医院门诊或住院的547例呼吸道感染患儿，经PCR、ELISA法检测常见呼吸道病毒DNA、抗原抗体阴性。患儿中女101例，男214例，年龄：＜2岁者252例，2～5岁者52例，＞5岁者11例。自发病至纳入研究的时间都在1周内。在就诊时、入院当日或次日取鼻咽洗液或咽拭子，排除常见呼吸道病原感染，包括流感、副流感、人类呼吸道合胞病毒、腺病毒、肺炎支原体引起的感染，这些患儿的临床诊断以肺炎为主，其次是毛细支气管炎、哮喘、支气管炎等，还有一部分诊断不明确。
1.2 方法 应用RT-PCR技术检测hMPV基因。引物位于hMPV N基因，引物序列和随机引物由达安公司合成，RTPCR程序按文献要求进行。Trizal和逆转录酶m-MLV和Tag酶为达安公司产品。随机选取10份扩增产物进行测序和比较，测序反应由达安公司完成，测序比较使用CLUSTAL软件。
1.3 统计学方法 对组间资料的显著性根据数据性质分别采用F、χ2检验。
2 结果
引物特异性：用以上所述引物分别对RSV、肺炎支原体、副流感病毒1型和腺病毒病毒株进行RT-PCR检测，结果均为阴性。还将这一引物分别对从标本中分离到的上述各种病毒进行RT-PCR检测，结果均为阴性，证明这对引物与儿童中常见的呼吸道病毒（RNA病毒）没有交叉反应。
RT-PCR：315份鼻咽洗液、咽拭子中共检测到82份RT-PCR阳性扩增产物，阳性率为26.0%。这些扩增产物表现为单一的条带，分子量约为213bp,与预期的结果相符。这82例阳性患儿中临床诊断为肺炎者41例，占50.0%。毛细支气管炎30例，占36.6%。其他还有喘息性支气管肺炎、哮喘和毛细支气管炎等11例，占13.4%。
RT-PCR扩增产物序列测定和比较分析：随机选取10份扩增产物直接进行核苷酸序列测定，并在Genebank中进行比较。所有10份扩增产物的核苷酸序列与Genebank中荷兰、加拿大的多株的同源性高达87%～99%。这10份扩增产物之间的核苷酸同源性为87.3%～100%。其中除1例标本与其他9例的同源性略低外（87.3%～89.7%），其他9例扩增产物的同源性相当高（95.8%～100%）。
3 讨论
儿科急性呼吸道感染的主要病因是合胞病毒、流感病毒、副流感病毒、支原体、肠道病毒和腺病毒，其中RSV和流感病毒是婴幼儿下呼吸道感染的最为重要的病毒病原，这一观点已得到公认。但是尽管检测方法不断改进，仍有一部分呼吸道感染患儿无法确定病原。hMPV的发现是对急性呼吸道感染病原谱的重要补充［1，2］。
应用RT-PCR技术对315例常见呼吸道病原检查阴性患儿的鼻咽洗液、咽拭子进行hMPV基因检测（扩增和测序），获得82例阳性结果。提示2005年11月～2006年3月间保定地区病原不明的急性呼吸道感染患儿中，26.0%系由hMPV感染引起。由于急性呼吸道感染在儿童常见病中占较大比例，故本研究和国外有关研究所的hMPV感染的结果使这一百分比在缩小。
hMPV的发现为呼吸道病因学起了重要的补充作用。在儿科临床，对常见呼吸道病原检查阴性的患儿，应创造条件常规检查hMPV，并继续寻找其他病原，以逐步缩小“病因不明”的急性呼吸道感染患儿范围，不断总结hMPV或其他病原的致病特征以及临床诊疗经验。
【参考文献】
1 曾玫.人类偏肺病毒研究现状.中国实用儿科杂志，2005，4（20）：244-247.
2 曹力.人类偏肺病毒——一类新发现的呼吸道病毒肺炎.中国医刊，2004，39（3）：24-26.
作者单位： 071051 河北保定，保定市儿童医院
（编辑：商 洁）