胚胎复苏后体外孵育时间对妊娠结局的影响

　　【摘要】 目的  探讨复苏后的体外孵育时间对冻存胚胎妊娠结局的影响。 方法  对100例接受冷冻胚胎移植患者的临床资料进行回顾性分析。 结果  100例冷冻胚胎移植周期，临床妊娠率为21%，复苏后体外孵育时间的不同妊娠率差异无显著性，但流产率差异有显著性。 结论  复苏后延长体外孵育时间可以更好的观察胚胎的发育潜能，但增加流产率，应缩短复苏后体外孵育时间。

　　关键词  胚胎复苏 孵育时间 妊娠结局

　　体外辅助受精技术的日益更新，使单次促排卵周期获得远多于单次宫内移植所需的胚胎。部分患者因卵巢过度刺激或其他原因，不宜进行新鲜胚胎的移植。胚胎冻存为此类患者提供了保存胚胎和多次移植的机会。由于移植冻存胚胎不需要药物促排卵、取卵和体外受精培养的过程，既显著减轻了患者的心理压力，又降低了费用，是提高辅助生殖技术妊娠率和取卵周期累积妊娠的一条途径。现就复苏后胚胎当天移植或经过夜孵育后移植对妊娠结局的影响行分析。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料 对本院2003年12月～2004年10月进行冻存胚胎复苏后移植的100个周期临床资料进行回顾分析。

　　1.2 方法 促排方案、IVF、ICSI操作参考本中心以往的报道 ［1］ 。取卵后第2天或第3天选2～3个胚胎移植入宫腔。选择可冷冻的胚胎:选择第2天2～4细胞或第3天6～8细胞，胚胎评分为3～4分的胚胎进行冷冻。评分方法如下:1分:卵裂球大小形状如碎片，不一致、不对称，无核碎片≥50%，胞浆颗粒不均匀;2分:卵裂球大小不一致、不对称，无核碎片20%～50%，胞浆浓缩、质地粗糙;3分:卵裂球大小轻度不一致、不对称;无核碎片10%～20%，胞浆饱满度、质地均匀度稍差;4分:卵裂球大小一致、对称，无核碎片≤10%，胞浆饱满、质地均匀。冷冻方法为:胚胎在1.5mol的1，2丙二醇（PROH）与N-2羟乙基哌嗪-N-2-乙烷磺酸（HEPES）中平衡10min，然后在1.5mol的PROH，0.1mol/L蔗糖及HEPES中平衡15min，并装入麦管内，最后在程序冷冻仪上进行程序冷冻。胚胎解冻:将装有胚胎的麦管首先分别在室温下和30℃水浴中各快速解冻40s，然后将胚胎依次放入含有0.5mol/L蔗糖10min后移到0.2mol/L蔗糖10min，最后移到HEPES中7～10min并逐步将温度升至37℃。复苏后胚胎评分与移植胚胎评分相同。解冻移植周期:自然周期中尿黄体生成素（luteinizing hormone，LH）高峰后第2天或第3天移植解冻胚胎。自然周期无排卵的患者:月经周期第5天开始口服戊酸雌二醇1～2mg/d，直至B超检查子宫内膜厚度为8～10mm时肌注黄体酮40～60mg/d，注射3天后进行移植。胚胎移植后14天测血尿HCG，移植后40天B超观察胎囊和胎心搏动。

　　1.3 统计学方法 采用SPSS10.0软件，进行χ 2 检验。

　　2 结果

　　2.1 一般概况和妊娠率 100个复苏周期复苏胚胎345个，成活267个，胚胎复苏成活率为77.4%。妊娠21例，妊娠率为21.0%，流产7例，流产率为33.3。

　　2.2 复苏后不同培养时间与妊娠结局的关系 将100个复苏周期分为两组，A组为复苏后当天移植组，共68例，妊娠15例，流产3例;B组为复苏后经过夜孵育移植组，共32例，妊娠6例，流产4例。A、B两组的妊娠率差异无显著性（P>0.05），但A、B组的流产率分别为20%和66.67%，差异有显著性（P<0.05），见表1。

　　表1 复苏后不同培养时间与妊娠结局的关系（略）注:两组比较 * P>0.05， △ P<0.05

　　3 讨论

　　影响冻存胚胎复苏移植妊娠率的主要因素是患者年 龄、冻存前胚胎形态及胚胎复苏成活率 ［2］ 。现今复苏后的胚胎通常在体外培养2～3h即可进行宫内移植，但为观察复苏继续分裂的能力，可以将冻存胚胎复苏后经过夜孵育再进行宫内移植。因培养至次日可以从细胞是否分裂进一步了解复苏后胚胎的生存发展能力，有报道认为:延长复苏后培养时间，观察胚胎分裂情况并进行移植胚胎选择，可能有助于进一步提高移植后妊娠率 ［3］ 。影响冻胚移植的关键因素:胚胎是否耐受冷冻和解冻的损伤，是影响冻胚移植的关键因素。复苏后的高质量的胚胎提示胚胎有很好的内在发育潜能，复苏后卵裂球的完整性是胚胎发育潜能的标志 ［4］ 。解冻后胚胎卵裂球与冷冻前相比成活率≥50%，则认为该胚胎成活 ［5］ 。复苏后经过夜观察后移植虽然可以更好的观察胚胎复苏后的发育潜能，但是体外培养的时间的延长对复苏后胚胎的影响仍是值得关注的，因为冻存胚胎经过冷冻和复苏两个步骤的操作及冷冻液和复苏液对胚胎作用导致冻存胚胎复苏妊娠率始终低于新鲜胚胎宫内移植的妊娠率。本中心的统计结果表明两组的妊娠率差异虽无显著性，但B组的流产率明显高于A组，这可能与统计样本较少有关，延长复苏后体外孵育时间是否增加流产率，尚有待扩大样本后阐明。B组32例共复苏胚胎71个，其中有20例32个胚胎继续分裂。国内也有报道复苏后过夜培养进一步分裂率无明显增高 ［3］ 。由此可见，经过夜孵育培养虽能更好的观察胚胎发育潜能，但并不能提高冻存胚胎妊娠率，反而增加了流产率，这可能与延长复苏后体外培养时间有关。因此应考虑缩短复苏后胚胎体外孵育时间。

　　参考文献

　　1 任海芹，李伟，孙淑杰.不同计量长效达必佳在体外受精-胚胎移植中的治疗效果观察.中国实用妇科与产科杂志，2004，20（1）:57-58.

　　2 李路，孙晓溪，陈军玲，等.影响冷冻胚胎移植妊娠率相关因素分析.生殖与避孕，2004，24（4）:218-220.

    3 叶英辉，金帆，邢兰凤，等.冻存胚胎复苏移植的影响因素.科技通报，2001，17（1）:68-70.

    4 徐艳文，庄广伦，方丛，等.卵泡浆内单精子注射对胚胎冷冻保存的影响.中华妇产科杂志，2002，37（1）:36-37.

    5 李嫒，陈子江，赵力新，等.人类胚胎冷冻影响因素分析.山东大学学报，2003，41（4）:447-448.

　　（编辑文 静）

　　作者单位:110005辽宁省沈阳市生殖医学技术研究中心专科医院