苦丁茶提取物对酒精性肝损伤的保护作用

【摘要】  目的 研究苦丁茶提取物对酒精性肝损伤的保护作用。方法 对昆明种小鼠每日经口分别灌胃给予0.05 g/kg、0.10 g/kg和0.30 g/kg的苦丁茶提取物。30天后，以0.12 ml/10 g BW一次灌胃给予50%乙醇。测定小鼠肝匀浆中丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）和甘油三酯（TG）含量,同时观察肝脏病理。结果 各剂量组肝组织MDA含量均值分别为1.13、1.44、1.90 nmol/100 mg蛋白，低于乙醇对照组2.30 nmol/100 mg蛋白（P<0.05）；TG含量均值分别为1.14、1.38、1.41 mmol/100 mg肝，低于乙醇对照组1.95 mmol/100 mg肝（P<0.01）；GSH含量分别为16.47、16.03、14.70 μmol/g，高于乙醇对照组12.73 μmol/g（P<0.01）；各剂量组肝脏病理改变评分均低于乙醇对照组（P<0.05）。结论 苦丁茶提取物对酒精性肝损伤具有保护作用。

【关键词】  苦丁茶提取物；乙醇；肝损伤

     Protective effects of ilex kudincha extracts on alcoholic liver injury

    CHEN Rui-yi,TAN Jian-bin,WANG Feng-yan,et al.Center for Disease Control and Prevention of Guangdong Province,Guangzhou 510300,China

    ［Abstract］ Objective To study the protective effects of ilex kudincha extracts on ethanol liver injury.Methods KM mice were given Ilex kudincha extracts orally at the dose of 0.05 g/ kg，0.10 g/ kg and 0.30 g/ kg daily.30 days later,0.12 ml/ kg （50%） ethanol were intraperitoneally injected.The liver malondialdehyde （MDA）,triacylglycerol（TG）,and glutathione（GSH） content were measured and liver tissue fat drop lets staining in the ice pathological slice were observed.Results The content of liver MDA,TG in the 3 dose groups were all significantly decreased,both compared with the ethanol control group,while the content of liver GSH in the 3 dose groups were all significantly increased,both compared with the ethanol control group.The mice liver tissue fatty degeneration scores in 3 dose groups were lowered,both compared with the ethanol control group.Conclusion Ilex kudincha extracts had protective effects on ethanol liver injury in mice.

    ［Key words］ ilex kudincha extracts;ethanol;liver injury

    苦丁茶（Ilex kudingcha C.J.Tsing）应用的历史悠久,药源地域广,资源丰富。近年来的动物实验和临床研究表明,其主含的三萜类成分,具有清热解毒、生津、提神、益智和抗衰老、调节血压和血脂等功效［1～3］。 本文以昆明小鼠为研究对象，以乙醇做染毒物，探讨苦丁茶提取物对酒精性肝损害的保护作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料 样品苦丁茶提取物为浅黄色粉末，胶囊装，由深圳某生物科技公司提供。

    1.1.1 动物 SPF级昆明种小白鼠，雌性，6～8周龄，体重18～22 g，由南方医科大学实验动物中心提供，生产许可证号：2004A063，质量合格证编号：NO 0009990。颗粒饲料亦由南方医科大学实验动物中心提供。

    1.1.2 仪器及试剂 日立7600-010全自动生化仪。MDA、GSH检测试剂盒由南京建成提供,TG检测试剂盒由中生北控生物技术股份有限公司提供。

    1.2 实验方法 实验动物在实验室条件下检疫3天后，随机分成空白对照组、乙醇对照组及低、中、高3个剂量组，每组12只小鼠。3个剂量组每天分别按不同剂量灌胃给予受试物，空白对照组和乙醇对照组按同等容量灌胃给予纯净水。动物每周称重，以调整受试样品剂量，共30天。实验结束时各剂量组和乙醇对照组以0.12 ml/10 g BW剂量一次灌胃给予50%乙醇，空白对照组灌胃给予相同剂量纯净水，各组动物禁食16 h后处死，取肝组织制成肝匀浆，测定丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）、甘油三酯（TG），并取肝脏左叶冰冻切片，苏丹Ⅲ染色，光镜下观察病理变化。

    1.3 统计学方法 统计资料采用SPSS 10.0统计软件包进行统计学分析，统计方法采用方差分析和秩和检验。

    2 结果

    2.1 对受试动物肝组织MDA、TG和GSH含量的影响 见表1。乙醇对照组与空白对照组比较，MDA、TG含量升高，GSH降低，差异有统计学意义（P<0.05），表明乙醇肝损伤模型成立。

    高剂量组MDA含量与乙醇对照组比较降低，差异有统计学意义（P<0.05），其余各剂量组MDA、TG含量与乙醇对照组比较降低；GSH含量与乙醇对照组比较升高，差异均有明显统计学意义（P<0.01）。表明MDA、TG和GSH结果阳性。

    2.2 苦丁茶提取物对受试动物肝脏病理变化的影响 见表2。乙醇对照组和各剂量组动物的肝脏病理改变以肝细胞脂肪变性为主，病变部位主要在肝小叶周围。乙醇对照组与空白对照组比较，有明显的肝脏损伤（肝细胞脂肪变性），经统计学分析，差异有统计学意义（P<0.01），表明乙醇肝损伤模型成立。

    各剂量组肝细胞脂肪变性评分与乙醇对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。实验动物肝脏病理结果阳性。表1 苦丁茶提取物对MDA、TG、GSH水平的影响 注：与空白对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01（T-test）；与乙醇对照组比较， *P<0.05，**P<0.01 （Oneway ANOVA analysis）2 苦丁茶提取物对受试动物肝脏病理变化得分 注：与空白对照组比较， △△P<0.01（T-test）；与乙醇对照组比较，*P<0.05，**P<0.01 （Kruskal-Wallis test）；0：大致正常；Ⅰ：脂滴肝细胞不超过1/4；Ⅱ：脂滴肝细胞不超过1/2；Ⅲ：脂滴肝细胞不超过3/4；Ⅳ：肝组织几乎被脂滴代替

    3 讨论

    化学性肝损伤主要来源于生产生活中接触的化学性毒物、酗酒和医源性药物损害。乙醇性肝损伤居于食物性肝损伤的第一位,机体大量摄入间接肝毒物乙醇后,在乙醇脱氢酶的催化下大量脱氢氧化，使三羧循环障碍和脂肪酸氧化减弱而影响脂肪代谢，乙醇可致α-磷酸甘油增多而促进甘油三酯合成，致使脂肪在肝细胞内沉积；同时乙醇能激活氧分子，产生氧自由基导致肝细胞膜的脂质过氧化及体内还原型谷胱甘肽的耗竭；同时研究证实酒精中毒可以直接引起肝脏纤维化,并由纤维化直接进入肝硬化［4］。为减少化学性肝损伤发生率，有必要研究开发具有护肝作用的生物源性物质。除宏观的预防保护措施外,保健食品及其功效物质在增强体质、提高抵抗力,加速化学毒物的代谢解毒和解酒方面可发挥较好作用。本次实验中观察到苦丁茶提取物可抑制乙醇诱导的肝脏中MDA 和TG含量的升高，可使乙醇诱导的肝脏脂肪变性的程度降低，与杨彪等的苦丁茶提取物离体肝组织脂质过氧化抑制作用的研究结果相符［5～7］。表明苦丁茶提取物对酒精所致化学性肝损伤具有保护作用，饮酒前后能摄入一些苦丁茶及其制品可减轻酒精对肝脏的损害。

【参考文献】
  1 杨杏林，范海鹰.中药苦丁茶的研究开发述评.内蒙古中医药,2003,3:261.

2 Nishimura K,Fukuda T,Miyase T,et al.Activity-guided isolation of triterpenoid acyl CoA cholesteryl acyl transferase （ACAT） inhibitors from Ilex kudincha.J Nat Prod,1999,62（7）:1061-1064.

3 Ouyang MA,Wang HQ,Chen ZL,et al.Triterpenoid glycosides from Ilex kudincha.Phytochemistry,1996,43（2）:443-445.

4 江正辉,王泰龄.酒精性肝病.北京: 中国医药科技出版社,2001,100-107.

5 王新.苦丁茶冬青叶化学成分及药理作用研究进展.天然产物研究与开发,2005,17（1）:366-370.

6 Gui SY,Wei W,Wang H,et al.Protective effect of fufanghuangqiduogan against acute liver injury in mice.World J Gastroenterol,2005,11（19）:2984-2989.

7 杨彪.苦丁茶提取物抗氧化作用的研究.广西民族学院学报 （自然科学版）,2000,6（2）：108-110.

作者单位：510300 广东广州,广东省疾病预防控制中心