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【摘要】 目的 研究血管内皮生长因子（VEGF）与转化生长因子（TGF-β）在人动脉粥样硬化病灶中的表达。方法 采用免疫组织化学SP法，检测VEGF与TGF-β在人正常冠状动脉及冠状动脉粥样硬化组织中的表达情况。结果 VEGF与TGF-β在动脉粥样硬化组织的平滑肌细胞、巨噬细胞中有表达，并明显高于正常对照组。二者的表达呈正相关。结论 VEGF与TGF-β在人动脉粥样硬化病灶中有表达，并与病变程度具有相关性。
【关键词】 动脉粥样硬化；血管内皮生长因子；转化生长因子β
Expression of vascular endothelial growth factor and transforming growth factor-β in atherosclerosis tissue by immunohistochemistry examination
LIANG Ping.Healthy School of Fuxin,Liaoning 123000,China
［Abstract］ Objective To estimate the expression and significance of VEGF and TGF-β in human normal coronary artery and coronary atherosclerosis.Methods SP immunohistochemical technique was utilized to measure the expression of VEGF,TGF-β in normal coronary artery and coronary atherosclerosis respectively.Results The expressions of VEGF and TGF-β were on smooth muscle cell and macrophage of atherosclerosis.They were all significantly higher than those in normal control group.There was positive correlation between VEGF and TGF-β.Conclusion The expression of VEGF and TGF-β in smooth muscle cell and macrophage of atherosclerosis implies they partake the certain link of progression in atherosclerosis.Expression of TGF-β is related to VEGF and the degree of atherosclerosis.
［Key words］ atherosclerosis;vascular endothelial growth factor;transforming growth factor-β
动脉粥样硬化斑块中，血管增多是其重要的病理学特征。随着研究的逐步深入，认为血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是目前已知最强、最主要的诱导血管发生的生长因子，还能诱导其他细胞因子的表达增强及表达VEGF受体的单核细胞的迁移［1］。几乎所有参与动脉粥样硬化发生发展的生长因子如转化生长因子（transforming growth factor-β，TGF-β）都能上调平滑肌细胞（SMC）、巨噬细胞和其他细胞中VEGF的表达［2］。我们应用免疫组织化学SP法，分别检测VEGF和 TGF-β在人冠状动脉粥样硬化中的表达情况，以分析它们在动脉粥样硬化中的作用和意义。
1 材料与方法
1.1 材料 收集47例2004~2005年尸检冠状动脉蜡块标本，年龄21~70岁，平均（46.6±16.2）岁。
1.2 常规病理学检查及分组 将HE染色切片在显微镜下观察，根据其基本病变的形成将病例分为3组：正常组11例，脂纹期8例，斑块期28例。
1.3 试剂 兔抗人VEGF多克隆抗体及兔抗人TGF-β多克隆抗体均购自武汉博士德生物工程有限公司，SP超敏试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司。三种抗体均为浓缩型，其工作浓度为1∶100。
1.4 免疫组织化学检测 将蜡块连续切片，采用SP法染色后，显微镜下观察结果。在胞膜或胞浆处有棕黄色或棕褐色颗粒状物质，呈网格状或环状沉淀者为阳性细胞［3］。在高倍显微镜下（10×40）任选10个视野，分别计数VEGF和TGF-β的阳性细胞数，计算平均值。
1.5 统计学方法 应用SPSS 10.0统计软件中的秩和检验及相关检验。
2 结果
2.1 VEGF和TGF-β在冠状动脉中的分布特点 VEGF在SMC和巨噬细胞中有表达，在斑块中表达最高。TGF-β在内皮细胞（EC）、SMC和成纤维细胞中有表达，在脂纹期表达最高。
2.2 冠状动脉中表达VEDF和TGF-β的阳性细胞数 在冠状动脉粥样硬化病变各期中，VEGF的表达呈递增趋势，其阳性细胞数在斑块期最多，与正常组比较差异有显著统计学意义（P＜0.01）。TGF-β的阳性细胞数在脂纹期最多，各期与正常组相比均差异有显著统计学意义（P＜0.01）。
2.3 VEGF与TGF-β表达的相关性 对全部病例VEGF与TGF-β的表达进行相关性检验，发现两者的表达呈正相关（r=0.35，P＜0.01）。
3 讨论
动脉粥样硬化是严重影响人类健康的疾病之一，其发病机制越来越受到人们的关注。近年来，研究表明生长因子在动脉粥样硬化中的作用日益突出，但VEGF和TGF-β在人动脉粥样硬化病灶中的变化报道甚少［4］。
作为动脉血管壁主要细胞成分的血管平滑肌细胞（VSMC）含有VEGF基因［5］。动脉粥样硬化状态下，VSMC在诸多因素的作用下，可由收缩型转化为分泌型，分泌VEGF。本实验表明，在动脉粥样硬化斑块中SMC和巨噬细胞都有VEGF的强表达，VEGF阳性细胞数目与内膜血管化程度呈正相关，且VEGF阳性细胞的分布与新生血管的分布高度一致，即主要位于斑块肩部与纤维帽部位。因此，VEGF在血管壁血管发生中处于十分重要的地位［6］。
TGF-β与VSMC的迁移和增殖密切相关，是血管动脉粥样硬化形成和发展的促进因子和增强因子［7］。其最明显的生物学特征是促进VSMC的迁移、增殖和在血管壁细胞外基质沉积。通过促进VSMC表型转化和增殖，刺激VSMC合成胶原增多，从而加速动脉粥样硬化发生、发展的过程。本实验发现，TGF-β在VSMC、EC和成纤维细胞中为阳性，主要位于核周的胞浆中，与VEGF的表达具有相关性。说明TGF-β可能具有促进VSMC分泌VEGF增加的作用。
总之，动脉粥样硬化的发生发展是一个复杂的过程。本研究表明，动脉粥样硬化病灶中VEGF、TGF-Β的表达增加，且具有相关性，提示二者可能参与动脉粥样硬化的发生发展。如能进一步从基因水平研究二者在动脉粥样硬化形成中的机制，必将对动脉粥样硬化的预防和治疗起到巨大的推动作用。
【参考文献】
1 Barleon B,Sozzani S,Zhou D,et al.Migration of human monocytes in response to vascular endothelial growth factor（VEGF） is mediated via the VEGF receptor flt-1.Blood,1996,87（3）：336-343.
2 Ross R.The pathogenesis of atherosclerosis:a perspective for the 1990s.Nature,1993,362:801-809.
3 许良中，杨文涛.免疫组织化学反应结果的判断标准.中国癌症杂志，1996，6（4）：229-231.
4 Ross R.Atherosclerosis :A defense mechanism gone away.Am J Pathol,1993,143（4）:987-996.
5 Ferrara N，Winter J.Aortic smooth muscle cells express and secrete vascular endothelial growth factor.Growth Factors，2001,5（2）:141.
6 Chen YX，Nakashima Y，Tanaka K，et al.Immunohistochemical expression of vascular endothelial growth factor vascular permeability factor in atherosclerotic intimas of human coronary arteries.ATVB，1999，19：131-139.
7 Scott EC，Lax mansa CK.Angiotensin Ⅱstimulated expression of TGF-β1 in cardiac fibroblasts and myofibroblasts.J Mol Cell Cardiol，2002，29：1947-1951.
作者单位：123000 辽宁阜新，阜新市卫生学校