评价胸腔积液端粒酶活性检测对胸腔积液性质的鉴别诊断价值

　　【摘要】  目的  探讨胸腔积液端粒酶活性检测方法在诊断恶性胸腔积液的临床价值。方法  对我院自2002年9月～2004年11月间收诊的108例已确诊的胸腔积液病例，分良性胸腔积液组和恶性胸腔积液组，分别对每一病例检测胸腔积液端粒酶活性、CEA、CYFRA21-1和胸腔积液细胞学检查，比较以上各种检查方法对恶性胸腔积液诊断的特异性和敏感性，观察数据采用t检验、χ2检验、相关分析。结果  胸腔积液CEA检测诊断恶性胸腔积液敏感性为62.5%，特异性为91.1%，准确率为76.9%。胸腔积液CYFRA21-1检测诊断恶性胸腔积液敏感性为48.1%，特异性为96.4%，准确率为73.2%。细胞学检测诊断恶性胸腔积液敏感性为34.6%，特异性为100%，准确率为68.5%。胸腔积液端粒酶活性检测诊断恶性胸腔积液敏感性为88.0%，特异性为89.3%，准确率为88.9%。结论  胸腔积液端粒酶活性检测对诊断恶性胸腔积液有较高敏感性和特异性，其准确性优于胸腔积液CEA、CRFRA21-1和细胞学检测等方法，是一种较理想的生物检测指标，值得临床进一步研究和推广应用。

　　【关键词】  恶性胸腔积液；端粒酶；诊断；鉴别诊断

　　Clinical significance of telomerase activity assay in differentiation diagnosis of pleural fluid nature

　　WU Ruijing，GUAN Wanning，FANG Wanqiang，et al.

　　The Central Hospital of Kaiping,Kaiping 529300，China

　　【Abstract】  Objective  To evaluate the clinical significance of the methods to assay pleural fluid telomerase activity  in the diagnosis of malignant pleural fluid.Methods  108 diagnosed pleural fluid cases，which admitted to our hospital from September，2002 to November，2004，were divided into benign group and malignant group.Each case accepted pleural fluid telomerase activity，CEA，CYFRA211 and pleural fluid cytopathology detection，respectively.The sensitivity and specificity of these methods were compared in the diagnosis of malignant pleural fluid.Ttest，trisquare and correlation analysis were used to analyse the data.Results  In diagnosing malignant pleural fluid，sensitivity rate of pleural fluid CEA detection was 62.5%，specificity was 91.1% and exact rate was 76.9%；sensitivity rate of pleural fluid CYFRA211 detection  was 48.1%，specificity was 96.4% and exact rate was 73.2%；sensitivity rate of cytopathology was 34.6%，specificity was 100% and exact rate was 68.5%；sensitivity rate of pleural fluid telomerase activity  was 88.0%，specificity was 89.3% and exact rate was 88.9%.Conclusion  The sensitivity and specificity of pleural fluid telomerase activity detection in malignant pleural fluid diagnosis are rather high.The exact rate of telomerase activity detection is prior to CEA，CYFRA211，cytopathology detection.This ideal biology measure index is worthy of further clinical investigation and extensive application.

　　【Key words】  malignant pleural fluid;telomerase;diagnosis;differentiation diagnosis

　　胸腔积液病因比较复杂。细胞学检查虽然特异性高，但敏感性低，在常规的实验室检查中，肿瘤抗原如癌胚抗原（CEA）及角蛋白抗原(CYFRA21-1)等已是较为广谱的肿瘤标志，但用于良、恶性胸腔积液的鉴别诊断其敏感性及特异性仍有欠缺。端粒酶几乎在各种人类恶性肿瘤中均有不同程度的表达，可能是目前已知的最为广谱和特异的恶性肿瘤分子

　　标记物。因此，我们分别研究胸腔积液端粒酶活性检测、胸腔积液角蛋白抗原检测、胸腔积液细胞形态学检查及胸腔积液癌胚抗原检测等方法诊断恶性胸腔积液的特异性及敏感性，评价胸腔积液端粒酶活性检测诊断恶性胸腔积液的临床价值。现报告如下。

　　1  资料与方法

　　1.1  一般资料  选择2002年9月～2004年11月我院患者共108例，分两组。恶性胸腔积液组：共52例，男34例，女18例，年龄42～84岁，平均67.3岁。均经脱落细胞、纤支镜活检、淋巴结活检、术后标本病理检查确诊。其中腺癌14例，鳞癌19例，小细胞未分化癌10例，恶性间皮瘤4例，胸腔积液脱落细胞阳性但原发灶和病理类型未定5例。良性胸腔积液组：共56例，男36例，女20例，年龄37～76岁，平均64.5岁。经临床、结核菌素试验、常规生化、细菌培养等检查，并治疗有效而确诊。其中结核性胸膜炎34例，肺炎7例，脓胸5例，肝硬化胸腔积液5例，膈下脓肿3例，糖尿病2例。

　　1.2  测定方法  常规胸穿，取胸腔积液5ml，肝素抗凝后离心10min，取上清液储于-20℃待测。CYFRA21-1(法国CIC公司)、CEA(中国原子能科学研究院)均采用放射免疫法测定。

　　1.3  端粒酶活性强度测定  用Kim等［1］方法先行提取端粒酶蛋白。提取液经蛋白浓度测定(DC，protein assay试剂盒，BIO-RAD公司)后稀释。用端粒酶测定盒(Oncor公司，美国)，操作按说明书进行。参阅Hiyama半定量方法［2］用端粒酶聚合酶链反应(TRAP-PCR)—酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测胸腔积液细胞端粒酶活性。

　　1.4  统计学方法  用t检验、χ2检验、相关分析。

　　2  结果

　　2.1  两组患者胸腔积液中2项肿瘤标志物测定  见表1。表1  两组胸腔积液CEA、CYFRA21-1测定结果我院放免中心设定的正常值为CEA＜20ng/ml、CRFRA21-1＜3.5ng/ml。

　　2.2  两组患者胸腔积液中4种方法鉴别诊断结果  见表2表2  两组患者胸腔积液中4项检测结果对比 

　　2.3  4种方法对诊断恶性胸腔积液的评价  其检测恶性胸腔积液(不分病理类型)的敏感性分别为CYFRA21-1检测48.1%(25/52)，CEA检测61.5%(32/52)，细胞学诊断34.6%(18/52)，端粒酶活性检测88.5%(46/52)；特异性分别为CYFRA21-1检测96.4%(54/56)，CEA检测91.1%(51/56)，细胞学诊断100%(56/56)，端粒酶活性检测89.3%(50/56)；准确性分别为CYFRA21-1检测73.1%(79/108)，CEA检测76.9%(83/108)，细胞学诊断68.5%(74/108)，端粒酶活性检测88.9%(96/108)。比较4种方法对诊断恶性胸腔积液的准确性，端粒酶活性检测显著高于其他3种方法，P＜0.05。

　　3  讨论

　　临床上胸腔积液的良恶性鉴别非常重要也比较困难。临床上用常规检测方法鉴别胸腔积液性质，仍有约25%的误诊率，因此寻找一种较可靠的诊断恶性胸腔积液的辅助方法有重要意义［3］。CEA较早应用于临床，对恶性胸腔积液的诊断价值较为肯定，肿瘤原发灶手术切除后CEA水平可下降至正常，若肿瘤复发或转移，则CEA水平复又升高［4，5］。CYFRA21-1是细胞角蛋白19的片段，它主要分布于单、复层上皮肿瘤细胞的胞浆内，被认为是诊断非小细胞肺癌非常有用的标志物，其中以鳞癌最佳［6，7］。胸腔积液细胞学检查是诊断恶性胸腔积液的金标准，但易漏诊。临床上用以上各种常规检查去鉴别胸腔积液性质，其准确性仍有较大欠缺。

　　端粒酶是由ＲＮＡ和蛋白质组成的特殊的逆转录酶，能以自身的RNA为模板合成端粒DNA，从而维持端粒的长度。端粒是真核生物细胞染色体末端含有特定的核苷酸序列及结构的一段区域，对染色体的稳定及末端复制具有重要的作用，端粒随细胞分裂而进行性缩短，当达到一定程度，细胞就衰老死亡。端粒酶的激活可使端粒长度维持相对稳定，从而使细胞获得永生化，进一步发生癌变。自1994年TNAP分析法建立以来，人类已对许多人体组织进行端粒酶活性检测，大多数报道显示除生殖细胞和造血干细胞外，人体正常组织细胞未见有端粒酶活性。端粒酶主要存在于大多数恶性肿瘤组织中。研究表明，人类发生的大部分恶性肿瘤都有端粒酶活性的表达，端粒酶的激活是细胞获得无限增殖能力的共同途径。

　　本研究显示：恶性胸腔积液组CEA和CRFRA21-1在胸腔积液中明显高于良性胸腔积液组，测定结果与文献报道一致［8］。胸腔积液CEA检测诊断恶性胸腔积液敏感性为61.5%，特异性为91.1%，准确率为76.9%。胸腔积液CRFRA21-1检测诊断恶性胸腔积液敏感性为48.1%，特异性为96.4%，准确率为73.1%。细胞学检测诊断恶性胸腔积液敏感性为34.6%，特异性为100%，准确率为68.5%。胸腔积液端粒酶活性检测诊断恶性胸腔积液敏感性为88.5%，特异性为89.3%，准确率为88.9%。本研究发现应用胸腔积液端粒酶活性检测诊断恶性胸腔积液准确性比应用胸腔积液肿瘤角蛋白抗原检测、胸腔积液细胞形态学检查及胸腔积液癌胚抗原(CEA)检测等方法都明显提高，均差异有显著性（P<0.05）。本研究采用端粒酶聚合酶链反应(TRAP-PCR)—酶联免疫吸附测定(ELISA)法定量检测胸腔积液细胞端粒酶活性，可以提高检测的敏感性，但在提高敏感性的同时可能降低了诊断的特异性。本研究中，发现在良性胸腔积液组病人也有10例出现端粒酶活性检测阳性。考虑可能与胸腔积液中淋巴细胞端粒酶活性表达有关。我们在下一步研究可考虑通过用淋巴细胞提取液或流式细胞仪等方法去除胸腔积液淋巴细胞后再检测端粒酶活性的方法去进一步提高检测特异性。

　　通过本研究，我们发现胸腔积液端粒酶活性检测对诊断恶性胸腔积液有较高敏感性和特异性，其准确性优于胸腔积液CEA、CRFRA21-1和细胞学检测等方法，是一种诊断恶性胸腔积液较理想的生物检测指标，值得临床进一步研究和推广应用。

　　【参考文献】

　　1  Kim NW，Piatysek MA，Prowge KR，et al.Specific association of human telomerase activity with immortal cells and cancer.Science，1994，266(5193):2011-2015.

　　2  Hiyama K，Hiyama E，Yokoyman，et al.Correlationg telomerase activity levels with human cancer.Nat Med，1995，1:249-254.

　　3  罗词文，李长生，胡浩.胸腔积液诊疗学.北京：科学出版社，2001，123.

　　4  胡梦华.胸腔积液实验室诊断技术的进展.中国防癌杂志，1995，17(2)：91.

　　5  Knailenko VA，Bogatyrev VN，Davydov MI，et al.Possible use of parameters of tumor cell ploidies and carcinoembryonic antigen levels in the prognostication of epidermoid lung cancer.Vestn Ross Akad Med Nauk，1996，21：23.

　　6  郭华北.血清CYFRA21-1免疫放射分析在非小细胞肺癌诊断中的临床价值.中国肿瘤临床，1996，23(4)：236.

　　7  Pastor A，Menendez R，Cremades MJ，et al.Diagnostic value of SCC，CEA and CYFRA21-1 in lung cancer:a bayesian analysis.Eur Respir J，1997，10：603.

　　8  唐华平.三项肿瘤标志物联检对胸腔积液的鉴别诊断价值.齐鲁医学杂志，2002，17(1)：35.

　作者单位： 529300 广东开平，开平市中心医院

　　(编辑：杨  熠)