食管癌组织中survivin、P53、Ki-67和PCNA的表达及临床病理学意义

【摘要】  目的 探讨食管癌组织中survivin、P53、Ki-67和PCNA的表达及临床病理学意义。方法 收集2003年在我院接受手术治疗的60例食管癌患者的癌组织蜡块，采用免疫组织化学方法检测癌组织的survivin、P53、Ki-67和PCNA的表达水平，分析其表达水平与性别、年龄、淋巴结转移、食管癌发生部位、病理类型及浸润程度的关系。结果 食管癌组织块中survivin蛋白阳性表达在肿瘤不同分化程度组P<0.05；P53与Ki-67阳性表达在食管癌发生的不同部位组P＜0.05；Ki-67和PCNA与肿瘤分化程度、食管浸润程度及淋巴结转移组的P值均<0.05；survivin、P53、Ki-67和PCNA共同阳性表达24例，阳性表达率占40%，回顾性多因素分析survivin、P53、Ki-67和PCNA的表达在食管癌中发病的独立危险因素其P值均>0.05。结论 survivin在肿瘤分化组中出现差异性表达；P53与Ki-67在食管下段癌出现高表达；Ki-67和PCNA在肿瘤分化程度、食管浸润范围及淋巴结转移的有无存在差异性；survivin、P53、Ki-67和PCNA的表达不能单独作为食管癌中发病的独立危险因素；survivin、P53、Ki-67和PCNA可以作为食管癌的肿瘤标志物。

【关键词】  食管癌；免疫组织化学；survivin；P53；Ki-67；PCNA

    A study on expression of survivin，P53，Ki-67 & PCNA in esophageal carcinoma and their clinical pathologic significance

    DAI Tian-yang，SHAO Chang-qing，ZHOU Biao，et al.Department of Thoracic Surgery，Luzhou Medical College Hospital，Luzhou 646000，China.

    ［Abstract］  Objective  To study the expression of survivin，P53，Ki-67 & PCNA in Esophageal Carcinoma and the clinical pathologic significance.Methods  Immunohistochmical stains were used to investigate the expression of survivin，P53，Ki-67 & PCNA in 60 case of esophageal carcinoma in our hospital，and also study their pathologic feature.Results  In the study of the esophageal carcinoma，rate of the expression of survivin was positive correlated with tumour differentiation，P=0.014.The expression of P53 and Ki-67 in the location of esophageal carcinoma has significant difference; Ki-67 and PCNA have significant correlation with lymph node metastasis or not，esophageal tissue invasion degree and histopathologic classificant; survivin，P53，Ki-67 & PCNA all positive expression were 24 cases，that positive expression rate was 40%.Conclusion  The survivin showed significance difference between the histopathologic classification;The expression rate of P53 and Ki-67 in the lower esophageal has significance difference; Ki-67 & PCNA have significance difference in histopathological classification、invasion and lymph node metastasis or not; survivin，P53，Ki-67 & PCNA，can not be independent danger factor of esophageal carcinoma;survivin，P53，Ki-67 & PCNA may be the important markers for esophageal carcinoma.

    ［Key words］  esophageal carcinoma;immunohistochmical；survivin；P53；Ki-67；PCNA

    食管癌的发生、发展与细胞凋亡抑制、原癌基因的激活和抑癌基因失活以及细胞增殖能力增强有着密切联系。survivin是新近发现的凋亡抑制因子；P53作为抑癌基因经突变后转变为癌基因；Ki-67和PNCA是两种增殖抗原，在不同的增殖期有着不同的表达强度，有助于了解细胞增殖强度；笔者通过免疫组织化学方法对survivin、P53、Ki-67和PCNA的表达检测，分析其与临床病理学的关系。了解survivin、P53、Ki-67和PCNA的表达有望对食管癌的诊断、治疗、预后提供科学依据。

    1  材料与方法

    1.1  病例选择  2003年收集的四川泸州医学院附属医院手术切除并经病理鉴定的食管癌组织标本60例。其中高分化鳞癌15例，中分化鳞癌17例，低分化28例；食管中上段癌36例，食管下段癌24例；20例有淋巴结转移，均伴有2～13枚淋巴结增生；术前均未经化疗及放疗。

    1.2  主要实验试剂  丹麦DAKO鼠抗人型P53、Ki-67和PCNA抗体，兔抗人型survivin多克隆抗体，免疫组织化学SP试剂盒。

    1.3  主要实验仪器  -20 ℃医用冰箱，显微镜，微波炉，烤箱。

    1.4  实验方法  严格按照S-P法的实验流程进行脱蜡、漂洗、封片、观察等。

    1.5  观察标准  survivin、P53、Ki-67和PCNA表达水平的评判方法：每张切片在高倍镜下随机选择5个视野，棕黄色为阳性，每个视野记数200个细胞，共计1000个细胞，计算阳性细胞数。切片的观察和计数均由2名病理科医生独立完成，以二者结果的均数为表达的阳性数。

    1.6  统计学分析  所有定量测定指标以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验及单因素方差分析，全部统计采用SPPS 10.0统计分析软件完成。P>0.05表示差异无统计学意义，P<0.05表示差异有统计学意义。用二项Logistic回归模型对手术比例进行多因素分析，检验水准P＜0.05为差异有统计学意义。

    2  结果

    2.1  survivin在食管癌中的表达观察  survivin蛋白阳性表达59例，阳性表达率占98.33%；其表达于细胞浆及细胞核。见表1、图1。表1  survivin在不同组中的表达比较

    2.2  P53在食管癌中的表达观察  P53阳性表达40例，阳性表达率占66.7%，表达于细胞核。见表2、图2。

    2.3  Ki-67在食管癌中的表达观察  Ki-67在60例中阳性表达率为100%，Ki-67为阳性表达为50%以上肿瘤细胞表达率16.7%，Ki-67表达于细胞核。见表3、图3。

    2.4  PCNA在食管癌中的表达观察  PCNA在60例中阳性表达率为100%，PCNA阳性表达为50%以上肿瘤细胞表达率36.7%，表达于细胞核。见表4、图4。

    2.5  survivin、P53、Ki-67和PCNA的多因素分析  survivin、P53、Ki-67和PCNA共同阳性24例，阳性表达率占40%；多因素分析示survivin、P53、Ki-67和PCNA的P值均大于0.05，表明差异无统计学意义。表2  P53在不同组中的表达比较表3  Ki-67在不同组中的表达比较表4  PCNA在不同组中的表达比较

    3  讨论

    3.1  食管癌组织中survivin的表达及其临床病理分析  本研究显示survivin在食管高分化鳞状细胞癌中的表达指数为0.6500±0.3206，中分化的表达指数0.7143±0.5345，低分化的表达指数为0.8833±0.1169，经统计学分析P<0.05，在食管癌的分化程度上存在差异性，具有统计学意义，肿瘤分化越低survivin在瘤组织中的阳性表达率越高；survivin在性别组、年龄组、有无区域淋巴结转移组、食管癌发生的部位组及食管癌浸润程度组中比较的P值均大于0.05，故survivin的表达与患者年龄、性别、有无淋巴结转移、食管癌的发生部位及浸润程度关系不大。Nakanishi等［1］发现survivin在低度异常非典型腺瘤性增生、高度异常非典型腺瘤性增生及细支气管肺泡癌组织中的表达率依次为9%、89%、100%，其说明survivin的表达随分化程度的加重而表达增强；任秀花等［2］发现食管高分化鳞癌组中survivin的表达低于低分化鳞癌组；本研究与Nakanishi与任秀花等研究结论相符。

    survivin作为一种细胞凋亡抑制蛋白，高表达于各种肿瘤组织，其机制可能是通过抑制细胞凋亡信号，使肿瘤细胞逃避机体免疫系统的监视而无法清除，从而延长了肿瘤细胞的生存期，利于食管癌的发生发展。survivin基因在癌组织中的表达是一个渐进的过程，随着癌前细胞向癌细胞的转化，survivin基因的表达逐渐升高，因正常的组织存在癌变的可能，任秀花等［2］还发现在正常黏膜-单纯增生-不典型增生-原位癌-浸润癌中，survivin蛋白表达的阳性率依次为40％、42.5％、65.0％、80.0％和85.0％。因此认为survivin的表达可能涉及细胞生物学转化的中间环节，正常及增生黏膜上皮survivin阳性表达提示形态学尚正常的组织存在癌变的可能，因而具有早期诊断的价值。国内陶琳等［3］发现在正常支气管黏膜上皮，不典型增生，肺癌及淋巴转移癌组织中survivin表达呈递增趋势。因此认为，survivin随细胞的增生及细胞核的恶性转化，其表达就越明显，故有望成为早期诊断食管癌的肿瘤标志物。

    3.2  食管癌组织中P53蛋白的表达及其临床分析  本研究中显示P53蛋白的表达发生在食管癌的不同位置存在差异性，P53蛋白在食管中上段中的阳性表达指数为0.2304±0.2771，在食管下段的阳性表达指数为0.8857±0.1464，P＜0.05，具有统计学意义，食管下段癌的表达率明显高于食管中上段；在性别组、不同年龄组、有无淋巴结转移、不同浸润组及不同分化组P＞0.05，故P53的表达在不同性别、年龄、有无淋巴结转移、不同浸润程度及不同的分化程度的病例未表现出统计学意义。笔者认为与食管下段易受外源性致癌物或促癌物的影响如胃酸反流有关，其机制尚待进一步研究。

    3.3  食管癌组织中Ki-67和PCNA的表达及其临床病理分析  本研究显示Ki-67和PCNA肿瘤分化程度、食管浸润程度及有无淋巴结转移组存在差异性，具有统计学意义，与年龄组、性别组无统计学意义；从表4中发现PCNA的肿瘤表达率高于Ki-67，提示PCNA含有Ki-67的表达信息，这与Botticelli的研究相符［4］，但本研究还发现Ki-67在食管癌的发生部位组中具有统计学意义，而PCNA在食管癌的不同发病部位组未显示统计学意义，提示Ki-67同P53一样易受促癌物的影响，其机制尚待进一步研究。Ki-67和PCNA均表达于细胞核，细胞过度分裂与增殖是肿瘤恶变的重要环节，Ki-67和PCNA表达高低可反应细胞增殖活性，故检测这两种蛋白的表达有助于判断肿瘤的生物学活性。王平等［5］Ki-67抗原在膀胱癌中的表达明显高于正常膀胱组织细胞，病理分期越高Ki-67表达越强；Goishi等［6］发现在胃癌中Ki-67抗原的阳性率与胃癌的淋巴结转移有显著关系；有研究发现PCNA已被证实其高表达与淋巴结转移肿瘤浸润深度及组织学类型有关［7］。杨凌等［8］研究发现Ki-67和PCNA在食管鳞状细胞癌中随分化程度的下降表达强度呈上升趋势。因此能够证明随着肿瘤细胞的增生及分化的加深、食管浸润范围及淋巴结转移Ki-67和PCNA均表现出较高的表达率。故Ki-67和PCNA的表达可作为反映肿瘤恶性程度、判断生物学行为和预测预后的重要指标。

    3.4  食管癌组织中survivin、P53、Ki-67和PCNA的表达及其回顾性多因素分析  回顾性研究survivin、P53、Ki-67和PCNA的表达利用多因素分析各自P值均大于0.05，无统计学意义。故survivin、P53、Ki-67和PCNA任何一个指标均不能作为食管癌发病的独立危险因素，但本实验显示出Ⅲ期食管癌survivin、P53、Ki-67和PCNA均表现阳性表达，因四者共同表达阳性的而且是Ⅲ期食管癌的样本数较少，还不能得出survivin、P53、Ki-67和PCNA共同阳性表达于Ⅲ期食管癌的循证医学结论。

【参考文献】
  1 Nakanishi K，Rauai T，Kumaki F，et al.Survivin expression in atypical adenomatous hyperplasia of the lung.Am J Clin Pathol，2003，120（5）:712-719.

2 任秀花，张孝艳，阎爱华，等.TEN，Survivin在食管癌发生发展中的作用.河南肿瘤学杂志，2004，17（4）：238-240.

3 陶琳，姚峰，李华，等.survivin基因表达与非小细胞肺癌发生、发展的关系.中国肺癌杂志，2003，8（6）:275-277.

4 Botticelli AR，Casali AM，Botticelli L，et al.Immunohitochemical detection of cell-cycle associated markers on paraffin embedded and formalin fixed needle biopsies of prostate carcinoma:correlation of P120 expression with AgNOR PCNA/cyclin，Ki-67/MIBI proliferation scores and Gleason gradings.Eur J Histochem，1998，42（1）:41-48.

5 王平，董德平，陈莉，等.Survivin、Ki-67在膀胱癌中的表达及其临床意义.中华实验外科杂志，2006，23（6）：765.

6 Goishi H，Tanaks S，Haruma K，et al.Predictive value of cathepsin D and Ki-67 expresson at the deepest penetration site for lymph node metastases in gastric cancer.Oncol-Rep，2000，7（4）:713-718.

7 Wa J，Mao Y，He L，et al.A new cell proliferating marker:cytosonic thymidine kinase as compared to proliferating cell nuclear antigen in patients with colorectal carcinoma.Anticancer Res，2000，20（6C）:4815-4820.

8 杨凌，边月红，黄淑红，等.CyclinB1、Cdk1、PCNA和Ki-67在食管癌组织中的表达.山东大学学报（理学版），2006，41（4）：155-157.

作者单位：646000 四川泸州，泸州医学院附属医院胸心外科（△通讯作者）