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【摘要】 目的 探讨结肠癌血管嵌合体密度（mosaic vessel density，MVD）的临床意义。方法 通过免疫组化法将60例结肠癌标本组织切片染色，光学显微镜下观察其组织学形态，并计数结肠癌血管嵌合体密度。结果 MVD与年龄、远处转移、TNM分期相关（P<0.05），与性别及肿瘤发生部位无明显相关（P>0.05）。结论 结肠癌血管嵌合体密度与结肠癌预后相关，结肠癌镶嵌血管密度的增高提示预后越差。
【关键词】 结肠癌；血管嵌合体密度；预后
Clinic significance of colon carcinoma in mosaic vessel density
LV Zhi-gang.Department of Surgery,Affiliated Hospital of Nursing School of Xiangfan,Xiangfan 441000,China［Abstract］ Objective To investigate the significance of colon carcinoma in mosaic vessel density.Methods 60 colon carcinoma specimens were stained by immunohistochemistry，then observed its histologic morphous，and counted the density of carcinoma mosaic vessel.Results The relationship between MVD and age，distant metastasis，TNM-classification was significant（P<0.05），but the relationship between MVD and sex，place of tumorigenesis was not significant（P>0.05）.Conclusion The relationship between colon carcinoma in mosaic vessel density and the prognosis of colon carcinoma is significant，and more higher the colon carcinoma in mosaic vessel density,more worse the prognosis of colon cacinoma.
［Key words］ colon carcinoma；vessel mosaic；density;prognosis
结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，肿瘤的转移是导致结肠癌患者治疗失败和死亡的重要因素。因此，结肠癌血管转移的研究对结肠癌的治疗具有重要意义。本试验通过免疫组化法检测结肠癌血管嵌合体密度（mosaic vessle density，MVD），以探讨结肠癌血管嵌合体与结肠癌预后的相关性。
1 材料与方法
1.1 材料选择 结肠癌组织标本取自我院和市中心医院普外科2004年3月至2008年9月收治的结肠癌患者，选择术前未经过放疗、化疗及术后肿瘤组织石蜡保存良好的标本60例，其中男37例，女23例；年龄25~74岁（平均43.3岁）。根据UICC新TNM分期：Ⅰ期7例，Ⅱ期19例，Ⅲ期22例，Ⅳ期12例。
1.2 方法 标本石蜡行3 μm厚切片，每例连续切片2张。一张行HE染色，以观察其组织学特征。一张行CD34、CEA免疫组化双标记法染色。HE染色：结肠癌石蜡切片常规脱蜡水化后，苏木精染色，盐酸酒精分化，梯度酒精脱水、透明中性树胶封片后自然风干，光学显微镜下观察。CD34、CEA双标记免疫组化染色按照试剂盒实验步骤逐步操作。鼠抗人CD34单克隆抗体、鼠抗人CEA单克隆抗体DouSP TM免疫组化双染试剂盒（KIT-9999）及试剂盒购自美国Sigma公司。
1.3 结果判断 （1）CD34免疫组化阳性表达定位于血管内皮细胞胞浆，DAB染液染色，胞质呈棕黄色，胞核为蓝色；（2）结肠癌细胞经抗CEA抗体标记，核固红溶液染色，胞质呈紫红色，细胞核大而圆，蓝色深染；（3）血管内皮细胞见镶嵌有粉红色肿瘤细胞则为结肠癌血管嵌合体。
1.4 结肠癌血管嵌合体密度计数 先在低倍镜（×20倍）下观察全切片的结肠癌血管嵌合体分布情况后，选择血管最密集的区域，然后在高倍镜（×40倍）下计数每个视野的结肠癌血管嵌合体数，取5个视野的平均值作为每个标本的结肠癌血管嵌合体密度。
1.5 统计学处理 采用SPSS 13.0统计软件包对所有数据进行t检验。
2 结果
2.1 结肠癌血管嵌合体形态学观察 形态学观察CD34阳性血管在癌组织中主要分布在前缘区，前缘和表浅区的微血管多扩张，有些微血管一处或多处内皮连续性中断，其间有一个或多个肿瘤细胞侵犯，此为结肠癌血管嵌合体。
2.2 结肠癌血管嵌合体密度（CMVD）与临床病理参数关系 见表1。表1 结肠癌血管嵌合体密度与临床病理参数关系结肠癌血管嵌合体密度主要与患者的年龄、血管转移、远处转移及TNM分期有关。年龄>60岁，结肠癌血管嵌合体密度较年龄≤60岁者明显高（P<0.05，差异具有统计学意义）。发生淋巴转移、远处转移者较无淋巴转移、无远处转移者结肠癌血管嵌合体密度高（P<0.05，差异具有统计学意义）。并与TNM分期相关（P<0.05，差异具有统计学意义），且TNM分期越高，结肠癌血管嵌合体密度越高。而与性别及肿瘤发生部位无明显关系（P>0.05，差异无明显统计学意义）。
3 讨论
侵袭和转移是恶性肿瘤重要的生物学行为，也是导致肿瘤患者治疗失败和复发的重要原因。随着分子生物学及免疫学等相关学科的不断发展，越来越多的肿瘤标记物被发现，使得肿瘤的生物学行为的研究越来越深入。血管在肿瘤的生长和转移上起到了极为重要的作用。Folkman首先提出肿瘤的生长依赖新生血管［1］，当实体肿瘤直径生长到1~2 mm时，就需要新生血管的生成为肿瘤内部的细胞提供营养，这也为肿瘤的血管转移提供了机会。血管嵌合体（mosaic vesel，MV）为肿瘤细胞和血管内皮细胞同时在肿瘤血管壁的一种特殊结构［2］。di Tomaso等［3］也在小鼠异位结肠癌中发现了MV。雷周满等［4］在结肠癌镶嵌血管表达及临床意义研究中发现，结肠癌镶嵌血管与肿瘤的浸润深度，淋巴结转移，远处转移成正相关，与生存时间呈负相关。在我们的研究中发现，标本经过抗CD34单抗及抗CEA单抗双标记并DAB及核固红染色后，血管内皮为棕黄色，有的血管内皮有一处或多处连续性中断，其间可见有一个或多个紫红色的肿瘤细胞，即为结肠癌血管嵌合体。在方义湖等［5］微淋巴管和微血管的密度对结肠癌的预后意义研究中发现，微血管密度与患者的年龄、组织学分级、有无累及浆膜、淋巴结转移、远处转移、TNM分期、淋巴管侵犯、血管侵犯相关，高微血管密度组生存率较低微血管密度组低。然而，结肠癌血管嵌合体密度是否与微血管具有同样的意义呢？我们的研究发现，镶嵌血管的密度与患者的年龄构成、肿瘤的转移相关，并且TNM分期越高，镶嵌血管的密度越高，但和患者的性别构成及肿瘤的发生部位无明显相关性。这和方义湖等的研究结果一致，即镶嵌血管密度和微血管密度在结肠癌预后上具有同样的意义。肿瘤镶嵌血管的形成机制目前还不太清楚，我们认为可能为：（1）肿瘤细胞通过分泌金属蛋白酶，破坏血管壁，以阿米巴的形式移动至血管管腔，在转移的过程中形成镶嵌血管；（2）肿瘤细胞通过表达血管内皮因子VEGF等，促进新生血管生成，新生的血管管壁结构不全，内皮细胞间隙较大，基底膜缺如，肿瘤细胞自原位脱离，进入血管，在其通过血管壁的同时，形成镶嵌血管。总之，镶嵌血管与肿瘤的转移具有密切的相关性，其对临床上判断结肠癌的预后具有重要的意义。治疗上，可以通过抑制镶嵌血管的形成而达到阻止肿瘤细胞的转移。（本文图片见封三）
【参考文献】
1 Folkman J.Tumor angiogenesis：rapeutic implications.N EnJ，1971，285（20）：1182-1186.
2 Chang YS，di Tomaso E，McDonald DM，et al.Mosaic vessels in tumors：frequency of cancer cells in con tact with flowing blood.Proc Natl Acad Sci，2000，97（26）：14608-14613.
3 di Tomaso E，Capen D，Haskell A，et al.Mosaic tumor vessels：Cellular basis and ultrastructure of focal regions lacking endothelial cell markers.Cancer Res，2005，65（13）：5740-5749.
4 雷周满，童仕伦，郑勇斌，等.结肠癌镶嵌血管表达及临床意义.武汉大学学报，2008，29（4）：500-502.
5 方义湖，黄琼，邓红，等.微淋巴管和微血管密度对结结肠癌预后的意义.临床与实验病理学杂志，2007，23（1）：17-20.
（本文编辑：陆 华）
作者单位：441000 湖北，襄樊市护士学校附属医院外科