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【摘要】 目的 检测结肠癌组织中酪氨酸激酶受体RON和β- catenin 的表达情况,并探讨二者之间的相关性。方法 采用免疫组化SP 法分别检测酪氨酸激酶受体RON 和β- catenin 在71例结肠癌及15例正常结肠组织中的表达情况。结果 酪氨酸激酶受体RON主要定位于结肠癌细胞胞浆,正常结肠组织和结肠癌组织中酪氨酸激酶受体RON均见阳性表达,且结肠癌中的表达强度高于正常大肠黏膜(P<0.05);正常结肠黏膜β- catenin 表达于腺上皮细胞膜,而细胞核无阳性表达,结肠癌细胞膜表达出现部分减弱或缺失,并出现不同程度胞核和胞浆阳性表达;结肠癌的酪氨酸激酶受体RON 表达与β- catenin 膜表达有显著的正相关(r=0.306，P=0.009)。结论 β- catenin 异位过表达可能使酪氨酸激酶受体RON 水平上调,并表现为正相关,结肠癌中酪氨酸激酶受体RON的表达与β- catenin 的异位表达密切相关,协同抑制细胞的凋亡,参与结肠癌的发生发展。
【关键词】 RON;β- catenin;大肠癌;免疫组化学
Expression and association of RON and β- catenin in carcinoma of colon
SONG Xian-xu,WANG Xuan,SONG Guo-quan.Department of General Surgery,Second Affiliated Hospital of Mudanjiang Medical University, Mudanjiang 157010,China
Objective To detect the expression of RON and β-catenin in carcinoma of colon and explore the association of them.Methods With immunohistochemical-SP to detect the expression of RON and β- catenin in carcinoma of colon in 71 cases and 15 cases of normal colon tissue.Results RON mainly exit in the cell cytoplasmic of colon carcinoma cells.RON express in normal colon tissue and in colon carcinoma tissue.Expression of RON in colon carcinomar is higher than in normal colon tissue(P<0.05).In normal colon β- catenin express in cell membranes and not express in cell nuclei and in colon carconoma membranes β- catenin’s expression is administered or loss totally.Mayly expressed in cell nuclei or in cell cytoplasm. The expression of RON and β- catenin have positive association(r=0.306，P=0.009).Conclusion The more expression of β- catenin may make the level of RON up and have the association of them. In colon carcinoma the expression of RON and β- catenin can make down the cell apoptotic and make colon carcinoma.
[Key words] RON;β- catenin;colon carcinomar; immunohistochemical-SP
结肠癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，其发生发展涉及多种癌基因的激活和多种抑癌基因的失活。研究表明，肠黏膜细胞凋亡抑制和增生异常是细胞癌变、肿瘤生长的主要原因。β- catenin 是APC - β- cat - Tcf4/ Lef 信号转导通路的关键因子,其突变或异常表达可通过调控下游靶基因的复制与转录,参与大肠癌的发生及发展[1～4]。本实验旨在研究β- catenin 及RON在结肠癌中表达,分析它们与临床病理特征间的关系,探讨它们在结肠癌发生发展中的作用。
1 资料与方法
1.1 一般资料 取我院2005-2007 年结肠癌根治术后标本共71例,均有完整临床资料和明确病理诊断,患者术前均未进行放化疗。正常结肠切缘组织15例。71例结肠癌患者中,男43例,女28例,男：女=1.54：1;年龄33～83岁，平均(58.17±11.86)岁。组织学类型:管状腺癌64 例,黏液腺癌7例。病理分级:高分化9例,中分化47例,低分化15例。大体分型:浸润溃疡型38例,隆起型33例。Dukes分期:A期19例,B期41例,C期11例。71例中11例有淋巴结转移，其中10例1～3个淋巴结转移,1例4～6个淋巴结转移。
1.2 方法 兔抗β- catenin多克隆抗体,购自武汉博士德生物制品公司。兔抗人RON抗体(RON，Santa Cruz公司);S-P免疫组化试剂盒均购自北京中杉金桥生物公司。RON和β- catenin表达染色采用S-P 免疫组化方法。具体步骤按试剂盒说明书进行。DAB显色,苏木素复染后以细胞内出现黄色或棕黄色为阳性。以该公司提供的阳性切片作为阳性对照。以PBS代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判定标准 400倍显微镜下每张切片计数5个视野,每个视野100个肿瘤细胞,取阳性细胞数百分比的平均值。结果判定:根据阳性细胞所占比例进行分级:<5%为阴性(-),5%～25%为弱阳(+)，25%～50%为中度阳性(++)，>50%为强阳性(+++)。统计分析中将(-) 归为阴性组，(+)、(++)、(+++)归为阳性组。
1.4 统计学处理 应用SPSS 13.0统计软件进行数据分析。RON和β- catenin与临床因素的关系用χ2检验用两独立样本比较的秩和检验比较肿瘤组织与正常组织中RON和β- catenin表达。RON和β- catenin表达相关性采用spearman 秩相关检验。P<0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 β-catenin及RON在肿瘤组织和正常组织中的表达 RON 在肿瘤组织中表达率为57.7%，主要分布于细胞浆。正常组织表达率为26.7%，主要分布于肠绒毛杯状细胞胞浆，两者差异具有显著性(P=0.03)。β-catenin在肿瘤组织表达明显高于正常组织,分别为70.4%(P=0.04)，β- catenin在结肠癌组织的表达主要分布于胞膜(见表1)。
2.2 RON和β-catenin表达与临床病理特征的关系(见表2) RON和β-catenin表达均与肿瘤Dukes分期和分化程度有关,与年龄、性别、生长方式、浸润深度和淋巴结转移无关。
2.3 RON和β-catenin蛋白表达相关性 采用spearman 秩相关检验分析RON和β-catenin蛋白表达的相关性,如表3所示两者正相关(r=0.306，P=0.009)。表1 β-catenin 及RON在正常组织和癌组织表达表2 β- catenin 及RON 在结肠癌组织中的表达注：组间比较：Dukes B期与Dukes A期相比，*P=0.008;中分化、高分化组分别与低分化组相比，P=0.009，P=0.002。组间比较：Dukes B期与Dukes A期相比，**P=0.009;高分化组与低分化组相比，P=0.007表3 β- catenin 及RON蛋白表达相关性
3 讨论
β-catenin是一种普遍存在的胞浆蛋白,是细胞内十分重要的信号分子,后来发现其是一种重要的细胞信号分子[5]。研究发现,许多肿瘤都涉及β- catenin 的基因突变、表达异常、转位等,后来则将其定为一种新的癌基因。在正常上皮细胞中,β-catenin 的水平低,主要分布于细胞与细胞接触间的细胞膜上,APC 基因和(或)β-catenin 基因的突变使得β-catenin 蛋白的浓度升高,并异位聚集于细胞浆和细胞核上。在正常黏膜中β-catenin 阳性染色主要位于细胞膜,局部胞浆可出现淡染,但在大肠癌细胞中,其阳性染色主要位于细胞浆,并有部分细胞核阳性的出现。本研究显示β-catenin 异位表达与大肠癌的组织分化程度和Dukes 分期相关。3 种分化程度的β-catenin 异位表达阳性率差异有显著性,分化程度愈低β-catenin 异位表达阳性率愈高，低分化腺癌组显著高于高分化腺癌组,Dukes C+D期显著高于A+B期;TaKayaman等[6]研究的β-catenin 膜表达减弱或缺失与结肠癌低分化和侵袭转移密切相关的结论支持上述观点;而与结肠癌患者的年龄、性别无关。
RON属于MET原癌基因家族的一种酪氨酸激酶受体( recep tor tyrosine kinase，RTK)，其基因位于染色体3p21。RON是个180kD 的杂二聚体[7]，它主要在上皮来源的细胞如结肠和乳腺,以及某些组织的巨噬细胞和红白血病细胞中有表达[8]。本实验证明,结肠癌中RON表达显著高于正常结肠黏膜。本研究初步证明，RON与结肠癌的发生密切相关,尤其与结肠癌分期及分化程度相关。同时对于RON和β- catenin表达联合研究提示RON和β- catenin的过表达在结肠癌细胞转移浸润过程中有重要作用。而对于其实如何实现转移浸润的作用机制有待于进一步研究,以开展靶点的生物治疗研究,为结肠癌临床治疗提供新手段。
【参考文献】
1 Chen YQ，Zhou YQ，Angeloni D，et al.Overexp ressing and activation of the RON recep tor tyrosine kinase in apanel of human colorectal carcinoma cell line.Exp Cell Res，2000，261(1):229-238.
2 Nelson WJ,Nusse R.Convergence of Wnt，β- catenin,and cadherin pathways.Science，2004，303:1483.
3 Bondi J，Bukholm G，Nesland JM,et al.Expression of nonmembranousbeta - catenin and gamma-catenin，c-myc and cycl in D1 in relation to patient outcome in human colon adenocarcinomas.APMIS，2004，1(12):49.
4 何渝军,刘宝华,向德兵.β- catenin 在结直肠癌组织的表达及临床意义.消化外科,2003，2(6):392.
5 Hao X，Toml ison I，I lyas M，et al.Reciporocity between mem braneousand nuclear expression of β-catenin in colorectal tumours.Virchows Arch，1997，43:167.
6 朱红霞,张果,王益华,等.非甾类抗炎药通过D β- catenin/TCF4 - Survivin 通路诱导结肠癌细胞凋亡.癌症,2004，23(7):737.
7 Rosin C，Muscatelli F，Mattei MG，et al.A novel putative recep tor protein tyrosine kinase of the met family.Oncogene，1993，8(5):1195-1202.
8 Gaudino G，Follenzi A，Naldine L，et al.RON is a heterodimeric tyrosine kinase recep tor activated by the HGF homologueMSP.EMBO J，1994，13(15):3524-3532.