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【摘要】 目的 通过实验研究，对水溶性胶冻剂烧伤0号的抑菌效果做出确切评价。方法 采用绿色提取（超临界CO2萃取）的方法提取复方中药的有效成分，并对临床常见3种菌株进行了最小抑菌浓度的实验，同时与天津达仁堂制药二厂生产的京万红软膏进行比较。结果 提取物对金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌有较强的抑制作用，对大肠杆菌的抑菌浓度较弱。对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为20%，对绿脓杆菌的最小抑菌浓度为10%，对大肠杆菌的最小抑菌浓度为40%。结论 这三种浓度的抑菌效果都明显优于京万红。
【关键词】 烧伤0号；抑菌实验
本文采用绿色提取的方法提取复方中药的有效成分，并对临床常见3种菌株进行最小抑菌浓度的实验，并与京万红软膏进行比较，现将结果报告如下。
1 实验材料
1.1 主要设备 超临界CO2萃取仪、恒温培养箱。
1.2 主要药物 (1)浓度分别为10%、20%、30%、40%、50%的复方中药提取物。(2)京万红软膏，为天津达仁堂制药二厂生产，批号041002。
1.3 标准菌株 均为河北医科大学附属二院生化室提供。(1)绿脓杆菌ATCC 27853。(2)金黄色葡萄球菌ATCC 25923。(3)大肠杆菌ATCC 25922。
1.4 M-H肉汤增菌液 由我院检验科按《中国药典》Ⅱ部（2000年版）附录无菌检查法中营养琼脂培养基配置方法制备。主要成分为：牛肉浸膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
2 复方中药的萃取与水溶性胶冻剂制备
2.1 超临界CO2萃取复方中药 黄连、黄柏、黄芩、紫草等中药均由石家庄乐仁堂提供。实验前粉碎至30目，并按一定比例进行混合。采用超临界CO2流体萃取技术进行萃取分离其有效成分。
2.2 不同浓度的水溶性胶冻剂制备 将萃取出的有效成分与芦荟胶冻液混合（芦荟胶冻液为北京昊普生物工程有限公司提供的芦荟原汁制品批号为040416），制备成浓度为10%、20%、30%、40%、50%的胶冻剂。因为萃取分离出的中药有效成分，含有大量的植物油及其他难溶于水的物质，所以必须进行乳化处理。采用吐温—80 作乳化剂加入量为2％。用搅拌器充分搅拌，得分布均匀的粉红色溶液，置于无菌容器内备用。
3 试验室抑菌实验
不同浓度的中药水溶性胶冻剂、京万红软膏抑菌作用测定：为了保证每次接种细菌的生理活性尽量保持一致，平板划线挑取单菌落，37℃摇瓶培养至各菌指数生长期中期。离心洗去培养基成分，调整细胞浓度制备成休止细胞，贮存于-20℃冰箱中。实验时取休止细胞于新鲜LB培养液过夜培养，然后按1%转接量转接新鲜LB培养液，继续培养24h得到相同生理状态的细胞悬液。用来测定药物的抑菌活性。
分别将制备的浓度为10%、20%、30%、40%、50%的中药水溶性胶冻剂、京万红软膏，各取2ml于灭菌试管内。分别滴入培养18～24h的绿脓杆菌制备溶液（菌量9×108/ml）。待细菌与药物作用不同时间后（即在2、3、5、10、15、30、60、120min后），分别取一接种环（约0.005ml）接种与另一肉汤增菌液（M-H肉汤），同时制备阳性对照管。置于35℃恒温箱内，经18～24h培养，分别观察生长情况。实验结果见表1。
并对试管内实验药物进行细菌培养，观察细菌培养阳性的试管内药物，其所生长菌株是否为绿脓杆菌；细菌培养阴性的试管内药物，是否能培养出菌株。
不同浓度的中药水溶性胶冻剂、京万红软膏对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌实验同上，试验结果见表2、表3。
表1 不同浓度的中药水溶性胶冻剂、京万红软膏对绿脓杆菌抑菌作用测定 略
表2 不同浓度的中药水溶性胶冻剂、京万红软膏对金黄色葡萄球菌抑菌作用测定 略
表3 不同浓度的中药水溶性胶冻剂、京万红软膏对大肠杆菌抑菌作用测定 略
4 总结
超临界CO2萃取技术与分子蒸馏技术、超重力场技术是目前国际上较新的三大提取分离技术。其中超临界CO2萃取技术以方便、安全、无污染等特点被世界公认为“绿色提取技术”。近年来我国利用SCFE技术对中草药的研究和开发也取得了很大进步。但大多数仅限于单味药的研究如：紫草、紫杉、沙棘油、怀牛膝、乳香、没药等近30种。而对复方中药萃取研究的报道不多。水溶性胶冻剂烧伤0号就是利用超临界CO2萃取技术对复方中药进行萃取制备而成，并进行抑菌浓度测定。
从表1中可以看出，浓度为10%的烧伤0号与绿脓杆菌作用5min时即转为阴性，无细菌生长。20%、30%、40%、50%浓度的烧伤0号于绿脓杆菌作用的任何时间段均为阴性。对试管内所有实验药物进行细菌培养，结果显示细菌培养阳性的试管内药物，其所生长菌株确为绿脓杆菌，无其他菌株生长，细菌培养阴性的试管内药物，未能培养出任何菌株。这说明实验过程中未感染任何其他菌株。对照组（京万红组）与绿脓杆菌作用60min以内均有细菌生长。对绿脓杆菌的作用效果任何浓度组的烧伤0号均明显优于京万红组。
从表2中可以看出，浓度为10%烧伤0号与金黄色葡萄球菌作用30min时转为阴性，无细菌生长。浓度为20%的烧伤0号与金黄色葡萄球菌作用5min时转为阴性，无细菌生长。30%、40%、50%浓度的烧伤0号于金黄色葡萄球菌作用的任何时间段均为阴性。对试管内所有实验药物进行细菌培养，结果显示细菌培养阳性的试管内药物，其所生长菌株确为金黄色葡萄球菌，无其他菌株生长，细菌培养阴性的试管内药物，未能培养出任何菌株。这说明实验过程中未感染任何其他菌株。对照组（京万红组）与金黄色葡萄球菌作用30min以内均有细菌生长。对金黄色葡萄球菌的作用效果20%浓度以上组烧伤0号明显优于京万红组。
从表3中可以看出，浓度为10%、20%、30%的烧伤0号与大肠杆菌作用120min时仍有细菌生长。浓度为40%的烧伤0号与大肠杆菌作用5min时转为阴性，无细菌生长。50%浓度的烧伤0号与大肠杆菌作用3min时为阴性，无细菌生长。对试管内所有实验药物进行细菌培养，结果显示细菌培养阳性的试管内药物，其所生长菌株确为大肠杆菌，无其他菌株生长，细菌培养阴性的试管内药物，未能培养出任何菌株。这说明实验过程中未感染任何其他菌株。对照组（京万红组）与大肠杆菌作用60min以内均有细菌生长。对大肠杆菌的作用效果40%浓度以上组烧伤0号明显优于京万红组。
由以上可以看出，浓度为40%的水溶性胶冻剂烧伤0号为最佳抑菌浓度，它对临床常见的三种菌株的抑菌效果远远优于京万红。但烧伤0号对其他菌株是否优于京万红，烧伤0号是否会有细菌的耐药性，烧伤0号对烧伤创面的疗效是否优于京万红等一系列问题还需要进一步研究探讨。
基金项目：河北省中医药管理局2005年立项课题(编号：05106)
作者单位： 050031 河北石家庄，河北友爱医院
(编辑：文 静)