点击显示 收起
【摘要】 目的 建立固本化痰通脉颗粒中橙皮苷含量测定的方法。方法 采用HPLC法测定。色谱柱：迪马C18柱（4.6mm×250mm,5μm），流动相：甲醇-醋酸-水（35：4：61）；检测波长：283nm。结果 橙皮苷的平均加样回收率为99.07%，RSD=1.5% （n=5）。结论 本法可靠，重现性好，为固本化痰通脉颗粒的质量控制和评价提供了依据。
【关键词】 橙皮苷；固本化痰通脉颗粒；高效液相色谱法
Determination content of hesperidin in Gubenhuatantongmai granules by HPLC
HUANG Rong-zeng,XU Lin，SHI Xiao-si. Hubei College of Traditional Chinese Medicine，Wuhan 430061，China
【Abstract】 Objective To establish a determining methods for hesperidin in Gubenhuatantongmai granules. Methods Using HPLC with Dikma Cl8 column （4.6mm× 250mm, 5μm）, methanol-acetic acid-water（35：4：61） as mobile phase and detecting wavelength at 283 nm.Results The average recovery of hesperidin was 99.07%, RSD =1.5%（n=5）. Conclusion This method was proved to be reliable and reproducible, and could provide a reliable basis for the quality control and evaluation of Gubenhuatantongmai granules.
【Key words】 hesperidin; Gubenhuatantongmai granules; HPLC
固本化痰通脉方由何首乌、党参、橘红、决明子等中药组成，具有补肾健脾、化痰降脂等功效,是湖北中医学院有效科研验方，笔者将其制成颗粒剂，规格为每袋装20g（相当于原生药约50g）,本文参照有关文献［1～5］，采用高效液相色谱法测定该制剂中橙皮苷的含量。操作简便，准确，重复性好，为控制该制剂质量提供可靠的实验依据。
1 仪器与试药
Dionex-P680液相色谱仪，AT-201电子分析天平（d=0.01mg，瑞士），SK5200H超声波清洗机（上海科导超声仪器有限公司），橙皮苷对照品（供含量测定用，中国药品生物制品检验所，批号731-8601）, 甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水（自制） ,其他试剂均为分析纯。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：迪马C18柱（4.6mm×250mm,5μm） ；流动相：甲醇-醋酸-水（35：4：61）；检测波长：283nm ；进样量：5μl ；柱温: 25℃；流速: 1ml/min ；理论塔板数按橙皮苷峰计算应不低于2000。
2.2 对照品及供试品溶液的制备
2.2.1 橙皮苷对照品溶液的制备 精密称定在五氧化二磷减压干燥仪器中干燥48h的橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含橙皮苷0.18mg的溶液，即得。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置4h，超声处理（功率150W，频率20kHz）30min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.3 阴性对照试验 按处方比例和工艺，制成不含橘红的阴性样品。按供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液。按上述色谱条件测定。结果（见图1）表明，处方中其他药材不干扰橙皮苷的测定。
2.4 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液（0.182mg /ml）2、4、6、8、10μl，各进样2次，计算峰面积积分值，以橙皮苷峰面积积分值对进样量进行线性回归，得到回归方程： Y=19.171X-0.1091，r=0.9999。表明其线性关系良好，线性范围为0.364～1.82μg。图1 对照品、样品及阴性色谱图2.5 精密度试验 精密吸取橙皮苷对照品溶液5μl，按上述色谱条件，连续进样5次，测得橙皮苷峰面积， RSD为0.31%。
2.6 重现性试验 按照2.1项方法,对同一样品测定5次,计算橙皮苷含量平均值为2.7231mg/g, RSD为0.98%。
2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液，按上述色谱条件，分别于0、2、4、8、12、24h测定峰面积， RSD为1.9%，试验结果表明，供试品溶液在24h内稳定性良好。
2.8 加样回收率试验 进行加样回收试验，取已知含量的固本化痰通脉颗粒（2.7231 mg/g）5份，每份取约1.0g，精密称定，分别精密加入一定量的橙皮苷对照品溶液（0.182mg /ml）,按供试品溶液制备方法制备,测定；结果（见表1）表明本法回收率为99.07%，RSD为1.4%。表1 回收率试验结果（略）
2.9 样品测定 自制样品3批,按上述含量测定方法，对3批固本化痰通脉颗粒的含量进行测定，外标法计算样品中橙皮苷的含量，结果见表2。表2 3批固本化痰通脉颗粒含量测定结果（略）
3 讨论
曾采用甲醇水浴回流l h直接提取样品，测得的含量与超声处理30min一致，但超声处理简便快速，因此本文选用甲醇超声处理直接提取样品。
中药复方制剂以橙皮苷含量为测定指标的文献报道很多，试验对多种流动相进行了选择, 最后确定甲醇-醋酸-水（35：4：61）作为流动相，橙皮苷峰形对称，样品分离良好。
本文采用HPLC法测定该制剂中橙皮苷的含量,方法简便、准确、选择性好、阴性无干扰，可作为该制剂的含量测定方法。
【参考文献】
1 国家药典委员会.中国药典（一部）.北京：化学工业出版社，2005.
2 饶春恺，谭忠军，宋 军．HPLC测定参苓健脾胃颗粒中橙皮苷的含量．中成药，2006，28（10）：1542-1543.
3 胡美芳，宋秋华．高效液相色谱法测定香砂养胃颗粒中橙皮苷含量．中国药业，2005, 14（ 9）：45.
4 马嘉，白莉莉．高效液相法测定健脾补肾颗粒中橙皮苷的含量．东南国防医药， 2006，8（ 4）：245-246.
5 高永堂 ，衣学龙 ，王兆华. HPLC法测定龟芪壮骨颗粒中二苯乙烯苷的含量．中华现代中医学杂志，2005,1（2） ：113-115.
作者单位：430061 湖北武汉,湖北中医学院