中药姜香贴剂的体外透皮实验研究

【摘要】  目的 研究中药姜香贴剂对离体鼠皮的透过性。方法 用Ficks扩散装置，测定姜香贴剂中6-姜酚在大鼠皮肤的透皮速率，研究比较甘油、乙醇、氮酮和聚丙烯酸酯压敏胶对6-姜酚透皮速率的影响。结果 处方③20 h的累积渗透量（Q）为585.898 μg/cm2，渗透系数（KP）为42.25 cm-2·h-1/2，透皮速率（Js）为16.711 μg·cm-2·h-1/2，明显好于其他5个处方。结论 姜香贴剂可透过离体鼠皮，氮酮是影响6-姜酚透皮速率的重要因素。　

【关键词】  姜香贴剂；6-姜酚；透皮吸收　　

    Study on percutaneous absorption in vitro of patches Jiangxiang

    XU Qian，CHEN Yan，XU Jingfeng.General Hospital of Beijing Military Command，Beijing 100700，China

    ［Abstract］  Objective  To study the permeation of the patches Jiangxiang and its permeation mechanism.Methods  The in vitro penetration model was designed to investigate 6gingerols permeability in rat，with improved Fick’s diffusing and to study the influence factors（alcohol，glycerol and azone）.Results  The percutaneous adsorption speed of the patches Jiangxiang were measured.The accumulative permeation quantity（Q）was 585.898 μg/cm2，steady percutaneous speed（Js） was 16.711 μg·cm-2·h-1/2and permeation coefficient（KP）was 42.25 cm-2·h-1/2.Conclusion  The percutaneous adsorption speed of the patches Jiangxiang is passive diffusion and azone is important influence factors of the 6gingerols permeability.

    ［Key words］  Jiangxiang patches；6gingerol；percutaneous adsorption

    姜香透皮贴剂是由生姜、广藿香和木香的超临界CO2提取物制成，对旋转刺激诱发大鼠的运动病模型有良好的抑制和缓解作用。本文用Ficks扩散装置［1］，以6-姜酚为检测指标，通过计算6-姜酚对大鼠皮肤的累积渗透量（Q）、透皮速率（Js）和渗透系数（KP），研究姜香贴剂的透皮吸收行为。

    1  仪器与试药

　　　高效液相色谱仪（Agilent 1050 series，美国惠普公司）；紫外检测器（UV2100型，日本岛津公司）；全自动体外透皮扩散实验仪（美国汉森科技公司）；电子天平（BS-110S型，北京赛多利斯天平有限公司）；涂布机（北京斯达特机电公司）；生姜（山东莱芜）；6-姜酚（中新药业，经1HNMR、13CNMR、IR、UV、MS鉴定为6-姜酚，经HPLC法检查纯度>98%）；氮酮（Azone）（石家庄虎头山试剂厂）；水为重蒸水；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯；雄性大鼠（中国科学院实验动物繁殖厂）。

    2  分析方法建立

    2.1  色谱条件  高效液相色谱法。色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse DB C18色谱柱（416 mm×150 mm，5 μm），柱温35 ℃；流动相:甲醇∶水（62∶38）；流速:1.0 ml/min；检测波长:280 nm；进样量10 μl。

    2.2  标准曲线的制备［2］  精密称取6-姜酚适量，用甲醇溶解配制100，200，500，1 000，2 000，3 000，4 000，5 000，6 000 ng/ml的6-姜酚标准溶液，进样10 μl，以6-姜酚峰面积积分值（A）对质量浓度（C）进行回归，得回归方程A=0.3267C-5.0920（r=1.00），6-姜酚在100～6 000 ng/ml峰面积与质量浓度有良好的线性关系（图1）。

    2.3  精密度  按标准曲线项下操作方法，分别配制1 000，2 000，3 000 ng/ml的低、中、高3个浓度的6-姜酚标准溶液，每天分别测定5次，连续5 d，计算日内精密度及日间精密度。见表1。表1  6-姜酚的日内、日间精密度

    2.4  加样回收率  精密称取约0.1 g的姜油，置50 ml 容量瓶中，加甲醇至刻度，充分混匀，超声30 min，取上清过0.45 μm微孔滤膜，进样10 μl，测定含量。分别向该已知含量的样品溶液中加入低、中、高三个剂量的6-姜酚标准品，每个剂量平行3份，测定峰面积，利用外标法计算含量，计算回收率。见表2。表2  加样回收率测定结果 注：平均回收率为100.23%，RSD=1.19%

    3  姜香透皮贴剂体外透皮实验

    3.1  姜香贴剂的制备  按处方量称取生姜、广藿香和木香的超临界CO2提取物［3］，分别加入甘油、乙醇、氮酮和聚丙烯酸酯压敏胶，充分搅拌均匀后，静置除净气泡，至淡黄色澄清液体，涂布于肉色背衬层上，40 ℃～50 ℃烘干，覆盖硅纸保护层。按此方法分别制成处方①（姜香CO2提取物+乙醇）、处方②（姜香CO2提取物+甘油）、处方③（姜香CO2提取物+1%氮酮）、处方④（姜香CO2提取物）、处方⑤（姜油+1%氮酮）和处方⑥（姜油）的姜香贴剂，经行离体皮肤透皮实验。

    3.2  离体皮肤的制备  取体重为（200±20）g的Wister大鼠，断颈处死后用脱毛膏除去腹部毛，温水洗净，剥离腹部皮肤，在玻璃板上小心刮去皮下脂肪组织和粘连物，用纯净水和生理盐水冲洗干净，冷冻保存，待用。

    3.3  体外渗透性实验  取冷冻的大鼠腹部皮肤置于生理盐水中解冻，洗净。将其皮肤表层面向给体室固定在扩散池的接受室上（美国Hanson全自动体外渗透测定仪，扩散池管口直径D=1.50 cm，横截面积S=1.767 cm2），排尽气泡，精密量取直径为1.50 cm贴剂贴在给体室皮肤角质层上。循环水保持37 ℃±0.5 ℃。接受液为30%乙醇的生理盐水（接受室内接受液体积为7.0 ml），加搅拌子以200 r/min的速度搅拌，分别于30 min，2，6，10，16，20 h取0.5 ml废液和1 ml接受液，并补充等量同温的接受液。接受液以0.45 μm微孔滤膜的微滤器过滤，弃初滤液，取20 μl续滤液进样，HPLC测定含量。以每毫克6-姜酚单位面积累积透皮量（Qs）对时间（t）求出Qst方程，计算透皮速率（Js）。

    Q=VCn+ViCn-1+…+ViC1   A

    Js=dQ/dt

    P%=（Q·10-3/C0）·100%

    　　Q：t时间的累积渗透量（μg/cm2）；Cn:第n个取样点的浓度（μg/μl）；A:渗透面积（本仪器释放面积1.767 cm2）；V:接受液的总体积（7.0 ml）；Vi:每次取样品液的体积（1.5 ml）；P%:透过率；C0:贴片中6-姜酚的含量（mg/cm2）。　　以累积渗透量Qs对时间t进行线性回归，得Qst方程。结果见表3、4，图2。表3  姜香贴剂体外经皮渗透特征表4  姜香贴剂Qs-t方程和透皮速率

    4  结果与讨论　

　　本文对大鼠皮肤的体外透皮实验结果表明:处方③20 h的累积渗透量Q为585.898 μg/cm2，渗透系数KP为42.25 cm-2·h-1/2，透皮速率Js为16.711 μg·cm-2·h-1/2，明显好于其他5个处方。但处方③Js较低，这可能是贴服2 h后，6-姜酚快速透过皮肤角质层并达到一个稳态的零级递增态势所致（图2）。这一结果有利于贴剂快速发挥药效并维持有效浓度。处方③添加1%的氮酮，对贴剂有促渗效果，但最佳氮酮比例需要进一步考察筛选。　　本文采用的全自动体外渗透测定装置为美国药典标准的体外渗透评价仪器，其系统为全真空系统，排除了其他体外渗透实验装置的皮肤与接受液之间产生气泡影响释放效果的可能；该装置释放面积、接受室体积及进、出样管腔容量均精确至0.001，且可全自动取样，避免了操作上的繁杂。因此实验设备带来的系统误差小，对于中药微量渗透的测定带来了可能。

【参考文献】
  1 许景峰，赵维娟，张梅，等.100种药物透皮吸收行为的实验研究及回归方程式推论.中国药学杂志，1998，33（2）:86-91.

2 卢传坚.姜的化学成分分析研究概述.中药新药与临床药理，2003，14（6）:215-217.

3 许景峰.17种生物碱类药物体外经皮渗透行为的实验研究.解放军药学学报，2001，17（2）；66.

作者单位：100700 北京，北京军区总医院（△第二军医大学药学院07级研究生）