点击显示 收起
【摘要】 目的 探讨养肝和血方对雌性初老大鼠血清抑制素的影响。方法 通过阴道细胞学观察，选择10~12月龄的自然衰老雌性大鼠30只，随机分为模型对照组、六味地黄汤对照组、养肝和血方组，另选4月龄的雌性大鼠10只为青年空白对照组。灌胃三周后，用酶联免疫吸附法（ELISA）测量血清抑制素B（INHB）的含量。结果 养肝和血方组中血清INHB含量提高，与模型对照组、六味地黄汤对照组比较差异有显著性（P<0.05）。结论 养肝和血方能提高雌性初老大鼠血清INHB含量，能改善卵巢INHB的生成与分泌，从而达到延缓卵巢衰老的目的。
【关键词】 围绝经期；养肝和血方；初老雌性大鼠；血清抑制素B
Effect of Yanggan Hexue formula on serum inhibin B in first aging female rat
GUO Xu-li，LIU Dong-yan.Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China
［Abstract］ Objective To study the effect of Yanggan Hexue formula on serum inhibin B（INHB）in first aging female rat.Methods Checked by observating the cell of vagina，30 Wistar female rats of 11~12 months were randomly divided into 3 group:model group，Yanggan Hexue formula group，and Liuweidihuangtang group as positive control.Besides，took 10 Wistar females rats of 4 months to be the normal contrast group.After all the groups were intragastric administrated for 3 weeks，the lever of INHB is measured by ELISA.Results Yanggan Hexue formula can effectively increase the level of INHB.By statistical calculation，this increase has a sharp difference（P<0.05），compared with that of the model group and Liuweidihuangtang group.Conclusion Yanggan Hexue formula can improve the INHB of synthesis and secretion of the ovary，and therefore serves the purpose of delaying the aging of first aging female rat ovary.
［Key words］ peri-menopausal period;Yanggan Hexue formula；first aging female rat；INHB
围绝经期是指妇女四十岁左右任何时期开始出现类似绝经内分泌学、生物学与临床特征时起至绝经后12个月内。即绝经过渡期至绝经后1年［1］。围绝经期综合征是指妇女绝经前后由于性激素减少所致的一系列躯体及精神心理症状。严重影响了妇女的身心健康，故防治围绝经期综合征，提高围绝经期的生活质量，成为目前医学界关注的课题。
本课题选用10~12月龄的雌性初老大鼠作为围绝经初期的动物模型，观察养肝和血方对雌性初老大鼠血清抑制素B（INHB）的影响，探讨养肝和血方治疗围绝经期综合征早期阶段的作用机制，以期为临床运用提供理论和实验依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物 10~12月龄的Wistar大鼠符合初
老期模型动物30只，体重（310±20）g；4月龄Wistar大鼠10只，体重（230±20）g，由山西医科大学实验动物中心提供。
1.2 药品 养肝和血方由当归、川芎、熟地、芍药、女贞子、旱莲草、枸杞子、何首乌组成。六味地黄汤由熟地、山茱萸、山药、丹皮、泽泻、茯苓组成，均由山西医科大学第二医院中医制剂室制备。
1.3 仪器与试剂 离心沉淀机LXJ-X型（南京第一医疗器械厂）、电子秤JCS-A（上海斐龙电子科技有限公司）、恒温水浴箱HH.W21.CR600（河北黄骅仪器厂）、酶标仪BEVCHMAR（BIO-RAD）。血清抑制素试剂盒（购自上海朗顿生物科技有限公司）。
1.4 造模与实验方法 造模方法参照文献［2，3］，10~12月龄雌性大鼠，体重（310±20）g，采取阴道脱落细胞涂片HE染色法连续观察三个动情期（15天），以阴道细胞学表现动情周期延长、之后持续动情、反复假孕者，作为初老大鼠模型。4月龄雌性大鼠，体重（230±20）g，进行阴道细胞涂片连续观察5天，以角化细胞指数高于50%，且有正常动情周期者作为青年对照组。
动物随机分为四组，青年对照组和模型组给予3 ml的生理盐水灌胃，养肝和血方组：给予养肝和血方3 ml（生药量9.4 g/kg）灌胃，六味地黄汤组：给予六味地黄汤3 ml（生药量7.8 g/kg）灌胃。按人鼠体重比换算后给药。每日灌药1次，连续灌药15天。
1.5 标本的采集与测定 于末次给药24 h后，先用20%乌拉坦2~5 ml麻醉，确认麻醉生效后腹主动脉取血5 ml置于干净试管中，放入37 ℃水浴中孵育2 h后，以3000转/min速度离心20 min，取上清液，置于-20 ℃低温冰箱保存，用于测定血清INHB，用酶联免疫吸附法（ELISA）测定。按试剂盒说明书严格实验操作。
1.6 统计学方法 应用SPSS 11.5做统计学处理，实验结果用均数±标准差（x±s）表示，采用One-Way ANOVA进行分析，组间采用多样本均数间两两比较的SNK-q检验。
2 结果
对血清INHB的影响：由表1可见：与青年组比较，模型组、用药各组血清INHB含量降低，有统计学意义（P<0.05）；与模型组比较，用药各组血清INHB含量均提高，有统计意义（P<0.05）；与六味地黄汤组比较，养肝和血方组血清INHB含量提高，有统计意义（P<0.05）。表1 各组大鼠血清INHB含量的比较 注：与青年组比较，△P<0.05；与模型组比较，★P<0.05；与六味地黄汤组比较，*P<0.05
3 讨论
对于围绝经期疾病，大多数医家从肾论治，但我们通过一系列的临床观察，结合女性的病理生理特点，在对围绝经期综合征妇女的表现及用药积累了一定的临床经验的同时，发现围绝经期是一个漫长的动态过程，大约15年之久，在此期间人体的各组织器官衰老的起始时间和速率不尽相同。围绝经初期（即月经周期改变≥7天），其病变部位在肝，肝血不足，气血失和为其主要病机，围绝经后期（即闭经3~12个月），其病变部位主要在肾，肾之精血亏虚为其主要病机。古人认为“女子以肝为先天”，肝为藏血之脏，主疏泄，调畅情志，联系着冲任二脉、前阴、乳房等，对于女性的月经起着重要的调节作用。且妇女在经、带、胎、产等生理过程中，屡伤于血，常使机体处于阴血偏亏的状态。故女性进入围绝经期首先出现肝血不足，气血失和的表现，而后才出现肾之精血不足的病理表现。因此，在本实验中我们选择养肝和血方作为实验基础方。
INHB由小窦状卵泡产生，卵巢内小窦状卵泡数量与INHB含量呈正相关，对生殖内分泌有直接调节作用，INHB作用于垂体，对卵泡刺激素（FSH）有负反馈调节作用，其旁分泌的调节作用是通过改变雌激素（E2）底物的量而调节E2的产生。Seifer等［4］认为，INHB可作为卵巢储备功能的直接指标，而垂体分泌FSH仅为间接指标。卵巢储备功能减退的妇女，在月经第3天，INHB下降先于FSH升高，因此第3天INHB水平可能是卵巢储备功能下降的更早期指标。叶云等［5］也通过临床研究证明血清INHB水平下降是反映卵巢储备功能下降的直接指标，较FSH水平升高、E2水平下降的变化更早、更敏感。由此可见围绝经初期INHB的减少是卵泡数目减少的早期标志物，它的变化启动了围绝经期女性生殖内分泌轴的一系列变化。故血清INHB可作为围绝经期早期检测的重要指标。
实验结果表明：养肝和血方能显著提高血清INHB含量，可能是因为该方能够促进生长卵泡的发育，提高大鼠卵巢的储备功能，进而延缓卵巢的衰老。同时也验证了，围绝经初期从肝论治的理论。
【参考文献】
1 张少芬.绝经——内分泌与临床.北京：人民卫生出版社，2005，171-179.
2 孙敬方.动物实验方法学.北京：人民卫生出版社，2001，423-426.
3 谢启文.现代神经内分泌学.上海:上海医科大学出版社，1999，385.
4 Seifer DB，Scott RT，Bergh PA，et al.Woman with declining ovarianreserve may demonstrate a decrease in day 3 serum inhibin B before arise in day 3 follicl-stimulating hormone.Fertil Steril，1999，72（1）:63.
5 叶云，吴日然，廖月婵，等.血清抑制素B检测值预测卵巢储备功能的临床研究.中国优生与遗传杂志，2006，14（3）：107-108.
作者单位：山西太原，山西医科大学 山西太原，山西医科大学第二临床医学院