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【摘要】 目的 探讨上皮钙依赖粘附素（E-cadherin，E-cad），连环素（Catenin，cat）、α、β、γ在子宫颈鳞癌中的表达及意义。方法 应用免疫组化S-P法观察70例子宫颈鳞癌组织中E-cad，α-cat，β-cat，γ-cat的表达并结合临床随访资料进行分析。结果 E-cad，α-cat，β-cat，γ-cat阳性病例分别为42例（60%），35例（50%），35例（50%），31例（44.3%）;其中E-cad与β-cat、α-cat表达呈正相关性（P<0.05）;E-cad、β-cat的表达缺失与子宫颈鳞癌的去分化、淋巴结转移及术后生存期短有显著相关性（P<0.05）。结论E-cad、β-cat蛋白的表达可作为判断子宫颈鳞癌转移及预后的指标之一。
Expression of E-cadherin and catenin and its significance in cervical squamous carcinomas
Zhao Yang，Cui Yongxing，Luo Minghua
Department of Pathology，Shenzhen Hospital of Peking University，Shenzhen518036.
【Abstract】 Objective To investigate the expression of E-cad，α-cat，β-cat，γ-cat and its clinicopatholˉogy in cervical squamous carcinomas.Methods E-cad，α-cat，β-cat andγ-cat expression were examined imˉmunohistochemically in70cases of cervical squamous carcinomas and the clinical data were analyzed.Result The expression rates of E-cad，α-cat，β-cat andγ-cat were60%，50%，50%and44.3%respectively.E-cad exˉpression was correlated positivelywithβ-cat andα-cat.The loss expression of E-cad andβ-catwas related to the degree of tumor diffe rentation，survive time and lymph-node metastasis of tumor（P<0.05）.Conclusion Expression of E-cad andβ-cat may serve as a parameter for evaluating metastasisand prognosis in cervical squamous carcinoˉmas.
Key words cervix neoplasms E-cadherin catenin immunohistochemistry
E-cadherin是钙依赖上皮细胞间跨膜糖蛋白，是介导同质型粘附的粘附分子，同质型粘附是指相同细胞间的粘附，如瘤细胞与瘤细胞之间的粘附，同质型粘附的增强使瘤细胞难以离开原发瘤侵入周围组织、血管，E-cad通过与连接蛋白cats（α-cat，β-cat，γ-cat）结合形成细胞骨架，发挥同质型粘附功能，在肿瘤浸润、转移中扮演非常重要的作用，而cats又与细胞的信号传导有关。子宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，其中鳞状细胞癌占90%～95%，而子宫颈鳞癌中E-cad，cats的表达与预后的关系，目前国内报道较少。笔者应用免疫组化S-P法观察E-cad，α-cat，β-cat，γ-cat在子宫颈鳞癌中的表达并探讨其临床意义。
1 材料与方法
1.1 材料 选自北京大学深圳医院1998～2000年手术切除的子宫颈鳞状细胞癌标本70例，患者平均年龄53.2岁，术前均未做过放疗或化疗。研究标本均为10%中性福尔马林液固定，常规石蜡包埋。按照WHO子宫颈鳞癌组织学分类标准将其分为:高分化鳞癌19例，中分化鳞癌38例，低分化鳞癌13例。按照1994年国际妇产科联盟制订子宫颈癌临床分期标准将其分为:0～Ⅰ期16例，Ⅱ～Ⅲ期54例。鼠抗人E-cadherin，α-catenin，β-catenin，γ-catenin。单克隆抗体及免疫组化S-P试剂盒均为福州迈新生物技术开发公司产品。
1.2 方法 切片脱蜡、水化后用0.01ml/L柠檬酸缓冲液（pH6.0）高压修复抗原，常规S-P法显色，苏木精复染，以各抗体的阳性片作阳性对照，以PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判断 以各种抗体细胞膜出现棕黄色颗粒为阳性信号，根据阳性细胞数占总细胞数的百分比分为:（1）阴性:阳性细胞数<10%;（2）阳性（+）:阳性细胞≥10%。
1.4 统计学处理 不同表达情况的比较采用X 2 检验，单因素分析用Kaplan-Meier法描绘曲线进行生存率估计，曲线比较用log-rank检验，均用SPSS10.0进行分析。
2 结果
2.1 4种抗体表达的阳性率及定位 70例宫颈癌E-cad，α-cat，β-cat，γ-cat阳性表达率分别为60%（42/70），50%（35/70），50%（35/70），44.3%（31/70）。E-cad，α-cat，β-cat，γ-cat棕黄色阳性颗粒定位于细胞膜，呈网格状。
2.2 E-cad，cats蛋白表达的关系 对5种蛋白表达进行相互关联分析，发现E-cad和β-catenin蛋白表达有正相关性（r=0.2510，P<0.05）;α-catenin和E-cad蛋白表达有正相关性（r=0.2430，P<0.05）;其余蛋白表达差异未见相关性。
2.3 E-cad，cat与子宫颈鳞癌临床病理特征的关系 如表1所示，E-cad、β-cat蛋白表达与鳞癌分化程度有关，鳞癌分化程度越高，E-cad、β-cat阳性表达率越高（P<0.05），E-cad、β-cat缺乏表达易出现淋巴转移（P<0.05），余蛋白表达与淋巴结转移，临床分期，分化程度无关（P> 0.05）。
表1 E-cadherin，cats蛋白表达与宫颈癌临床病理特征的关系略
2.4 生存情况及预后因素的分析 70例宫颈鳞状细胞癌患者随访8～52个月，死亡22例，Kaplan-Meier法求得病例总体中位随访期生存率为70%。单因素分析结果肿瘤分化程度，肿瘤临床分期，淋巴结转移与否，E-cad、β-cat蛋白表达异常与生存期长短有关。高、中、低分化鳞状细胞癌平均生存时间分别为45个月、30个月、15个月（P<0.05），临床分期0～Ⅰ期的3年生存率为71%，Ⅱ～Ⅲ期3年生存率为51.2%（P<0.05），淋巴结转移阴性和阳性的3年生存率分别为87.2%和42.1%（P<0.05），E-cad阳性表达3年生存率为91%，阴性表达3年生存率为52%（P<0.05），β-cat阳性表达3年生存率为86%，阴性表达3年生存率为63%（P<0.05）。
3 讨论
E-cad是钙依赖细胞之间粘附跨膜糖蛋白，为上皮细胞表达的粘附分子，介导同质性粘附，即相同细胞间的粘附，它与连接蛋白α-cat，β-cat，γ-cat结合后发挥功能，有报告E-cad的表达与肿瘤分化程度、浸润、淋巴结转移和预后密切相关 ［1～3］ ，但也有无关报道 ［4］ 。本组实验结果表明，分化差的及有淋巴结转移的宫颈鳞癌，E-cad表达阳性率下降。估计E-cad表达下降时瘤细胞之间粘附能力下降，瘤细胞易于脱离瘤母体而出现转移。
连接蛋白（α、β、γ）与E-cad结合形成cad/cat复合体，发挥同质性粘附功能 ［5］，现研究发现β-cat同时也是wnt信号转导通路的下游元件，β-cat的异常表达，可启动c-myc，CD44v6，cyclinD1等基因转录，使细胞过度增殖 ［6］ ，本组实验结果表明，分化差及有淋巴结转移的子宫颈鳞癌，β-cat表达阳性率下降，证明在子宫颈鳞癌中β-cat与E-cad结合，发挥同质型粘附功能，抑制肿瘤侵袭、转移，而未体现wnt信号转导通路下游元件促细胞过度增殖的作用。本组 研究未发现α-cad，γ-cat与宫颈鳞癌分化，转移有关。
本研究结果显示，肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移情况、E-cad、β-cat的表达是影响宫颈癌术后生存期长短的主要指标。当E-cad、β-cat表达缺失时预示着术后生存率下降，可考虑进行辅助性放疗和化疗，以进一步提高生存率。而α-cat、γ-cat表达与肿瘤分化、淋巴结转移、临床分期的关系，可能涉及到细胞内信号传导，多个基因协同作用，可于今后在相关方面做更多研究。
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