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【摘要】 目的 研究年龄、性别和性激素含量与血浆淀粉样蛋白P成分（Serum amyloid P-component，SAP）的关系。方法 用凝胶过滤法等纯化大白鼠血浆中SAP，制作抗SAP的抗体。分别皮下注射estradiol（E2）0.5mg、testosterone（T）25mg和40mg、以及醋酸脱氢表雄酮（DHEA）3.5mg，连续采血到第8天后测量血浆中SAP。结果 （1）两性大白鼠血中SAP浓度随年龄增加而增加。（2）SAP具有性别差异，雌性明显高于雄性（P<0.001）。（3）血中SAP的浓度因E2的投与而增加，投与T则无明显改变，而投与DHEA则可降低。结论 大白鼠血中SAP浓度随年龄增加而增加。雌性鼠的SAP浓度高于雄性鼠。E2可以使SAP增加，DHEA使其降低，而T则对其无影响。
Effect of sex steroids on serum amyloid
P-component in rats Dong Yuzhen，
Jiang Aying，Gao Hong，et al.
Departrment of Obstetrics and Gryneocology，
No202Hospital of People’s Liberation Army，Shenyang110003.
【Abstract】 Objective To investigate the relationship among age，sex and sexual hormone with level of Serum amyloid P-component（SAP）.Methods Using gel filtration and affinity chromatography to purified the SAP of rat，and the anti-SAP was raised through the immunization of rabbits with the rat SAP.The rats were injected with estraˉdiol（E2），testosterone（T）or dehydroepiandrosterone（DHEA），and the SAP levels assayed sera were serially obˉtained from the tail vessel until the8th day after injection.Results （1）As the rats aged，the SAP levelsincreased folˉlowed aging.（2）Sex differences were found significantly（P<0.001）.（3）The SAP levels did not change after T adˉministration，but were increased rapidly by E2administration，especially in young male rats.On the other hand，the SAP levels were decreased significantly（P<0.05）by DHEA injection.Conclusion （1）The level of rat SAP was inˉcreased by aged.（2）LeveLs of SAP in ratwere significantly higher in females than in males.（3）The levels of SAP did not change by T administration but significantly increase by E2administration andsignificantly decrease by DHEA inˉjection.
Key words serum amyloid P-componentfemale protein rat estrogen
血清淀粉样蛋白P成分（Serum amyloid P-component，SAP）沉积在血管周围、肾小球基底膜及大脑神经细胞周围，导致组织老化、机体衰老 ［1，2］ 。在鱼类及其它某些脊椎动物也已发现同样的现象，在研究豚鼠时发现雌性豚鼠血中SAP浓度高于雄性豚鼠 ［3，4］ ，而对于人的SAP，研究者们发现在女性闭经后其SAP浓度明显增加，用雌激素补充疗法可以使其恢复到闭经前的水平 ［5］ ，近年还发现SAP与老年性痴呆有很大关系 ［6］ 。本研究为了观察SAP与年龄的关系、两性的差异、以及性激素对它的影响，从大白鼠血中提取和纯化SAP，制作抗SAP的抗体，用微量一元放射免疫扩散法测定大白鼠血中SAP浓度，对SAP与年龄、性别及性激素的关系进行了探讨。
1 资料与方法
1.1 实验动物及抗体制作 选取Wistar纯系大白鼠为实验动物。制作抗体所用的动物为家兔（月龄为4个月，体重为2.95kg）。将30只雌性大白鼠用颈椎脱臼法杀死后取心脏血，用琼脂糖层析柱纯化后，再用凝胶层析柱纯化，纯化后的蛋白经SDS-PAGE电泳和高速液相色普法确认其纯 度后，用常法免疫家兔，制作SAP特异性抗体。制作的抗体用琼脂糖免疫双扩散法检验其特异性。
1.2 检材采取的时期和方法
1.2.1 年龄变化和两性差的检查 采取11周龄、28周龄、37周龄、52周龄、58周龄和73周龄的雌、雄鼠各10只，共120只的心脏血，4℃3000rpm离心30min，分离血清。
1.2.2 投与性激素的影响 对11周龄的雌鼠10只和56周龄的雌鼠10只，各分为2组，每组5只，分别于背部皮下一次性注射雌二醇（Estradiol valerate，E2）0.5mg、睾丸酮（testosˉterone oenanthate，T）25mg（11周龄鼠）和40mg（56周龄鼠）;另取5只56周龄的雌性鼠，一次性背部皮下注射醋酸脱氢表雄酮（dehydroepiandrosterone acetate，DHEA）3.5mg。注射后第1、2、3、5和8天分别由尾部血管采血。作为对照，对5只56周龄的雌性鼠一次性背部皮下注射芝麻油0.7ml，然后与实验组同样采血。
1.3 血中SAP浓度的定量
1.3.1 微量一元放射状免疫扩散法（MSRID） 在含有抗SAP抗体的6.5cm×10cm×0.1cm的2.0%琼脂糖凝胶板上规则地开一些直径为1.0mm的小孔，用加样器向每个小孔中分别加入0.4μl不同的被检血清，作为阳性对照，在每个琼脂糖凝脚板的右上第一个孔和左下第一个孔内加入标准SAP0.4μl（6.2mg/dl）。加入各检材及标准对照后静止放置72h，然后脱蛋白，考马斯亮兰染色，将扩散轮经投影扩大后用计测器测量扩散轮的直径。
1.3.2 用MSRID法测量的重现性的检查 将已知血中SAP浓度（3.10mg/dl）的检材用MSRID法检测20次，结果各检测值均在2.95～3.28mg/dl（已知浓度的95%～106%）的范围内。
1.4 血中E2浓度的测定 血中E2浓度用第一放射性同位素检测试剂盒（第一放射性同位素研究所，日本），按照试剂和规定的条件和步骤进行了检测。
1.5 统计学处理 用F检验法检查各平均值间是否有差异。检测值P>0.05为差异无显著性，P<0.05和P<0.01为差异有显著性。
2 结果
2.1 年龄变化及性别差异对SAP的影响 11周龄雌性鼠的血中SAP浓度为2.9±0.7mg/dl，28周者为4.2±1.3mg/dl，37周者为6.3±1.8mg/dl，52周者为9.7±2.3mg/dl，58周龄鼠为10.7±2.8mg/dl，可见随着年龄的增长血中SAP浓度也在逐渐增加（图1）。周龄为73周的雌鼠血中SAP的浓度为10.6±1.4mg/dl，于58周龄鼠的浓度相似。同时，11周龄雄性鼠的血中SAP浓度为2.7±0.9mg/dl，28周龄者为2.5±1.2mg/dl，37周龄者为3.9±1.0mg/dl，52周龄者为7.0±2.1mg/dl，58周龄鼠为7.2±1.3mg/dl，73同龄为10.0±1.5mg/dl，从28周龄至58周龄鼠的血中SAP浓度性别的差异具有显著性（P<0.01），表现为雌性高于雄性，特别是以37周鼠最为明显（P<0.001）（图1）。
图1 不同年龄大白鼠血中SAP浓度的变化及性别差异ˇ雌雄鼠相比P<0.01，ˇˇ雌雄鼠相比P<0.001
2.2 投与性激素后血中SAP浓度的变动
2.2.1 雌激素的投与 投与雌激素前11周龄雄鼠血中SAP浓度为2.7±0.9mg/dl，一次性背部皮下注射E2（0.5mg/0.05ml），1日后血中SAP呈明显上升趋势，浓度为3.5±0.5mg/dl，2日后为3.3mg/dl，3日后为4.1±0.4mg/dl，5日后上升到4.9±0.7mg/dl，8日后为4.8±0.8mg/dl，呈持续性增高的倾向（图2）。56周雌性鼠投与前血中SAP浓度为10.4±3.1mg/dl，一次性注射E2（0.5mg/0.05ml）后，血中SAP呈上升趋势，3日后血中浓度为13.2±2.6mg/dl。投用E2前11周雄性幼鼠血中E2浓度为10±4pg/ml投与E2的2日后血中E2为227±43pg/ml，5日后为101±26pg/ml，8日后为89±27pg/ml。56周龄雌性鼠血中E2浓度在E2投用前为51±34pg/ml，投与E2后明显增加，第3 天为918±126pg/ml。
图2 雌激素投与后血中SAP浓度的变化ˇ与投与前相比血中SAP明显增加（P<0.001）
2.2.2 睾丸酮的投与 投用前11周雌性鼠血中SAP浓度为2.9±0.5mg/dl，一次性皮下注射T（25mg/0.2ml）后，血中SAP浓度几乎没有变化。56周雌鼠投与前血中SAP浓度为9.1±1.9mg/dl，一次性皮下注射T25mg后，血中SAP浓度未见明显变化，但第8天为8.9±1.9mg/dl，略有减少（图3）。
图3 睾丸酮投与后血中SAP浓度的变化
2.2.3 DHEA的投与 投与前56周龄雌鼠血中SAP浓度为10.6±2.1mg/dl，一次性皮下注射DHEA3.5mg后，血中SAP浓度在第1天和第2天呈逐渐下降的趋势，第3天达到8.1±1.8mg/dl，第5天下降为8.1±1.7mg/dl，第8天下降为7.5±2.5mg/dl（图4）。
2.2.4 油溶媒（芝麻油）的投与 56周龄雌性鼠在投与前血中SAP浓度为10.5±1.4mg/dl，一次性注射芝麻油0.7ml后血中SAP的浓度几乎没有改变（图4）。
图4 DHEA投与后血中SAP浓度的变化与投与前相比血中SAP明显增加（P<0.05）
3 讨论
由于SAP可以沉积在血管周围和大脑神经细胞周围，导致机体老化，因而受到人们的关注 ［1，2］ 。在鼠类动物，雌性鼠的血中浓度明显高于雄性鼠，而在给豚鼠投与睾丸酮可显著减少其SAP的浓度 ［5］ 。但在人类则相反，女性血中SAP浓度低于男性 ［6］ ，而且闭经后的女性投与雌激素可降低血中SAP的浓度 ［6］ 。在本实验中，雌性鼠血中SAP浓度高于雄性鼠，但这种差异在11周龄以前的幼鼠和37周以上的老龄鼠中不明显，而以28～58周龄鼠的差异最为明显（P<0.01）。28～58周龄是大白鼠性激素分泌最旺盛的时期，第二性征的发育也最为明显，因而其SAP浓度差也最为明显。同时，本实验发现，大白鼠与豚鼠不同，投与睾丸酮不影响血中SAP的浓度，说明性激素对SAP的影响因动物种类的不同而不同。另外，本实验还发现，大白鼠血中SAP浓度因雌激素的投与而增加，而投与DHEA可导致其减少，而且血中E2浓度增加可引起SAP的增加，但E2浓度高峰过后SAP的浓度还继续增加，E2投于8日后还保持血中SAP的高浓度。这说明一旦雌激素作用与肝脏的SAP合成细胞后其促进合成的作用可持续数天。从本研究还可看出，DHEA与E2和T都不同，有其自己的特性:它可降低血中SAP的浓度。最近发现DHEA具有抗老化和防癌的效果，分析可能与它具有降低血中SAP浓度的作用有关 ［7，8］ 。我们的研究证明:大白鼠血中SAP浓度随年龄的增加而增加，其浓度具有