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The influence of compatibility in shaoyaogancao decoctions on solubility of glycyrrhizic acid content
Chen Jianzhen，Chen Jianming
Zhejiang College of TCM，Hangzhou310053.
【Abstract】 Objective To investigate the influence of compatibility of shaoyaogancao decoctions on solubility of glycyrrhizic acid.Methods RP-HPLC method was used to determine the content of glycyrrhizic acid with Zorbax C18column（4.6×250mm，5um）and mobile phase of MeOH-0.2mol/L NH4OAc-HOAc（67:33:1）.The detecˉtion wave length was at250nm.Results Glycyrrhizic acid showed a good linear relationship at range of1.2～6.0ug.The average recovery rate was99.8%，RSD was1.34%.Conclusion The amounts of glycyrrhizic acid in Shaoyaoˉgancao decoctions was decreased compared with in radix glycyrrhizae.The method can be used for the quality control of Shaoyaogancao decoctions.
Key words shaoyaogancao decoctions compatibility glycyrrhizic acid HPLC
芍药甘草汤来源于张仲景《伤寒论》，由芍药和甘草组成，具有调和肝脾、缓急止痛的功效，用于血虚津伤所致的腓肠肌痉挛、肋间神经痛、胃痉挛、胃痛、腹痛和坐骨神经痛等证。研究表明两药配伍后在镇静、镇痛、解热等方面有协同作用 ［1］ 。有报道对芍药甘草汤配伍后的化合物进行过鉴定，从中分离出11种化合物，这些化合物与单味芍药、甘草相比基本一致，但对每一种成分量的变化尚未进行研究 ［2］ 。甘草酸为方中主要的有效成分之一，具有抗炎、抗病毒、保肝解毒及增强免疫等作用，本文采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC），对芍药甘草汤配伍前后的甘草酸含量进行测定 ［3，4］ ，探讨配伍组合对甘草酸溶出量的影响。
1 仪器与试剂
美国Waters510高效液相色谱仪，484型紫外检测器，岛津C-R4A数据处理器;AE-163电子天平（瑞士）。甘草酸单铵盐（ammonium glycyrrhizinate）（中国药品生物制品检定所）;甲醇（色谱纯），水为重蒸水，其它试剂均为分析纯;实验用药材购自本院中药饮片厂。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:ZorbaxC18（4.6mm×250mm，5μm）;流动相:甲醇-0.2mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸（67:33:1）;检测波长为250nm，柱温:25℃;进样量10μl。在上述条件下，甘草酸可与杂质峰完全分离，阴性样品无干扰。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取甘草酸单铵盐适量，置10ml容量瓶中，加50%甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成0.24mg/ml的对照品溶液。
2.3 供试品溶液制备 按芍药甘草汤配方比例，精密称取芍药、甘草各6g，加10倍量的水，浸泡15min后，煎煮2次，每次30min，混合2次药液，过滤，滤渣用少量水洗后，合并滤液，调整总量至240ml（含甘草量0.025g/ml），备用。精密量取水煎液10ml，置100ml容量瓶中，加50%甲醇定容，摇匀，取适量以3000r/min离心10min，上清液过滤，取续滤液，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，作为供试品溶液。同法制备单味甘草药材样品。
2.4 标准曲线制备 精密吸取上述对照品溶液5、10、15、20、25μl分别注入液相色谱仪，按上述色谱条件操作，测定峰面积积分值，以进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，求得回归方程为:Y=236680.1X+7232.7，r=0.9997，甘草酸进样量在1.2～6.0μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验 精密吸取甘草酸取对照品溶液（0.24 mg/ml）10μl，连续进样5次，测定其峰面积，RSD为1.05%，表明精密度良好。
2.6 重现性试验 取同一批样品5份，依法平行测定5次，RSD为2.12%，表明重现性良好。
2.7 稳定性试验 精密吸取甘草酸取对照品溶液（0.24 mg/ml）10μl，注入液相色谱仪，测定1次/h，共测定6次，RSD为1.78%，表明在6h内稳定性良好。
2.8 加样回收率试验 精密量取5份已知含量的芍药甘草汤水煎液各5ml，分别加入一定量的甘草酸单铵盐对照品（加入量与供试品中甘草酸的量基本相当），置100ml容量瓶中，加50%甲醇定容，摇匀，取适量以3000r/min离心10min，上清液过滤，取续滤液，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，依法测定含量，计算回收率。结果见表1。
表1 芍药甘草汤加样回收率
2.9 样品测定 精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μl，分别进样测定，按外标法计算水煎液中甘草酸含量，以甘草水煎液中甘草酸溶出量为100%，计算芍药甘草汤配伍后甘草酸的溶出率，5批样品的结果见表2。
表2 芍药甘草汤配伍前后甘草酸的含量和溶出率（n=3）Sample 注:ˉx 1 :甘草中甘草酸含量，ˉx 2 :芍药甘草汤中甘草酸含量
3 讨论
3.1 实验中使用的甘草酸单铵盐经面积归一化法计算其含量为87.12%，实际测定结果均已经过校正。
3.2 在流动相的配制中，冰醋酸和醋酸铵的比例应仔细调节，使pH值在3.8～4.2之间，可消除色谱峰拖尾及分离度差等现象。
3.3 从测定结果看出芍药甘草汤中甘草酸含量较单味甘草中的含量低，芍药与甘草配伍后甘草酸的溶出量约为单味甘草中溶出量的79.6%，溶出率下降20.4%，系由于复方在煎煮过程中发生物理、化学变化之故。本实验也从侧面反映了中药复方是由多种成分综合作用之结果。
3.4 本法中供试品溶液制备简单，测定快速，保留时间约为13min，结果准确，可作为该制剂的质量控制指标。
参考文献
1 陈奇.中成药名方药理与临床，北京:人民卫生出版社，1998，528.
2 谭洪根.芍药甘草汤配伍的化学研究.中国中药杂志，1995，20（9）:550.
3 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）.北京:化学工业出版社，2000，76.
4 刘陶世.甘芍注射液的质量标准研究.中成药，2000，22（3）:196.
基金项目:浙江省教育厅资助项目（20030953）
作者单位:1310053 浙江中医学院
2310006浙江省中医院