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首页合作平台在线期刊中华医药杂志2004年第4卷第9期药物与临床

HPLC法测定山茱萸中熊果酸的含量

来源:INTERNET
摘要:【摘要】目的建立山茱萸中熊果酸的含量测定方法。结论该方法简便、重复性好,可作为山茱萸质量控制方法。中国药典2000年版一部山茱萸是用薄层扫描法测定熊果酸含量,由于薄层扫描法测定误差大,近年来已有不少用HPLC法测定熊果酸的含量的文献报导。本文拟用HPLC法对山茱萸中熊果酸进行了定量分析,现将结果报告如下。...

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  【摘要】 目的 建立山茱萸中熊果酸的含量测定方法。方法采用HypersilODS色谱柱;流动相为乙腈-甲醇-水-醋酸铵(68∶10∶22∶0.5);检测波长为220nm;流速为1ml/min。结果 在1.99~9.96μg范围内具有良好的线性关系,r=0.9994,平均回收率为97.63%,RSD=1.00%。结论 该方法简便、重复性好,可作为山茱萸质量控制方法。

  中国药典2000年版一部山茱萸是用薄层扫描法测定熊果酸含量,由于薄层扫描法测定误差大,近年来已有不少用HPLC法测定熊果酸的含量的文献报导。本文拟用HPLC法对山茱萸中熊果酸进行了定量分析,现将结果报告如下。  

  1 仪器与试药

  HP-1050高效液相色谱仪;乙腈、甲醇为色谱纯,其他试剂均为分析纯;熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号742-200111);山茱萸(购于广东省药材公司中药饮片厂)。

  2 方法与结果

  2.1 色谱条件 色谱柱:Hypersil ODS(250×4.0mm,5μm);流动相为乙腈-甲醇-水-醋酸铵(68∶10∶22∶0.5);流速:1ml/min;检测波长:220nm;柱温:室温,在上述条件下样品中熊果酸(保留时间为18.9min)与齐墩果酸(保留时间为17.8min)等成分分离度大于1.5,理论塔板数大于8000,见图1~2。 图1 熊果酸对照品HPLC图谱图2 山茱萸HPLC图谱

  2.2 对照品溶液的制备 取熊果酸对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,摇匀,即得。

  2.3 供试品溶液的制备 取本品粗粉约1g,精密称定,置索氏提取器内,加乙醇醚适量,加热回流提取4h,提取液回收乙醚至干,残渣加石油醚(30℃~60℃)浸泡2次,每次15ml(约浸泡2min),倾去石油醚,残渣加甲醇微热使溶解,定量转移至5ml量瓶内,并稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。   

  2.4 线性关系考察精密称取熊果酸对照品适量,加甲醇制成每毫升含0.498mg的对照品溶液。分别精密吸取熊果酸对照品溶液4、8、12、16、20μl,按上述色谱条件进样测定,以进样量(μg)为横坐标,峰面积积分值A为纵坐标,进行线性回归,得到回归方程为Y=109.004X+11.996,r=0.9994,在1.99~9.96μg范围内线性关系良好。

    2.5 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液(0.498mg/ml)10μl,重复进样5次,平均峰面积为565.691,RSD为1.80%。

    2.6 稳定性试验 对同一熊果酸对照品溶液,每隔2h测定1次,结果平均峰面积为567.013,RSD为2.11%,在8h内较稳定。

    2.7 重复性试验 取同批样品5份,按含量测定项下方法平行试验,测得样品中熊果酸的含量平均为0.21%,RSD=2.65%。

    2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品适量,精密加入一定量的熊果酸对照品溶液(0.5mg/ml),按供试品溶液的制备及样品测定项下操作,结果见表1。表1 加样回收率试验结果样品含量 

  2.9 样品测定 精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μl,分别注入液相色谱仪中,测定峰面积,按外标法计算含量,结果三批山茱萸药材含量分别为0.20%、0.21%、0.24%,RSD分别为3.85%、0.64%及2.76%。

  3 讨论

  文献报导熊果酸的甲醇液在206nm [1]  、205nm [2]  处有最大吸收,在此波长下测定含量溶剂干扰很大。有文献 [3]  采用蒸发光散射检测器测定熊果酸的含量,以减少试剂的影响。由于蒸发光散射检测器还未能普及,多数文献仍采用紫外检测器进行熊果酸的含量测定。为了减少流动相引起的基线噪音,文献多用210nm [4]  、215nm [1,2]  、220nm [5]为检测波长,通过多次试验发现,在210nm、215nm仍有较大的基线噪音,220nm基线噪音较小,最后确定检测波长为220nm。  中药中齐墩果酸和熊果酸常并存,由于两者性质相似,不易将两者分离,因此流动相的选择应考虑使这两个成分能达到基线分离。文献报导能使齐墩果酸和熊果酸达到基线分离的流动相有乙腈-甲醇-水-醋酸铵(70∶16∶14∶0.5) 1]  ,乙腈-甲醇-水-醋酸铵(60∶14∶28∶0.6) [2]  甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(87∶13∶0.04∶0.02) [4]  ,甲醇-水(88∶12) [5]  ,经试验通过调节乙腈-甲醇-水适当比例,加入醋酸胺作为改性剂,可使齐墩果酸和熊果酸基本达到基线分离,试验最后确定乙腈-甲醇-水-醋酸铵(68∶10∶22∶    0.5)作为流动相。 供试品溶液的制备方法是参考中国药典2000年版一部山茱萸的制备,通过试验,用HPLC法替代薄层扫描法测定3批山茱萸含量,均在中国药典规定的范围内,表明本方法可行。

  参考文献

  1 丁晴,徐德然,王峥涛.HPLC法测定六味地黄丸及六味地黄胶囊中齐墩果酸、熊果酸的含量.中国中药杂志,2002,27(8):587-589.

    2 鞠建华,周亮,郑瑞霞,等.高效液相色谱法测定中药枇杷叶中熊果酸的含量.中国药学杂志,2003,38(9):657-659.

    3 冯燕芹,王振中,俞海荣.HPLC测定六味地黄丸(浓缩)中熊果酸的含量.中草药,1999,30(3):191-192.

    4 谢莹,杭太俊,程赞,等.高效液相色谱法测定中药中齐墩果酸和熊果酸含量.中国中药杂志,2001,26(9):615-616.

    5 袁珂,董留民.HPLC法测定冬凌草中熊果酸、齐墩果酸的含量.中国实验方剂学杂志,1998,4(6):1-2.

  作者单位:510370广东省广州市芳村区人民医院

作者: 涂兴明 黄有仲 欧阳毅 2005-7-4
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