念珠菌快速鉴定方法的初步探讨

　　念珠菌广泛存在于正常人的体表，通常并不致病，但由于广谱抗生素、激素、免疫抑制剂等广泛地应用，念珠菌病的发病率有所上升，如:口角炎、肠炎、脑膜炎及败血病等。所以，探讨一种及时而准确的细菌检出方法对于念珠菌病的诊断及治疗有着重要的意义，我们对临床20例患者不同标本的不同菌种作了一次观察，现报告如下。

　　　1 材料与方法

　　　1.1 标本来源 20例菌种分别来自20例不同患者的痰、分泌物及大便等标本，从中分离所得，初步菌有白色念珠菌、克柔氏念珠菌、酵母杆菌、酵母菌4种。

　　　1.2 培养基 （1）玉米粉琼脂:将玉粉置70ml水中，于60℃水箱中浸泡4h后，用脱脂棉过滤，补足蒸馏水至100ml，加入1%葡萄糖，再加吐温—80:0.1ml，置琼脂，10磅30min，高压灭菌，制成斜面。（2）沙保弱肉汤:蛋白胨2g，麦芽糖4g，加入蒸馏水100ml，将其pH调至5.5，10磅30min 高压灭菌，分装小试管。（3）沙保弱平板:将沙保弱肉汤100ml，加入琼脂1.6g，10磅30min灭菌、冷却至50℃倒平板。（4）血清管:取正常未污染细菌血清分装于小试管，每管约0.5ml。（5）所需单糖的制作:同试验室常用之单糖管的制作。

　　　1.3 方法 将20例菌种分别种入所需培养基:置37℃孵箱，按所需的时间，观察其生长情况。在玉米粉琼脂及糖管中的生长每日观察1次，需观察10日，沙保弱肉汤24～48h，血清中芽管的生长分别需:2h、24h、48h，进行观察，沙保弱平板上菌落的生长情况分别需24h、48h。

　　　2 结果

　　　本实验所取20例菌种中，白色念珠菌占11例、克柔氏念珠菌3例、酵母菌2例、酵母样菌4例。本实验所得结果见表1。表1 20例菌种实验结果（略）注:（+）产酸产气，阳性;±多数阳性;+/（+）:多数产酸、少数产酸产气

　　　3 讨论

　　　由上述结果，即用厚膜孢子及芽管实验来确诊白色念珠菌为既可靠又快速的方法（因为仅白色念珠菌有厚膜孢子及芽管产生，见表1），而糖发酵实验往往随着培养条件、时间、菌龄等而发生变异，不易达到一致和稳定的结果，且培养时间又较长，故一般不必做糖发酵实验。由本文实验结果可得出:有厚膜孢子、则一定产生芽管，但实际工作中值得注意的是:若经24h培养后，若无厚膜孢子出现，并不能轻率否定不是白色念珠菌，因为往往一 些少数菌株（白念）需3天培养时间后方有厚膜孢子产生，所以，为了缩短培养时间，可进行芽管实验来确定。另外，培养基好坏也影响着念珠菌的生长，所以，在制作时，应了解到，其培养与繁殖不需复杂的营养物质，最适温度22～27℃（也有37℃生长良好的），pH5～7，需较高的湿度、氧气，且琼脂的量要适当，以便于念珠菌在其中更好地生长发育，达到既准确又及时地发出检验诊断报告，有利于临床医师对念珠菌病的诊断及治疗。

　　　作者单位:1454000河南省焦作市第二人民医院2河南省濮阳县人民医院