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首页合作平台在线期刊中华医药杂志2004年第4卷第11期实验研究

热休克蛋白70单抗诱导宫颈癌细胞凋亡的研究

来源:INTERNET
摘要:【摘要】目的探讨热休克蛋白70(HSP)单抗对宫颈癌细胞凋亡的诱导。方法体外培养宫颈癌细胞株,免疫化学方法检测HSP70,TUNEL技术观察HSP70单抗对细胞生长的影响。结果经不同浓度HSP70单抗后,免疫化学方法检测HSP70的表达显著受到抑制。TUNEL检测出细胞凋亡。...

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  【摘要】 目的探讨热休克蛋白70(HSP)单抗对宫颈癌细胞凋亡的诱导。方法体外培养宫颈癌细胞株,免疫化学方法检测HSP70,TUNEL技术观察HSP70单抗对细胞生长的影响。结果 经不同浓度HSP70单抗后,免疫化学方法检测HSP70的表达显著受到抑制。TUNEL检测出细胞凋亡。结论 HSP70单抗明显诱导宫颈癌细胞调亡。

  【Abstract】 Objective To study apoptosis induced by HSP70Mab in cancer ofcervix.Methods Expres-sion of HSP70was examined through SABC technique.Hela was detected by TUNEL technique.Results HSP70Mab inhibited the expression of HSP70markedly.Apoptosis were detected by TUNEL technique.Conclusions HSP70Mab can induct apoptosis in cancer of cervix.Key words heat shock protein apoptosis

  近年来研究HSP70的细胞保护,但其抗凋亡作用及调控机制还不清楚。

  1 材料和试剂

  宫颈癌Hela细胞株(由本校细胞教研室提供)、RPMI-1640(华美生物公司)、小鼠抗人HSP70单克隆抗体、SABC免疫组化试剂盒、TUNEL试剂盒(武汉博士德生物公司)

  2 实验方法

    2.1 细胞的培养及处理 10%小牛血清、1%青霉素的RPˉMI1640培养液于37℃、5%CO 2 培养箱内培养。取出对数生长期细胞,接种后加入效价为1:100的小鼠抗人HSP70单抗,终浓度为5、20、80μl/ml,PBS作空白对照。每组9次重复。

    2.2 光镜观察 相差倒置显微镜和HE染色观察。

    2.3 SABC免疫组化检测HSP70的表达 按免疫组化试剂盒说明书操作。

    2.4 TUNEL技术检测凋亡细胞 按试剂盒说明书操作。经TUNEL技术检测,胞核深棕色的即凋亡细胞,连续数1000个细胞,计算凋亡细胞百分比及其标准差。

  2.5 数据统计 采用方差分析,Dunnett t检验

  3 结果

    3.1 光镜观察经HSPMAb作用48h后观察可见细胞体积缩小,细胞核固缩成半月形、致密碎裂现象。

    3.2 SABC免疫组化检测HSP70的表达 空白组HSP70在细胞浆高表达;处理组HSP表达被封闭。

    3.3 TUNEL技术检测凋亡细胞 TUNEL技术检测出凋亡细胞,细胞核固缩、染色质致密。

    表1 HSP70单抗诱导细胞凋亡率(%)注:与对照组比较, ˇ P<0.05。

  4 讨论

  本研究探索宫颈癌细胞株在体外培养状态下,经不同浓度HSP70单抗处理不同时间后,HSP70表达被阻断,宫颈癌细胞的生长受到抑制并且发生凋亡。本研究通过HSP70MAb结合细胞内已存在的HSP70 [1]  ,使其不能发挥抗凋亡的作用;封闭细胞内合成HSP70,使其阻抑了癌细胞HSP70的作用,可能通过上述途径激活凋亡信号传导通路 [2,3]  ,从而表现诱导宫颈癌细胞凋亡的作用。

  参考文献

  1 Iwaya K,Tsuda H,Fujita S,et al.Lab Invest,1995,72(6):707-714.

  2 Buzzard KA,GiacciaAJ,Killender M,et al.J Biol Chem,1998,273(27):17147-17153.

  3 凌明圣.分子伴侣Hsp70研究进展.国外医学·分子生物学分册,1993,15(5):227-230.

  作者单位:1163331黑龙江八一农垦大学

  黑龙江大庆大庆油田总医院骨科

作者: 刘 哲 张 峰 2005-7-6
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