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1 材料与方法
1.1 药品与试剂 敖东牌参茸龟芪口服液，棕色液体，人体日摄入量为0.033ml/（kg·bw）。血乳酸测试酶膜，尿素测定试剂盒，肝糖原试剂盒;绵羊红细胞、Hank's液、RPMI1640培养液、PBS缓冲液、补体、SA缓冲液、琼脂糖、都氏试剂印度墨汁等。
1.2 实验动物 选用中国医科大学实验动物部提供的昆明种小鼠（许可证号SCXK（辽）2003-0009）。
1.3 仪器 722分光光度计、匀浆机、离心机、生化培养箱、游泳箱、全自动生化分析仪、生物传感分析仪、天平、洁净工作台、二氧化碳培养箱、恒温水浴箱、酶标仪等。
1.4 方法 安全性试验按《食品安全性评价程序和方法》进行;功能试验按《保健食品功能试验评价程序和检验方法规范》进行。
1.4.1 小鼠急性毒性试验 采用霍恩法进行试验。小鼠体重为18.0～21.7g，每个性别小鼠随机分成4个剂量组21.50、10.00、4.64、2.15g/（kg·bw）。小鼠灌胃后连续观察14天。
1.4.2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验 采用间隔24h经口灌胃法进行试验，用体重25.1～28.7g小白鼠，按体重随机分组。受试物剂量为0.94、1.88、3.75、7.50g/（kg·bw），以40mg/（kg·bw）剂量的环磷酰胺（CP）为阳性对照，蒸馏水为阴性对照组。每只动物计数1000个嗜多染红细胞（PCE）的微核发生率。
1.4.3 小鼠精子畸形试验 用体重30.0～35.0g的性成熟雄性小鼠，按体重随机分组。受试物剂量1.88、3.75、7.50g/（kg·bw）。以40mg/（kg·bw）环磷酰胺（CP）为阳性对照组，蒸馏水为阴性对照组。每组计数5只动物，每只动物计数1000个结构完整的精子，计算畸变精子发生率。
1.4.4 Ames试验 采用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四个试验菌株进行试验。采用多氯联苯（PCB）诱导的大鼠肝匀浆作为体外代谢活化系统。试验设0.313、0.625、1.250、2.500、5.000mg/皿5个剂量，各剂量组以蒸馏水稀释，同时设空白对照、阴性对照（蒸馏水）和阳性对照（非活化系统TA97、TA98、TA102为敌克松50.0μg/皿，TA100为叠氮钠1.5μg/皿。活化系统采用二氨基芴10.0μg/皿）。每个剂量做3个平行。整套试验在相同条件下重复做2次并分别统计。受试物的回变菌落数是自发回变菌落数2倍以上，并具有剂量———反应关系者则定为阳性。
1.4.5 抗疲劳试验 负重游泳试验、血清尿素测定、肝糖原测定、乳酸测定，各选健康雄性小鼠40只，体重18～22g，分为4组，每组10只。以厂家最低日推荐成人摄入量的1、10和30倍设置灌胃剂量，即0.33、3.33、10ml/（kg·bw·d），各剂量组以蒸馏水稀释，蒸馏水作空白对照组，各组小鼠灌胃量为0.2ml/（10g·bw·d），连续灌胃30天。
1.4.6 免疫试验 免疫一组，进行脏器/体重比值测定、迟发型变态反应、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、半数溶血值（HC50）的测定和抗体生成细胞检测;免疫二组，进行碳廓清实验;免疫三组，进行ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验和NK细胞活性测定。三组各选用昆明种健康雄性小鼠48只，体重18～22g，分为4组，每组12只。剂量设计及各给药方法同抗疲劳试验。
1.5 实验数据统计 实验数据统计均采用SPSS统计软件进行方差分析。
2 结果
2.1 小鼠急性毒性试验 灌胃后，各剂量组未出现中毒症状，根据结果判断，该受试物小鼠急性毒性LD 50 >15g/（kg·bw），为无毒级。
2.2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验 经卡方检验，各剂量组微核率与阴性对照组比较差异无显著性（P>0.05），阳性对照组与阴性对照组比较差异有非常显著性（P<0.01）。该受试物小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验为阴性。
2.3 小鼠精子畸形试验 经Wilconson秩和检验，各剂量组精子畸形率与阴性对照组比较差异无显著性（P>0.05），阳性对照组与阴性对照组比较差异有非常显著性（P<0.01）。小鼠精子畸形试验为阴性。
2.4 Ames试验 各剂量组回变菌落数均未超过阴性对照组回变菌落数的2倍，亦无剂量———反应关系。说明该受试物对鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四菌株，加与不加S9，均未呈现遗传毒性。
2.5 抗疲劳试验 经口给予小鼠敖东牌参茸龟芪口服液0.33、3.33、10ml/（kg·bw·d），连续灌胃30天，能延长小鼠负重游泳时间（高剂量组），减少小鼠游泳时血清尿素的产生（高、中剂量组），减少游泳时血乳酸的产生（高剂量组），增加肝糖原储备（高、中剂量组），由此判定敖东牌参茸龟芪口服液具有缓解体力疲劳作用。
2.6 免疫试验 经口给予小鼠不同剂量的敖东牌参茸龟芪口服液30天，能提高小鼠的半数溶血值（高剂量组）、小鼠抗体生成细胞数（高剂量组）、能增强小鼠的迟发型变态反应（中、高剂量组）;对小鼠的体重增长、脏器/体重比值、小鼠单核-巨噬细胞碳廓清的能力、ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力、NK细胞活性无影响。由此判定，敖东牌参茸龟芪口服液具有增强免疫力功能作用。
表1 敖东牌参茸龟芪口服液对小鼠半数溶血值HC50、抗体生成细胞数、迟发型变态反应（DTH）的影响略
3 讨论
资料表明，人参提取物可以增强免疫活性细胞的功能，促进抗体和补体的生成 ［1］ ;人参乙醇提取物具有较强的缓解疲劳作用，可明显延长小鼠游泳时间 ［2］ 。鹿茸、龟甲、黄芪有增强免疫、缓解人体疲劳的作用 ［2，3］ 。
本试验结果表明，以人参、马鹿茸、龟甲、黄芪等为主要原料的参茸龟芪口服液安全无毒，有增强免疫力功能，缓解体力疲劳作用。
参考文献
1 陈可冀.抗衰老中药学，北京:中医古籍出版社，1988，23.
2 王振宇.鹿茸的药理作用及临床应用进展.中医药信息，2003，3（20）:14.
3 凌静.黄芪的临床应用及展望.中医药信息，2003，3（20）:7.
作者单位:130061吉林省卫生监测检验中心毒理科