点击显示 收起
1 仪器及试药
1.1 仪器 日本岛津高效液相色谱仪、LC-10AT泵、SPD-10A型紫外可见光检测器、C-R6A型数据处理机、MET-TLER-AE240电子天平（瑞士）。
1.2 试药 乙腈，天津市科密欧化学试剂开发中心产品（色谱纯）;乙醇，开封化学试剂总厂产品，（AR）;乙酰乙酯，天津市伯迪化工有限公司产品，（AR）;水（纯化水）;连翘苷对照品，中国药品生物制品检定所（批号0821-200104）;抗病毒口服液，河南龟山神草药业有限责任公司产品。
2 方法与结果 ［1］
2.1 色谱条件 色谱柱:Agilent-C18（4.6×150mm，5°μm）。流动相:乙腈-水（25:75），流速:10ml/min，检测波长:277nm，柱温:室温，进样量:10μl。理论塔板数:按连翘苷计不得低于3000。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取连翘苷对照品10.06mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密量取贮备液2ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml含连翘苷对照品0.2012mg）。
2.3 供试品溶液的制备 精密量取供试品溶液50ml置分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇，提取6次，每次30ml，合并提取液，回收乙酸乙酯并蒸发至干，残留物加少量甲醇溶解，再加中性氧化铝适量，拌匀，加于中性氧化铝柱（100～120目，2g，内径1～1.5cm）用水30ml冲洗，弃去洗液，再用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣用50%甲醇溶解后移入10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
2.4 阴性对照品 取本药处方中除连翘外的所有药物，按抗病毒口服液的制备工艺制得阴性对照品，按供试品溶液的制备方法操作，所得结果见图1～3。
2.5 线性关系考察 精密量取对照品贮备液1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml，分别置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，浓度分别为0.1006、0.1509、0.2012、0.2515、0.3018mg/ml。按上述色谱条件进样，进样量分别为1.006、1.509、2.012、2.515、3.018μg。以连翘苷的进样量（μg）对峰面积A进行线性回归（n=5），得回归方程A=303986.3C+792.4，r=0.9995，结果表明连翘苷在1.006～3.018μg范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验 取对照品溶液和供试品溶液，按上述色谱条件连续进样5次，RSD分别为0.4%和0.5%。
2.7 稳定性试验 取对照品溶液和供试品溶液，按上述色谱条件进样，所得对照品和供试品的平均峰面积分别为601167和259985，放置1、2、4、8h后再进样，对照品和供试品的平均峰面积基本不变，RSD分别为0.4%和0.5%。
2.8 重复性试验 取同一批号的样品，在同日内和不同日期，分别由不同操作者提取，在同一台仪器上测定5次。结果日内的RSD为1.4%，日间的RSD为1.8%，表明重现性基本良好。
2.9 加样回收率试验 精密取已知含量的同一批样品5份，除精密加入1ml对照品溶液外，其余操作按供试品溶液的制备。结果得平均回收率为99.0%（n=5），RSD为0.2%，结果见表1。
表1 加样回收率试验结果 （略）
2.10 样品测定 精密量取供试品液（3个批号）和对照品液各10μl，按上述色谱条件进样，用外标法测定其连翘苷的含量，结果见表2。
表2 三批不同样品的测定结果 （略）
3 讨论
3.1 供试品溶液预处理 参照卫生部药品标准新药转正第2册 ［2］ 抗病毒口服液含量测定项下，洗液由30%乙醇改为水，这样能更有效地除去杂质。
3.2 高效液相色谱法与薄层扫描法相比较 高效液相色谱法测定的结果略比薄层扫描法测定的结果稍为偏高，这是高效液相色谱法比薄层扫描法精确度高的缘故。
3.3 试验结果表明 本法重复性好，回收率和精密度均较高，且操作简单。在没有薄层扫描仪的情况下，完全可以作为抗病毒口服液中连翘苷的含量测定。
参考文献
1 国家药典编委会.中国药典，2000年版（一部）.北京:化学工业出版社，2000，135.
2 国家药典编委会.卫生部药品标准新药转正第2册.北京:化学工业出版社，2000，7.
作者单位:464000河南省信阳市药品检验所