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α 1 -酸性糖蛋白（α 1 -acid glycoprotein，α 1 -AG），又称类粘蛋白（Orosomucoid），是一种糖蛋白，蛋白电泳时位于α 1 -球蛋白位，属急性相反应蛋白。在各种组织损伤或炎症、肿瘤时血清中的含量将升高 ［1，2］ 。α 1 -AG同时又是多种药物的主要结合蛋白，其浓度的变化将影响药物的代谢，因此测定α 1 -AG对指导临床用药有重要意义 ［3，4］ 。一般α 1 -AG的测定采用ELISA法、免疫扩散或浊度法等 ［2］ 。本文对α 1 -AG的测定进行研究，利用分光光度法测定了血清中的含量。
1 材料与仪器
1.1 实验试剂 考马斯亮蓝G250，甲基纤维素，盐酸，乙酸，高氯酸HClO 4 ，氯化钠，2，4-二硝基苯肼。
1.2 仪器 恒温水浴仪，UV-240紫外可见分光度计，真空冷冻干燥机FD-80L5型。
1.3 CBB溶液的制备 称取200mg的考马斯亮蓝G250，加1g/L甲基纤维素500ml，1mol/L HCl200ml，1mol/L乙酸钠150ml，混匀，加蒸馏水至1000ml，混匀，静置过夜，第二天用Whatman1号滤纸过滤即得。
1.4 0.6mol/L HClO 4 溶液 取70%HClO 4 AR53.8ml（分子量100.47，比重1.6），溶于蒸馏水并加至1000ml。
1.5 血清α 1 -AG标准品 取正常血清20ml，加0.6mol/L HClO 4 200ml，混匀，静置20min，以3000r/min离心沉淀20min。上清液经Whatman1号滤纸过滤，并用蒸馏水透析24h，冷冻干燥即为α 1 -AG标准品。
2 实验方法
2.1 CBB法测定血清α 1 -AG 吸取血清100μl（空白管取8.5g/L氯化钠溶液100μl），加0.6mol/L HClO 4 1.0ml，充分混匀，静置20min，以3000r/min离心沉淀20min。吸取上清液200μl，加CBB溶液3.5ml，混匀，置37℃15min，以空白管调零，在波长593nm处读取吸光度，查标准曲线得α 1 -AG的含量。称取一定量的α 1 -AG标准品，溶于正常人血清中，配制系列标准液，以该正常人血清为基底空白，按上法测定并纪录吸光度，绘制标准曲线。
2.2 苯肼法测定血清α 1 -AG 取100μl血清，加入5ml0.6mol/L HClO 4 ，混匀，静置20min，以3000r/min离心沉淀20min。取上清液2ml，加入0.1ml4.0mol/L的水合肼，置于100℃的热水中加热0.5h。然后加入0.6ml0.02mol/L的苯肼乙酸溶液（400ml/L），在60℃中温育1h。在3000r/min离心10min，取上清液在337nm处进行测定。称取一定量的α 1 -AG标准品，溶于正常人血清中，配制系列标准液，以该正常人血清为基底空白，按上法测定，检测吸收曲线和纪录吸光度，绘制标准曲线。
3 结果与讨论
3.1 酸性糖蛋白的检测原理 在血清中，加入HClO 4 可使除酸性糖蛋白外的其他蛋白沉淀。在上清液中，加入水合肼可使糖分子从糖蛋白中释放出来。单糖分子与苯肼反应生成糖脒（见图1），在337nm处检测糖脒分子的吸光度。对照α 1 -AG标准品的吸光度，即可测定样品中酸性糖蛋白的含量。ig1 Formation of D-glucose phenylosazone（yellow pigment）
3.2 酸性糖蛋白的吸收曲线 称取一定量的酸性糖蛋白标准品，溶于正常人血清中，以该正常人血清为基底空白，用苯肼法进行测定，在250～450nm波长范围内进行测定，得到标准品的吸收曲线（见图2）。结果表明，在286nm和337nm处有较大吸收。为了减少本底的干扰，我们选择337nm作为测定波长。 Fig2 absorbent curve of standardα 1 -AG
3.3 线性范围和回收率 配制不同浓度的标准品，以2.2方法进行测定，测得线性范围为41.0～57400mg/L。在最低检测浓度41.0mg/L处在正常人血清中加入410～20500mg/L的α 1 -AG标准品进行回收率实验，测得回收率在89.5%～98.9%。
3.4 温育时间试验 分别在100℃和60℃的热水中进行加热时间试验，试验测得最佳时间是100℃加热0.5h和60℃加热为1h。
3.5 正常人血清α 1 -AG的测定结果 取正常人血清40 份，利用苯肼法进行测定。测得α 1 -AG的平均值为0.588～1.504g/L（ˉx±s），n=40），结果与CBB法比较基本一致。3.6 α 1 -AG是血浆蛋白中糖含量较高的一种糖蛋白，其糖含量高达40%以上。部分与肿瘤有关的α 1 -AG中糖含量只有约30%，分子量约为41KD。最近实验研究表明，α 1 -AG具有许多免疫抑制活性和免疫调节功能，其免疫抑制活性和糖链结构有关。因此测定血清α 1 -AG在临床上具有重要意义。
参考文献
1 李影林.中华医学检验全书（上卷），北京:人民卫生出版社，1996，654.
2 朱忠勇.实用医学检验学，北京:人民军医出版社，1992，256-257.
3 David R.Glycoprotein Detection in Polyacryamide Gel with Thymol and Sulfuric Acid.Anal Biochem，1979，99:474-476.
4 Murtiashaw M H，Young J E，Strickland A L，et al.Measurement of nonezymatically glycosylated serum protein by an improved thiobarbituric acid assay.Clin Chim Acta，1980，19:81-87.
作者单位:510182广州医学院化学教研室