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首页合作平台在线期刊中华医药杂志2005年第5卷第4期检验与临床

溴甲酚紫法测定血清白蛋白

来源:INTERNET
摘要:长期以来,溴甲酚绿(bromcresolgreen,BCG)染料结合法测定血清白蛋白(Albumin,ALB)广泛应用于临床,国内大多数医院目前仍然沿用这一方法,但该法会因BCG与非白蛋白类蛋白质结合而受到非特异性干扰。近年有外国公司推出了溴甲酚紫(bromcresolpurple,BCP)法测定血清白蛋白的商品化试剂,国内已经有部分医院引入相......

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  长期以来,溴甲酚绿(bromcresol green,BCG)染料结合法测定血清白蛋白(Albumin,ALB)广泛应用于临床,国内大多数医院目前仍然沿用这一方法,但该法会因BCG与非白蛋白类蛋白质结合而受到非特异性干扰。近年有外国公司推出了溴甲酚紫(bromcresol purple,BCP)法测定血清白蛋白的商品化试剂,国内已经有部分医院引入相应的仪器和试剂并逐年增多,但对BCP测定白蛋白的结果却未见完整评价。在临床实际工作中,用这两种方法测定血清白蛋白的结果可有较大差异,对一些需要对白蛋白准确定量的病人的诊治造成一定的困扰。本试验特对BCP测定白蛋白的方法做一评价,并对其与传统BCG法的差异做一比较 [1] 。

    1 材料和方法

    1.1 仪器与试剂 BECKMAN CX5型全自动生化分析仪、美国BECKMAN ALB试剂(批号442765);ALB标准品采用英国RANDOX Calibrator(批号CAL2350);质控品采用英国RANDOX(批号226UE)和BECKMAN Decision Level3(批号008003)。

    1.2 原理 在pH4.9醋酸盐缓冲液中,溴甲酚紫与白蛋白结合形成绿色复合物,在600nm波长处的吸光度与白蛋白浓度成正比,与同样处理的白蛋白标准比较,可计算样品血清中的白蛋白浓度。

    1.3 方法 取RANDOX Calibrator的中间水平42g/L作标准,以两管去离子水作为0g/L的标准对CX5进行假三点定标,随后测定83g/L、72.63g/L、62.25g/L、55.33g/L、42g/L、28g/L、21g/L、14g/L、10.5g/L、5.0g/L共10个浓度的ALB标准溶液及其吸光度,制作标准曲线;收集30ml新鲜混合血清用CX5进行批内和批间精密度试验。另收集100份门诊就诊者血清,用System Calibrator对CX5的ALB进行定标后,生化分析仪进行ALB检测。

    2 结果

    2.1 标准曲线 用CX5全自动生化分析仪检测上述10个不同浓度的ALB标准液的吸光度,以ALB浓度为横坐标,以吸光度为纵坐标绘制校正曲线。结果表明ALB浓度在5.0~83g/L之间,线性关系良好,相关系数为1.000,回归方程式:y=0.234x-11.588。

    2.2 精密度 收集30ml新鲜混合血清(无明显溶血、脂血、黄疸者),分成60份,取30份上CX5连续分析,求得平均值为42.76g/L,SD=0.418,批内变异系数为0.95%;另30份混合血清样品置-20℃冰箱冷冻保存,每日早晚各测定1次,共计15天,测得其平均值为41.92g/L,SD=1.27,批间变异系数为3.03%。

    2.3 回收率 取1份新鲜血清分装为4管,每管900μl,CX5测定其中1管ALB浓度为39.70g/L,另3管分别加入14g/L、42g/L、83g/L的ALB标准液100μl,测得回收浓度分别为1.36g/L、4.30g/L和8.20g/L,回收率分别为97.1%、102.4%和98.8%,平均回收率为99.4%。

    2.4 干扰试验 取1份新鲜血清,测定其ALB为41.2g/L。将胆红素纯品配成378μmol/L的溶液,将血清样品与胆红素溶液按9:1、2:1、1:1、1:2的比例进行混合,然后测定ALB含量。结果表明,252μmol/L的胆红素对BCP法测定ALB无影响。溶血标本血红蛋白≤4.0g/L时对测定无明显干扰。

    2.5 显色稳定性 ALB可与BCP进行即时完全反应,不受时间和温度变化的影响,反应后吸光度可稳定1h以上。

    2.6 方法对比试验 用本法(X)和BCG法(Y)分别测定100份门诊就诊者血清ALB,经统计处理,其回归方程为y=1.08x+5.98,r=0.929,经SPSS软件统计其F=364.84,P<0.001,两种方法测定结果显著相关。将两种方法测定100份样品的结果进行配对t检验,t=38.29,P<0.001,两种方法测定的结果差异有显著性。但将BCP法的测定结果经回归方程换算后,两法结果非常接近。

    2.7 正常参考值 用BCP法测定120例健康成人血清ALB含量,其中男65例,女55例,年龄18~50岁,结果为41.5±3.75g/L,参考值范围:34~49g/L。与国外人群的参考值范围35~50g/L相近 [2] 。

    3 讨论

    传统的溴甲酚绿法测定血清白蛋白会受到非白蛋白类蛋白质的非特异性干扰,而BCP试剂的最适pH值为5.20,接近a-和b-球蛋白的等电点,能抑制这两种球蛋白与BCP的非特异性反应,因此对测定白蛋白具有更高的特异性 [3] 。本试验的结果表明,BCP法测定血清ALB的精密度较好,回收率高,线性范围可达10~80g/L,比传统的BCG法更宽,而且不易受溶血、黄疸和脂血等临床常见干扰因素的干扰。

    参考文献

    1 丛玉隆,马俊龙,秦晓玲.当代提液分析技术与临床,北京:中国科学技术出版社,1999,199-202.

    2 叶应妩.全国临床检验操作规程,北京:中华人民共和国卫生部医政司,1997,157-158.

    3 Piano MR,Schwert DW.Alcholic heart disease:A review.Heart Lung,1994,23(1):3.

   
    作者单位:255035山东省淄博市张店区中医院检验科
    山东省淄博市张店区人民医院检验科

作者: 黄井堂 梁 爽 2005-7-11
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