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1 实验材料
1.1 菌种 金黄色葡萄球菌(26003)、绿脓杆菌(10104)。
1.2 培养基 胆盐乳糖增菌液(BL)、营养肉汤增菌液、甘露醇高盐琼脂、十六烷三甲基溴化胺琼脂培养基均为中检所提供干燥培养基。
1.3 供试品 聚维酮碘泡腾片由吉林省中医中药研究所提供。
1.4 其他 pH7.2磷酸盐缓冲液按《中国药典》2000年版附录XIII C配制。淀粉:市售食用淀粉(经105℃,4h干热灭菌)。
2 试验方法与结果
2.1 菌液制备 取金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌的营养肉汤斜面培养物少许,接种到营养肉汤培养基内培养18~20h后,以10倍稀释至1:10 6~8 ,计数备用。
2.2 供试液制备 取聚维酮碘泡腾片10g,置匀浆杯中,加入100ml pH7.2磷酸盐缓冲液以3000r/min,匀浆2min,使全部溶解,即1:10供试液备用。
2.3 方法1:淀粉吸附-薄膜过滤法 取供试液20ml共2份,置2支无菌离心管中,各加入淀粉5g,用无菌玻璃棒轻搅拌均匀,以500r/min离心5min,用滴管取出上清液加到孔径为(0.45±0.02)μm微孔滤膜过滤器中,减压抽干,以缓冲液冲洗滤膜2~3次,每次50ml,取出滤膜剪成2片,分别加入到2瓶营养肉汤及2瓶BL增菌液中,其中1瓶营养肉汤中加入金黄色葡萄球菌菌液,1瓶BL增菌液中加入绿脓杆菌菌液作为阳性对照,加菌量为50~100CFU,另外2瓶不加菌作为供试品检验。取上述增菌液置(35±1)℃培养24~48h。分别在十六烷三甲基溴化胺和甘露醇高盐琼脂平面板上画线分离,按《中国药典》2000年版检查绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌。结果见表1。
表1 两种方法控制菌检验结果(略)
2.4 方法2:淀粉吸附法 取供试液20ml共2份,置2支离 心管中,各加入淀粉8g,轻轻搅拌均匀,以500r/min离心5min,取上清液分别均匀加入到2瓶胆盐乳糖增菌液及2瓶营养肉汤增菌液中,其中1瓶胆盐乳糖增菌液及营养肉汤增菌液中,分别加入50~100CFU绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌作为阳性对照,另外2瓶不加菌作为供试品检验。取上述增菌液,按上述方法同样操作。结果见表1。
2.5 方法可行性试验 取供试液20ml共4份,分别置离心管中,其中两管加入金葡球菌,另外两管加入绿脓杆菌(菌液加入量约100~200CFU),分别按上述两种方法操作,检查两种方法绿脓杆菌、金葡球菌的检出情况,同时,按上述方法不加菌做空白试验,检出试验菌为“+”,未检出“-”,结果见表2。
表2 两种方法可行性试验结果(略)
3 讨论
聚维酮碘泡腾片为聚乙烯吡咯烷酮与碘的络合物,80%~90%结合碘可解聚成游离碘,抗菌谱广,杀菌力强 [2] 。根据碘与淀粉能够形成蓝色络合物,我们在供试液中加入一定量的淀粉,搅拌后供试液由红棕色变为蓝色。用低速离心,使不溶性物质沉降于管底。取上清液或经薄膜过滤后检查,两种方法结果均显示,可排除本品对阳性菌的干扰作用。其中方法1,加淀粉5g,吸附碘的程度稍差,再经薄膜过滤法,可完全排除其抑菌成分。而方法2,加淀粉8g,吸附碘的能力较强,操作更为简便,但不溶性物的体积较大,吸取上清液时需小心操作。方法可行性试验结果显示,在供试液中人为加入(100个/g)阳性菌,经淀粉吸附后,两种方法均能够检出试验菌,说明此两种方法可行。
参考文献
1 郑钧镛,王光宝.药品微生物学及检验技术,北京:人民卫生出版社,1989,249.
2 张素梅.聚维酮碘滴眼液的制备和应用.中国医院药学杂志,1995,15(10):474.
作者单位:130062吉林省长春市药品检验所