HPLC法测定青霉素V钾片的含量

    1 仪器与试药

    日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10A紫外检测器，NC-2000型色谱工作站（大连中北科学技术公司），日本岛津UV-2550紫外分光光度计。 青霉素V钾对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号:130490-200102纯度99.5%）;青霉素V钾片为市售品;甲醇为色谱纯;醋酸钠、醋酸为分析纯;水为超纯水。

    2 色谱条件

    固定相:十八烷基硅烷键合硅胶;流动相:甲醇-水-3.86%醋酸钠溶液-4%醋酸溶液（60:40:2.5:0.5）;检测波长:268nm;流速:1.0ml/min;进样量:20μl。在上述条件下，青霉素V钾峰的保留时间为4.9min，与杂质峰的分离度均大于1.5（见图1）。

    3 方法与结果

    3.1 线性关系 精密称取青霉素V钾对照品237.79mg，50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、8.0ml、12.0ml、16.0ml至25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。分别进样20μl，记录色谱图。以峰面积（Y）对进样量（X）绘制标准曲线，回归方程为Y=40024+4393681X，r=0.9999。结果表明，青霉素V钾在进样量1.9μg～60.9μg的范围内，峰面积与进样量之间呈良好的线性关系。

    3.2 精密度试验 取试验用对照品溶液，重复进样5次，记录色谱峰面积，RSD为0.50%。

    3.3 溶液稳定性 将试验用样品溶液在室温放置，分别于0、1、3、5h取20μl进样，记录色谱峰面积，RSD为0.24%。3.4 重现性试验 取同一批样品，按“样品测定”项下的方法测定5次，其含量测定结果的RSD为0.23%。

    3.5 回收率试验 按处方配比，精密称取青霉素V钾对照品和空白辅料，混匀，加流动相适量振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀，记录色谱图，以峰面积计算平均回收率为99.82%，RSD=0.81%（n=5）。

    3.6 样品测定 取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于青霉素V钾50mg），置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取5ml，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图;另取青霉素V钾对照品约20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，同法测定。按外标法以峰面积计算出供试品中青霉素V钾的含量，并与中国药典2000年版收载的方法进行比较，结果见表1。

    表1 青霉素V钾片的测定结果（略）

    4 讨论

    4.1 检测波长的选择 取青霉素V钾对照品用流动相溶解并制成每1ml含0.2mg的溶液，在240～300nm的波长范围内扫描，在268nm的波长处有最大吸收，因此选择268nm为检测波长。

    4.2 系统适应性 采用Kromasil色谱柱进行试验，理论板数达到7028、分离度达到2.1。

    4.3 用HPLC法测定青霉素V钾的含量，准确性及重现性均较好，且操作简便，HPLC法与UV法进行比较，测定结果基本一致，因此可以用HPLC法替代UV法测定青霉素V钾片的含量。

    参考文献

    1 药典委员会.中国药典（二部）.北京:化学工业出版社，2000，354.

    2 安登魁.药物分析，第2版.北京:人民卫生出版社，1986，211.

    作者单位:121001辽宁省锦州市药品检验所