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首页合作平台在线期刊中华医药杂志2005年第5卷第6期论著

人血浆中盐酸伪麻黄碱血药浓度的测定

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摘要:【摘要】目的建立反相高效液相色谱法检测人血浆中盐酸伪麻黄碱浓度的方法。方法先用正己烷-异丙醇(9∶1)从血浆中萃取盐酸伪麻黄碱,再用1。5%的盐酸溶液萃取,萃取液直接进HPLC分析。8ml/min,检测波长195nm。...

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  【摘要】 目的  建立反相高效液相色谱法检测人血浆中盐酸伪麻黄碱浓度的方法。 方法  先用正己烷-异丙醇(9∶1)从血浆中萃取盐酸伪麻黄碱,再用1.5%的盐酸溶液萃取,萃取液直接进HPLC分析。色谱柱为Agilent ODS C 18 (250×4.6mm5μm),100mm C 18 预柱,流动相为乙腈∶水(0.2%三乙胺)=10:90(pH=3.3),流速0.8ml/min,检测波长195nm。结果:盐酸伪麻黄碱与杂质峰分离良好,最低检测浓度为10ng/ml。线性范围为20~1200ng/ml。日间、日内精密度平均值为5.28%,平均萃取回收率为65.5%,方法回收率为91.1%。 结论  本法可作为盐酸伪麻黄碱血药浓度的测定方法。

       
  Determination of pseudoephedrine concentration in human plasma
     
  WANG Wei,GAO Ying-chun,ZHAO Xin,et al.

  Research and Engineering Center of Chinese Herb Modernization,Xi'an710061,China
   
  【Abstract】 Objective To establish a HPLC method to determine Pseudoephedrine in human plasma.Methods Pseudoephedrine was extracted into the mixture of n-hexane and isopropanol(9:1),hydrochloric acid solution1.5%was used to re-extract them into aqueous phase.Last,the samples were separated and determined with a HPLC system,equipped with Agilent ODS C18(250×4.6mm5μm)column.Mobile phase consists of acetonitrile∶water(0.2%triethylamine)=10∶90(pH was adjusted to3.3with phosphoric acid),the flow rate was0.8ml/min.The detect-ing wavelength was set at195nm.Results The low detection limit of pseudoephedrine was10ng/ml.And the linear range was from20to1200ng/ml.All the RSD of within-day and between-day were less than5.28%,and the recovery was more than61%.Conclusion This method possesses merits of simplicity,sensitivity,good accuracy,and high precision.
   
  【Key words】 pseudoephedrine;drug concentration in plasma;HPLC
      
  盐酸伪麻黄碱是一种拟肾上腺素药,能选择性收缩上呼吸道毛细血管,减轻鼻、咽部黏膜充血、肿胀,用于治疗和减轻感冒所致的鼻塞、流涕、打喷嚏等症状,被广泛应用在复方感冒制剂中。有关盐酸伪麻黄碱的药物动力学研究国外已有报道 [1,2] 。测定盐酸伪麻黄碱血药浓度的方法有气相色谱法 [3] 和液相色谱法[4,5] 。本实验目的在于对人血浆中盐酸伪麻黄碱血药浓度的测定方法进行系统研究,为测定盐酸伪麻黄碱药代动力研究做好了基础工作。

  1 仪器与试剂
    
  Agilent高效液相色谱仪系统:二元梯度泵、六通阀、20μl定量环、Agilent VWD紫外检测器、色谱工作站;pH计(梅特勒-托利多仪器有限公司);TGL-16G型离心机(上海安亭科学仪器厂);电热恒温水浴锅(江苏省医疗器械厂);SK-I型快速混匀器(广州市富城仪器厂);电子天平(Sartorius公司);超纯水机(基因公司Maxima)。
   
  盐酸伪麻黄碱标准品(国家麻醉品实验室,批号1237-200103);甲醇、乙腈为色谱纯,水为去离子水,其它试剂均为分析纯。

  2 色谱条件
    
  色谱柱为Agilent ODS C 18  2(250×4.6mm5μm),100mm C 18 预柱,流动相为乙腈∶水(0.2%三乙胺)=10∶90(磷酸调pH值=3.3),流速为0.8ml/min,室温25℃,紫外检测波长为195nm。盐酸伪麻黄碱对照品及血样按上述条件进样分析,其色谱图见图1、图2、盐酸伪麻黄碱与其它杂质峰分离良好,保留时间均为9.0min。
 
  图1 空白血浆供试品溶液色谱图(略)

  3 样品溶液的制备
    
  3.1 标准品溶液的制备 准确称取盐酸伪麻黄碱标准品10.0021mg,用水溶解并定容于10ml容量瓶中,配制成1.0002mg/ml盐酸伪麻黄碱标准溶液作为贮备液,置冰箱中保存,备用。
 
  图2 含药血浆供试品溶液色谱图(略)
    
  3.2 含药血浆样品溶液的制备 精密量取待测样品血浆1.0ml于5ml圆底离心管中,精密加入碱液0.2ml漩涡振荡1min。用6ml正己烷-异丙醇(9∶1)萃取2次,吸取上层有机层,再精密加入0.2ml1.5%盐酸溶液萃取,直接吸取下层水液20μl进样分析。

  4 方法学考察
    
  4.1 线性关系的考察 取空白血浆1.0ml共7份,分别置于5ml试管中,加适量盐酸伪麻黄碱标准贮备液,使血浆中盐酸伪麻黄碱的浓度依次为20,40,80,200,400,800和1200ng/ml,在上述色谱条件下,进样20μl,测定峰面积。以盐酸伪麻黄碱血浆浓度C(ng/ml)对色谱峰面积(A)做线性回归,得标准曲线方程:A=3.1553C-5.4382,r=0.9996(n=6),线性范围为201200ng/ml,定量限为20ng/ml。

  4.2 方法回收率 取空白血浆3份,加入适量的盐酸伪麻黄碱标准溶液,分别配成高、中、低3个浓度的盐酸伪麻黄碱血浆样品40,200,800ng/ml,按样品测定方法各进样6次,求得血浆中盐酸伪麻黄碱的方法回收率。结果低、中、高3种浓度的萃取回收率(n=6)分别为(100.6±12.5)%,(96.1±5.4)%,(100.6±5.5)%;RSD值分别为12.43%,5.62%,5.47%(n=6)。
   
  4.3 萃取回收率 选择40,200,800ng/ml3种浓度的盐酸伪麻黄碱标准血浆样品,经上述方法萃取处理后与相应浓度盐酸伪麻黄碱标准液分别进样分析并进行色谱峰面积比较,求得盐酸伪麻黄碱在血浆中的萃取回收率。结果低、中、高3种浓度的萃取回收率(n=6)分别为(72.2±4.0)%,(59.7±3.7)%,(64.6±5.4)%;RSD值分别为5.56%,6.20%,8.33%(n=6)。
   
  4.4 方法重现性及评价 取空白血浆3份,加入适量盐酸伪麻黄碱标准贮备液,配置成高、中、低浓度分别为40、200和800ng/ml血浆样品,在一天内按样品测定法重复测定6次,求得日内精密度平均值分别为(36.7±1.21)ng/ml,(197.2±2.64)ng/ml,(784.4±32.4)ng/ml;RSD分别为3.30%,1.34%,4.11%(n=6)。将上述3个浓度的样品在8 天内陆续各重复测定6次,求得日间精密度分别为。(38.3±1.52)ng/ml,(193.9±17.56)ng/ml,(762.4±75.6)ng/ml;RSD分别为3.98%,9.05%,9.92%(n=6)。
   
  4.5 血浆样品稳定性评价 将40、200和800ng/ml高、中、低3个浓度的盐酸伪麻黄碱血浆样品分别置于-20℃冰冻24h后自然解冻,按前述方法测定盐酸伪麻黄碱血浆浓度变化,完全解冻后将样品重新冷冻24h。测定6个周期,计算冻融1周及冻融对样品稳定性的影响。结果标准血浆样品置-20℃冰冻1天后,浓度分别为44.2ng/ml,238.6ng/ml,822.3ng/ml,偏离度分别为94.6%,103.7%,96.7%;-20℃冰冻2天后,浓度分别为37.0ng/ml,191.9ng/ml,854.3ng/ml,偏离度分别为111.0%,111.0%,117.2%;-20℃冰冻3天后,浓度分别为41.4ng/ml,186.2ng/ml,805.1ng/ml,偏离度分别为108.9%,97.7%,99.6%;-20℃冰冻4天后,浓度分别为38.9ng/ml,205.7ng/ml,864.6ng/ml,偏离度分别为92.6%,100.0%,104.7%;-20℃冰冻5天后,浓度分别为42.0ng/ml,277.2ng/ml,906.0ng/ml,偏离度分别为91.1%,100.0%,100.0%。结果显示盐酸伪麻黄碱在血浆中及血浆萃取液中稳定性良好。

  5 讨论
    
  5.1 我们选择了甲醇、乙腈等有机溶剂作为流动相,实验发现当乙腈和水以一定比例混合时,效果做好。在此基础上我们对流动相组分比例进行了优化,结果当乙腈与水的比例在9∶1时,盐酸伪麻黄碱与其它杂质峰分离良好,保留时间为9.0min。,但是,盐酸伪麻黄碱的峰形有明显的拖尾,经实验发现,当在水相中加入0.2%的三乙胺后,可明显改善峰形。
   
  5.2 最佳萃取溶剂的选择 我们考察了不同比例正己烷-异丙醇萃取溶剂的萃取效率,发现只有当正己烷与异丙醇的比例为9∶1时萃取效率最高;萃取液用磷酸调pH值为3.3时样品回收率最高。
   
  5.3 本文提供的测定盐酸伪麻黄碱血液浓度的方法,血样预处理简单、回收率高、重现性好、稳定性高,适合用于盐酸伪麻黄碱及其制剂的药代动力学研究。

  【参考文献】
    
  1 Brendel E,Meince I.Sensitive HPLC determination of pseudoephedrine in plasma and urine.J Chromatogr,1988,426∶406.
   
  2 Neider M,Jaeger H.Sensitive quantification of pseudoephedrine in hu-man plasma and urine by HPLC.J Chro-matogr,1988,424∶73.
   
  3 D A Graves,K S Rotenbery.Bioavability assessment of a new liquid controlled relesease pseudoephedrine product.Clin Pharm,1985,4:199.
   
  4 E Brendel,I Meince.Sensitive HPLC determination of pseudoephedrine in plasma and urine.J Chromatogr,1988,426:406.
   
  5 M Neider,H Jaeger.Sensitive quantification of pseudoephedrine in hu-man plasma and urine by HPLC.J Chromatogr,1988,424:73.
  
  * 基金项目:陕西省自然科学基金项目(2000H10)
   
  作者单位:710061陕西西安,西安交通大学中草药现代化研究工程中心(△ 通讯作者)
   
       710032陕西西安,第四军医大学口腔医院
   
       712083陕西咸阳,陕西中医学院

作者: 王薇 高迎春 赵欣等 2005-7-7
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