青霉素稀释液细菌内毒素检查方法的建立

　　【摘要】 目的  建立青霉素稀释液细菌内毒素检查方法。 方法  依照《中国药典》2000年版的方法和指导原则。 结果  青霉素稀释液经120倍稀释后对鲎试剂反应无干扰作用。 结论  细菌内毒素检查法可用于青霉素稀释液的热原检查。
       
     
　　【Abstract】 Objective To establish a bacterial endotoxin test for dilution penicillin.Methods Test was carried out according to the guideline and procedure specified in Chinese Pharmacopeia.2000.Results Dilution penicillin did not interfere with limulus agent in120diluted concentrations.Conclusion Bacteria endotoxin test could be used for dilution penicillin.
   
　　【Key words】 bacterial endotoxin;limulus agent;dilution penicillin
      
　　青霉素稀释液是我院药剂科灭菌制剂室研制的溶解青霉素粉针的溶媒。该制剂能有效减轻臀肌注射疼痛发生率，提高患者依从性，使用多年，未发生过注射性臀肌挛缩症，临床反映良好。热原检查原采用家兔法。本文旨在探讨以细菌内毒素检查法取代热原检查法检查青霉素稀释液的可行性。

　　1 实验材料
    
　　青霉素稀释液（批号:20000828，20010226，20011102;规格:250ml，含0.5g盐酸利多卡因、2.15g氯化钠，均经热原法检查合格;临床用法与用量:作为青霉素溶媒溶解青霉素粉针，配制皮试液和注射溶剂，每次用量2～5ml）。由黔南州人民医院灭菌制剂室生产。
   
　　鲎试剂（TAL）［灵敏度（λ）:0.5EU/ml，规格:0.1ml/支， 批号:991202，厦门鲎试剂厂;灵敏度（λ）:0.5EU/ml，规格:0.1ml/支，批号:20000120，湛江海洋生物制品厂］;细菌内毒素标准品（RSE）（规格:9000EU/支;批号:981;中国药品生物制品检定所）;细菌内毒素检查用水（WBET）（规格:2ml/支，内毒素含量≤0.03EU/ml;批号:991212;厦门鲎试剂厂）。
   
　　XW-80A型旋涡振荡仪（上海医科大学仪器厂出品）;恒温水浴箱（北京医疗设备厂出品）;试管、吸管等玻璃器皿用前均经除细菌内毒素处理。

　　2 方法与结果
    
　　2.1 TAL灵敏度（λ）复核 ［1］ :按《中国药典》（2000年版，二部）“鲎试剂灵敏度复核试验”项下方法进行操作，结果符合规定，见表1。
    
　　表1 鲎试剂灵敏度复核试验结果（略）
   
　　2.2 青霉素稀释液细菌内毒素限值（L）的确定 ［1］  根据青霉素稀释液的用法用量，每次注射的最大剂量按照5ml计算，则L=K/M=［5EU/（kg·h）］/［5ml/（60kg·1h）］=60EU/ml。
   
　　2.3 供试品的最大有效稀释（MVD）倍数 ［1］  因选用TAL的λ为0.5EU/ml;故当L=60EU/ml时:MVD=CL/λ=（1.0ml/ml×60EU/ml）/0.5EU/ml=120倍。
   
　　2.4 供试品干扰初筛试验 ［2］  用WBET将青霉素稀释液（批号:20011102）分别制成15、30、60、120、240倍系列稀释溶液，再以各稀释浓度样品将RSE稀释成2.0λ、λ、0.5λ、0.25λ系列浓度的内毒素溶液，与TAL混合进行抑制试验，结果见表2。表2显示供试品在稀释120倍前对细菌内毒素检查有抑制作用，经120倍稀释后可消除干扰。
    
　　2.5 供试品干扰试验 ［1］  用WBET将3批青霉素稀释液进行120倍稀释后作供试品。分别以WBET和3批供试品将同一支RSE配制成1.0、0.5、0.25、0.125EU/ml两个溶液系列，采用两个批号的TAL测定同一支RSE在两个溶液系列中的反应终点浓度的几何平均值。同时用WBET和3批供试品的120倍稀释液各做2支阴性对照（NC管和NPC管）。按照RSE在WBET中的反应终点浓度的几何平均值E  s =log -1 （∑X  s /4）和在供试品中的反应终点浓度的几何平均值E  t =log -1 （∑X  t /4）计算（X  s 和X  t 分别为WBET系列和供试品系列各反应终点细菌内毒素浓度的对数值），结果见表3。表3显示Es在0.5～2.0λ范围内，且E  t 在0.5～2.0Es范围内。说明青霉素稀释液在稀释120倍后，排除了对TAL与细菌内毒素反应的抑制作用。
    
　　表2 供试品（批号:20011102）干扰初筛试验结果（略）
    
　　表3 供试品（1→120）干扰试验结果（略）
   
　　2.6 细菌内毒素检查 ［1］  将3批青霉素稀释液分别稀释120倍后，用2批λ为0.5EU/ml的TAL按《中国药典》（2000年版，二部）“细菌内毒素检查法”进行检查，均符合规定，见表4。与热原检查法检查结果相符，投入临床使用后，未出现热原反应。

　　表4 供试品稀释液（1→120）的细菌内毒素检查结果（略）
   
　　3 讨论
    
　　青霉素稀释液为我院自行研制的院内制剂，采用热原检查法检查热原，成本过高，费时而繁琐。实验证明，青霉素稀释液对TAL与细菌内毒素反应有抑制作用，但经稀释120倍可排除干扰，可用0.5EU/ml的TAL检查其内毒素。
   
　　因此，细菌内毒素检查法可用于我院青霉素稀释液的质量 内控标准。 

　　【参考文献】
    
　　1 国家药典委员.中国药典，2000年版，二部.北京:化学工业出版社，2000，附录86，204.
   
　　2 黄清泉，夏振民.药品细菌内毒素检查的试验设计.中国药学杂志，1997，32（2）:74.
    
　　作者单位:558000贵州都匀，黔南州人民医院