点击显示 收起
【摘要】 目的 观察南瓜多糖（Pumpkin Polysaccharide，PP）对小鼠血糖水平的影响，并探讨其降血糖作用的机制。 方法 将正常小鼠及糖尿病模型小鼠随机分组，分别测定各组小鼠的血糖值及糖尿病小鼠肝脏中的肝糖原与血清胰岛素的含量。 结果 PP对正常小鼠的血糖水平影响较小，但可显著降低糖尿病小鼠的血糖值，小鼠腹腔注射7h后可使其血糖值由（15.32±3.38）mmol/L降至正常范围（5.77±1.46）mmol/L，同时可使其肝糖原及血清胰岛素基本恢复至正常水平。 结论 PP对模型小鼠有明显的治疗作用，其降血糖机制与改善胰岛β细胞的功能关系密切。
【关键词】 南瓜多糖;血糖;肝糖原;胰岛
Effects of the pumpkin polysaccharide on blood glucose in mice and its possiblemechanism of the hypoglycemic effect
ZHANGYong-jun，Li Hong-mei，ZHU Li-yun，et al.
College of Life Sciences，China Institute of Metrology310018，China
【Abstract】 Objective To study the effects of the pumpkin polysaccharide（PP）on the blood glucose of mice and explore its mechanism.Methods The normal mice or the model mice of diabetes mellitus were divided into different groups randomly，then the blood glucose of all groups and the glycogen and the serum insulin of alloxan-diabetes mice were measured respectively.Results PP has no significant effects on the blood glucose of normal mice，but could remarkably reduce the mean blood glucose of alloxan-diabetes mice from15.32±3.38mmol/L to5.77±1.46mmol/L in only7hours，and the glycogen and the serum insulin could get back to the normal at the same time.Conclusion PP has an obvious therapeutic effect on alloxan-diabetes mice，and the blood glucose lowering action of PP closely correlates with its rehabilitating injuredβ-cells in the islet.
【Key words】 pumpkin polysaccharide;blood glucose;hepatic glycogen;islet's of pancreas
南瓜（Cucurbita moschata Duch）是葫芦科、南瓜属中叶片具有白斑、果柄五棱形的一年生蔓性草本植物。现代研究表明，南瓜的营养价值极高，尤其是其防治糖尿病的作用流传最广、最为人们肯定。目前，有关南瓜防治糖尿病的活性成分的报道很多 ［1，2］ ，其中南瓜多糖作为抗糖尿病的功能因子近年来研究十分活跃，不断有文章报道 ［3～5］ ，但有关南瓜多糖防治糖尿病的机制研究较少。因此，本文着重探讨南瓜多糖对实验性高血糖模型小鼠血糖的影响，并对其降血糖机制作了初步分析，为南瓜的开发和应用提供科学依据。
1 实验材料
南瓜粉:自制;四氧嘧啶（Alloxan）:美国Sigma Chemical Co.产，购于上海试剂商店;Sephadex G-100:瑞典Pharma-cia产品，购于上海试剂商店;大鼠胰岛素放免试剂盒:美国Linco Research，Inc产;美国强生TouchⅡ血糖监测仪、Sigma ○ R 4K15冷冻离心机、UV1100型紫外-可见分光光度计、APACKARD R 助面γ记录仪、冷冻干燥机;昆明小白鼠:雌雄兼用，雌者应无孕，体重18～22g，无锡原子医学研究所提供。
2 实验方法
2.1 南瓜多糖的分离提取 选取成熟的、肉质硬且厚的成熟期较长的南瓜作为加工南瓜粉的原料。去掉南瓜外表皮及蒂部，去籽及瓤后切成薄片晾干。将南瓜片放入烤箱烘至干透为止，然后用粉碎机将干燥的南瓜片粉碎成20目左右的南瓜粉。
南瓜粉用热水抽提后过滤，滤液回收，滤渣用95%乙醇渗滤48h后收集滤液，合并两滤液，得到南瓜初提物，然后依次用有机溶剂分步萃取，将南瓜初提物分级得到南瓜粗多糖，将南瓜粗多糖采用离子交换纤维素柱层析分级，苯酚-硫酸法检测糖反应阳性的高峰部分并收集主导组分，冷冻干燥得到南瓜多糖（Pumpkin Polysaccharide，PP）。
2.2 正常组小鼠及糖尿病组小鼠的活性测定方法 正常小鼠不需禁食，随机分组，每组8只，其中，空白对照组小鼠实验当天腹腔注射生理盐水0.5ml;正常对照组小鼠实验当天腹腔注射南瓜多糖水溶液。糖尿病小鼠实验前禁食不禁水12h，然后腹腔注射四氧嘧啶200mg/kg，72h后测量血糖值，每组选用中等程度糖尿病小鼠8只，阴性对照组实验当天腹腔注射生理盐水0.5ml，南瓜多糖组腹腔注射南瓜多糖水溶液。使用美国强生血糖监测仪分别测量给药前、给药7h及11h时的血糖值。
2.3 肝糖原含量的测定 处死动物，取肝脏，尽量冲掉血液，称重，按重量:体积=1g:50ml，用PBS液制备匀浆。取匀浆0.5ml，加4%磺基水杨酸0.5ml，混匀，离心（1000g，20min）。肝糖原的测定见表1。
Tab1 The mensuration of glycogen（略）
沸水浴，15min，冷却，测定OD 620nm ，计算肝糖原的含量。
2.4 血清胰岛素含量的测定 血清胰岛素的测定采用大鼠胰岛素放免试剂盒（Rat Insulin Radioimmunoassay Kit）法。2.5 统计学处理 以ˉx±s表示，组间差异经t检验分析。
3 实验结果
3.1 南瓜多糖（PP）对正常及糖尿病小鼠血糖浓度的影响 小鼠的血糖测定结果见表2。
由实验结果可知，空白对照组小鼠在未给任何药剂的正常喂养条件下，血糖值很稳定，波动范围较小，说明现有的饲养条件适于小白鼠的生长。阴性对照组小鼠注射四氧嘧啶72h后，血糖稳定升高，在未给予治疗情况下，血糖一直维持在较高水平，可以作为高血糖模型。
南瓜多糖对正常小鼠有轻度的降血糖效果，对四氧嘧啶型糖尿病小鼠的降血糖效果极其显著，腹腔注射7h就可以使其血糖值由15.32±3.38mmol/L降至5.77±1.46mmol/L，说明南瓜多糖有明显的降血糖作用。
3.2 南瓜多糖对糖尿病小鼠肝糖原及血清胰岛素的影响 南瓜多糖（PP）对糖尿病小鼠7h血糖、肝糖原及胰岛素的测定结果见表3。
Tab2 The effects of PP on the blood glucose level in normal mice and alloxan-diabetic（略）
注:给药前与给药后组内比较， * P<0.05; *** P<0.001
Tab3 The effects of PP on the blood glucose，glycogen and insulin level in alloxan-diabetic mice at7h（略）
注:与阴性对照组比较有差异 * P<0.05， *** P<0.001
实验结果表明，7h时（相当于空腹）南瓜多糖组小鼠的肝糖原及血清胰岛素与阴性对照组比较有差异（P<0.05），基本接近正常，其血糖值与阴性对照组比较差异极显著（P<0.001），与正常小鼠相当。
4 讨论
肝脏是体内唯一调控糖代谢的器官，饥饿时它可通过糖异生输出葡萄糖，维持血糖水平以供身体之需，饱餐后可利用血中葡萄糖合成糖原储存起来以备机体一时之需。肝糖代谢的核心是“葡萄糖和6-磷酸葡萄糖”之间的循环，并通过6-磷酸葡萄糖与糖原代谢相联，与糖异生相联。在饥饿时糖代谢的流向等于肝糖输出率和由葡萄糖激酶所决定的肝糖循环，肝糖循环等于肝糖总合成和肝糖输出之差。肝糖输出增加是2型糖尿病的病理特征之一，肝糖输出与空腹血糖呈正相关，是导致2型糖尿病空腹高血糖症的主要原因。
从实验数据看，7h（相当于空腹）时南瓜多糖组小鼠的血糖与0h比较下降幅度极大，其空腹血糖达到正常水平，说明其肝糖输出极少。可见，南瓜多糖对于改善糖代谢，抑制肝糖输出，增加肝糖含量起着极为重要的作用。7h时南瓜多糖组小鼠的血清胰岛素值显示，它与阴性对照组比较有差异（P<0.05），基本接近正常值，此时血糖与0h比较下降更明显（P<0.001），已达到正常水平，说明南瓜多糖可能对四氧嘧啶造成的受损胰岛β细胞有很强的修复作用，可以改善胰岛β细胞的功能，基本恢复胰岛的正常分泌功能。
【参考文献】
1 Park YK，Cha HS，Park MW，et al.Chemical components in different parts of pumpkin.Journal of the Korean Society of Food Science andNutrition，1997，26（4）:639-646.
2 Longe OG，Farimu GO，Fetuga BL.Nutritional Value of the FlutedPumpkin.J Agric.Food Chem，1983，31:989-992.
3 孔庆胜，蒋滢.南瓜多糖的分离纯化及其降支链氨基酸作用.济宁医学院学报，2002，25（1）:29-31.
4 彭红，黄小茉，欧阳友生，等.南瓜多糖的提取工艺及其降糖作用的研究.食品科学，2002，23（8）:260-263.
5 熊学敏，曹珏，石扬，等.南瓜多糖颗粒剂治疗Ⅱ型糖尿病的临床疗效.中成药，2001，23（7）:495-497.
* 基金项目:国家科技部中捷合作资助项目（国科外字〔2004〕249号），杭州市科技局资助项目（2003132B18）
作者单位:
1 310034中国计量学院生命科学学院
2 130018吉林农业大学食品工程学院
3 214036江南大学食品学院
（编辑:一 坤）