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【摘要】 目的 建立HPLC法测定盐酸伪麻黄碱的血药浓度。方法:色谱柱为ODS柱（150mm×4.6mm，5μm日本岛津）;流动相为0.5%硫酸铵-甲醇（v:v=65∶35）;流速1.0ml/min;检测波长为210nm;柱温:室温。结果:本法的标准曲线线性范围为50～1000mg/L;最低检出量为25ng;盐酸伪麻黄碱保留时间为3.5min;平均回收率84.2%;日内RSD小于4.3%;日间RSD小于4.7%。结论:本法检测盐酸伪麻黄碱血药浓度具有快速简便、灵敏准确等优点。
【关键词】 盐酸伪麻黄碱;血药浓度;反相高效液相色谱
Determination of pseudoephedrine in human serum by RP-HPLC
LI Wei-hua，YAN Hui-ping，HUANG Chun，et al.
Beijing You'an Hospital，Capital University of Medical Sci-ences，Central Lab，Beijing100054，China
【Abstract】 Objective To develop a HPLC method for the determination of pseudoephedrine in human serum.Methods The analytical column was C18（150mm×4.6mm，5μm）;the mobile phase consisted of a mixture of（NH3）2SO4-methanol（v:v=65∶35）;pumped at1.0ml·min -1 through the column;the wavelength was set at210nm and kept at room temperature.Results The standard curve was linear in the concentration range of50～1000mg/L;the detection limit in human serum was25ng;retention times for pseudoephedrine was3.5min;the aver-age method recovery was84.2%;the intra inter and-day RSD less than4.3%and4.7%.Conclusion This method was a rapid，sensitive and accurate method for determination of pseudoephedrine in human serum.
【Key words】 pseudoephedrine;serum drug concentration;RP-HPLC
盐酸伪麻黄碱是麻黄碱的差向异构体，许多抗感冒药中常含有该成分。有关盐酸伪麻黄碱的药物动力学研究国外有许多报道，包括气相色谱法 ［1］ 和高效液相色谱法 ［2.3］ ，但效果欠佳。国内这方面的报道较少。本实验参考一些文献 ［4］ 并结合在实际操作中一些具体问题进行总结，目的在于探讨用高效液相方法检测盐酸伪麻黄碱以及如何提取、纯化血液中的盐酸伪麻黄碱，为研究盐酸伪麻黄碱的血药动力学提供实验依据，现报告如下。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂 仪器:日本岛津LC-10A型高效液相色谱仪，包括:LC-10Avp溶剂输送泵、SCL-10Avp系统控制器、SPD-10Avp紫外可见检测器、CLASS-VP工作站、ODS分析柱。试剂:盐酸伪麻黄碱标准品由中国药品生物制品检定所生产，批号为171237-200304;甲醇为色谱纯;0.5%硫酸铵等试剂为分析纯;水为重蒸水。
1.2 色谱条件 色谱柱为ODS分析柱（150mm×4.6mm，5μm）;流动相为0.5%硫酸铵:甲醇（65∶35/v:v）;流速为1.0ml/min;检测波长:210nm;柱温:室温;进样量:20μl。
1.3 标准溶液配制 精密称取盐酸伪麻黄碱100mg，置于50ml量瓶中，加入重蒸水溶解并稀释至刻度，即得盐酸伪麻黄碱贮备液（2000mg/L），4℃保存，临用时将盐酸伪麻黄碱贮备液用重蒸水稀释至所需浓度，即得盐酸伪麻黄碱工作液。
2 方法与结果
2.1 血浆中药物浓度测定 精密吸取血浆样品0.5ml于10ml具塞玻璃试管中，加入0.5ml混合碱液（1000ml水中含10g氢氧化钠和40g碳酸钠），混匀，再加6ml乙醚/正己烷（50∶50），在旋涡混和器上混匀，4000r/min离心5min，分取有机层于另一含有75μl，0.1mol/L硫酸的尖头试管中，旋涡1min，4000r/min离心5min，抽去有机层，然后吸取水相20μl进样，根据标准曲线回归方程计算血浆中盐酸伪麻黄碱浓度。
2.2 标准曲线制备及最低检测限测定 取空白血清0.5ml共7份，分别加入不同浓度盐酸伪麻黄碱标准溶液于10ml离心管中，配成一系列浓度为0.20～32mg/L的标准样品液，按血浆中药物浓度测定方法，从“加入0.5ml混合碱液”起同法测定，以峰面积为纵坐标，标准液浓度为横坐标绘制标准曲线。血浆标准曲线回归方程为:Y=37.0398X+152.548，r=0.999718，线性范围为50～1000mg/L。结果表明盐酸伪麻黄碱的血药浓度在50～1000mg/L范围内线性关系良好，以所得色谱峰峰高为基线噪音的3倍为其最低检测限，最低检出浓度为17mg/L。
2.3 提取回收率 取空白血清0.5ml15份分3组，分别加入高（750mg/L）、中（300mg/L）、低（50mg/L）3种浓度的盐酸伪麻黄碱工作液50μl，按“血浆中药物浓度测定”项下提取、测定。将所得峰面积值代入标准曲线计算盐酸伪麻黄碱浓度，以测得值与加入值之比计算回收率。5次的平均提取回收率见表1。
表1 不同浓度盐酸伪麻黄碱回收率（略）
2.4 精密度试验 取空白血清加盐酸伪麻黄碱配制成高、中、低浓度的血清样品，于同一天内按照样品测定法重复测定5次，其盐酸伪麻黄碱的平均浓度分别为750、300和50mg/L，而对应的日内RSD（%）分别为3.2、4.6和5.2。1周内重复测定5次，对应的日间RSD（%）分别为4.3、4.8和5.1。见表2。
表2 日间、日内差异（略）
3 讨论
3.1 流动相 经过多次试验证明:盐酸伪麻黄碱在碱性环境中保留时间长，而酸性环境保留时间短，并且硫酸铵对盐酸伪麻黄碱的峰形有较好的改善作用，所以选择了0.5%的硫酸铵作为流动相。
3.2 提取、纯化条件及进样量 为了提高检测灵敏度和回收率，笔者经多次反复实验证明，用二氯甲烷在碱性条件下提取，按“标准曲线”项下所述方法再次纯化后进样，提取回收率较高，在210nm波长处检测无杂质干扰RM峰，因此优化了提取方法。进样量为20μl，可使每一样品重复进样成为可能。
综上所述，本研究所改进的测定血中盐酸伪麻黄碱浓度的高效液相色谱法，不仅灵敏度高（最低检测浓度为0.06mg/L），准确性、精密度好，能满足血药浓度测定及药代动力学研究的要求，而且具有血清用量少（0.5ml），操作简便快速等优点。
【参考文献】
1 Graves DA，Rotenberg KS，Woodworth JR，et al.Bioavailability assess-ment of a new liquid controlled-release pseudoephedrine product.Clin Pharm，1985，4（2）:199-203.
2 Brendel E，Meineke I，Henne EM，et al.Sensitive high-performance liquid chromatographic determination of pseudoephedrine in plasma andurine.Chromatogr，1988，426（2）:406-411.
3 Nieder M，Jeager H.Sensitive quantification of pseudoephedrine in hu-man plasma and urine by high-performance liquid chromatography.Chromatogr，1988，424（1）:73-82.
4 陈坚，方维军，张灯玲，等.盐酸伪麻黄碱在人体中的药物动力学.中国医院药学杂志，1997，17（7）:295-334.
作者单位:100054北京，首都医科大学附属北京佑安医院重点实验室
（编辑:日 强）