脑康灵口服液对小鼠免疫功能的影响

  　　【摘要】 目的  研究脑康灵口服液对小鼠免疫功能的影响。 方法  通过给小鼠灌胃脑康灵口服液，观察其对免疫低下小鼠迟发型超敏反应（DTH）、溶血素生成及对NK细胞杀伤活性的影响。 结果  脑康灵口服液可明显增强免疫低下小鼠的DTH，提高血浆溶血素水平，增强NK细胞杀伤活性。 结论  脑康灵口服液可通过提高机体的免疫功能而发挥其作用。

 　　【关键词】  脑康灵口服液;迟发型超敏反应;溶血素;NK细胞

       Effects NaoKang Ling Oral Liquid on immune function in mice 

　　LI Xin-tian，LINYu，QIU Cai-rong.

　　The Third Hospital of PLA，Baoji721064，China.

　　【Abstract】 Objective To study the effects of NaoKang Ling Oral Liquid on immune function in mice.Methods After the different doses of NaoKang Ling Oral Liquid were given to mice，the effects on delayed type hypersensitivity（DTH），hemolysin production，NK cell killing activity were observed.Results NaoKang Ling Oral Liquid could en-hance DTH and hemolysin production in immunosuppressive mice and improve NK cell killing activity in mice.Con-clusion NaoKang Ling Oral Liquid could exhibit its antitumor effect by incrasing immune function.

   　 【Key words】 NaoKang Ling Oral Liquid;DTH;hemolysin;NK（natural killer）cell

　　脑康灵口服液（NaoKang Ling Oral Liquid，NKL）是我院临床应用多年的纯中药制剂，主要用于治疗颅脑外伤引起的头痛、头晕、失眠等。20世纪70年代以来，医药学专家研究发现传统的补益中药可参与和介导细胞各种生命现象的调节，而且具有增强机体免疫功能等药理作用。因此，愈来愈引起国内外药理学家、生物学家和化学家们的兴趣。我们从传统的补益中药西洋参、黄芪、枸杞子、当归中提取有效成分，研制成脑康灵口服液。研究表明，该药具有扶正固本、补血益气、健脑安神、增强体质等作用。本文观察了脑康灵口服液对氢化可的松引起的小鼠免疫功能抑制的影响。

　　1 材料与方法 　

　　1.1 材料

   　 1.1.1 药物与试剂 NKL口服液（相当生药1.075g/ml），由本院药剂科提供（批号:041026）。MTT由TBD生物公司分装（Sigma）。

   　 1.1.2 动物与细胞株 昆明种小鼠和BALB/c小鼠，清洁级动物，♀♂兼用，体重18～22g，由西安医科大学实验动物中心提供（医动字第8-005号）;YAC-Ι细胞株、NK细胞之靶细胞和绵羊红细胞（SRBC）由本院免疫实验室提供。1.1.3 仪器 UV-120-02型分光光度计（日本岛津）。　

　　1.2 方法

    1.2.1 对免疫功能低下小鼠迟发型超敏反应（DTH）实验 ［1］  取昆明种小鼠40只，随机分为生理盐水（NS）正常对照组、NS模型组和NKL（20、10ml/kg）组，每日给药1次，连续10天。除正常对照组外其他组均于第1～7天ig氢化可的松（HC）30mg/kg。第5天各组ip注射5%SRBC（0.2ml/只），第9天在小鼠后右足注入5%SRBC（0.05ml/只），24h后处死，于踝关节处切下双足（左足为对照）称重，计算足肿胀率，结果见表1。表1 NKL对免疫功能低下小鼠DTH的作用 （略）
    
    1.2.2 对免疫功能低下小鼠溶血素水平的测定 ［2］小鼠分组与给药方法同上，于给药的第6天ip5%SRBC（0.2ml/只）致敏，4天后从眼眶取血20μl于NS中，离心取上清液，加入5%SRBC0.5ml，补至体积1ml，37℃水浴反应30min，冰浴10min，离心取上清液0.5ml，加入都氏试剂1.5ml，放置10min，于540nm波长处测定A值，以NS做空白对照，并取5%SRBC0.25ml加入1.75ml都氏试剂测定A值，作为HC 50 。按照下列公式计算样品的HC 50 ，结果见表2。样品HC 50 =（样品A值-空白A值）/HC 50表2 NKL对免疫功能低下小鼠HC 50 的作用 （略）
   
    1.2.3 对NK细胞活性的测定 ［3］  取BALB/c小鼠30只，随机分为3组，连续ig给药7天，于第8天无菌取小鼠脾脏，制成脾细胞悬液，浓度为（1×10 7 ）/ml于96孔板每孔加入0.1ml，并每孔加入（1×10 6 ）/ml YAC-Ⅰ细胞0.1ml，加入1640培养液，37℃5%CO 2 下培养72h，用MTT法测NK细胞的杀伤率，结果见表3。NK细胞杀伤率（%）=（对照组A值-实验组A值）/对照组A值×100%。 表3 NKL对小鼠NK细胞杀伤率的影响 （略）

　　 2 结果

     2.1 NKL对免疫功能低下小鼠DTH的影响 由表1可见，NS模型组足肿胀率比正常组明显降低（P<0.05），NKL2个剂量组的足肿胀率升高，与NS模型组比较（P<0.05）。说明NKL能够对抗氢化可的松引起的机体免疫功能降低。2.2 NKL对免疫功能低下小鼠溶血素水平的影响 由表2可见，NKL2个剂量组的HC 50 与NS模型组比较明显升高（P<0.05）。

    2.3 NKL对NK细胞杀伤活性的影响 由表3可见，NKL2个剂量组均可明显增强NK细胞的杀伤活性。

     3 讨论

　　该药具有扶正固本、补肾益气、活血通脉之功效，从实验结果分析，NKL可明显增强免疫功能低下小鼠的DTH，升高血浆溶血素水平，增强NK细胞的杀伤活性，这说明NKL可作用于机体免疫系统的多个环节。对细胞和体液的免疫均有增强作用。研究结果表明，NKL对氢化可的松所致的小鼠免疫功能低下状态表现出一定的对抗作用，使小鼠细胞及体液免疫功能均明显改善。NKL产生这种双向免疫调节作用的原因可能是组方中的西洋参、黄芪、枸杞子为补益人体气血之不足及脏腑之亏损，增强体质，提高机体抗病能力，消除虚弱证候的药物及当归有补血活血之功能有关。

　　【参考文献】

　　1 娄海燕，杨笋，张世玲.胃复康对小鼠免疫功能的影响.中成药，2002，24（3）:194.

  　  2 王天然.小鼠连续微量采血测溶血素.上海免疫学杂志，1988，8（3）:176.

   　 3 李新田，朱学莉，林昱，等.五加双参片对小鼠免疫功能的影响.中华医药学杂志，2004，3（1）:17.
　　
　　作者单位:721004陕西宝鸡，解放军第三医院

      （编辑:一 坤）