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【摘要】 目的 建立青钱柳叶中皂苷含量测定的方法，确定其实验条件。方法 采用正丁醇提取法提取总皂苷并用分光光度法测定其含量。结果 实验条件以0.2ml香草醛-5%冰醋酸溶液，0.8ml高氯酸，60℃水浴加热30min为好；在最大吸收波长445nm处，测得标准曲线方程为A=6.4489C 相关系数r=0.9989, 变异系数RSD＝0.18%，平均回收率为99.56%。结论 此方法简便、快速，结果准确、可靠，适合皂苷的含量测定。
【关键词】 青钱柳；皂苷；含量测定；比色法
The determination of total saponin of cyclocarya paliurus(Batal) lljinsk
SHU Rengeng, SHU Ji cheng.
Jiangxi Traditional Chinese Medical College,Nanchang 330004,China
【Abstract】 Objective To establish a simple and accurate method for the determination of total saponins of cyclocarya paliurus (Batal.) lljinjsk. Method The spectrum was used to determine saponin which had been isolated from cyclocarya paliurus (Batal.) lljinjsk with n-butyl alcohol. Results Using 0.2ml vanillin-5% acetic acid ,0.8ml perchloric , and heat on 60℃ water-bath for 30min is the best condition. Its standard cure was A=6.4489C,r=0.9989,max=445nm,RSD=0.18%, and the average recoveries was 99.56%. Conclusion The method was simple, rapid, reliable and accurate.
【Key words】 cyclocarya paliurus (Batal.) lljinsk; saponin; quantity determination; colourimetric method.
青钱柳［cyclocarya paliurus (Batal.) lljinsk］系双子叶植物纲(Dicotyledneae)胡桃科(Juglangdaceae)植物青钱柳属高大乔木，广泛分布于江西、浙江、湖南、广东等长江以南13个省区［1］，是我国特有的速生树种。江西民间发现它有清热解毒，生津止渴，降压降糖以及益寿延年等作用［2］。其主要化学成分有皂苷、黄酮、萜类、多糖、微量元素等［3，4］。为了深入研究青钱柳植物中具生物活性的皂苷化合物，以便为将来对该植物资源的开发利用打下基础，本文采用分光光度法对其总皂苷含量进行定量。
1 实验材料、试剂与仪器
青钱柳叶采自江西修水县，经我院药用植物教研室刘庆华老师鉴定为青钱柳［cyclocarya paliurus (Batal.) lljinsk］；对照品：青钱柳苷Ⅰ(本课题组自制，光谱纯)［5］，其它试剂均为分析纯。UV-240紫外分光光度计(日本岛津)。
2 试剂配制
2.1 对照品溶液的配制 精密称取青钱柳苷Ⅰ18.63mg, 用甲醇溶解，并定容至25ml容量瓶中，即得。
2.2 供试品溶液的配制 精密称取青钱柳叶药材样品5g，置索氏提取器中用石油醚(60～90℃)脱脂至无色。药渣挥干石油醚。再置索氏提取器中用甲醇提取2h(至Liebermann-Buchard反应呈阴性)、提取液回收甲醇后加蒸馏水溶解、过滤并转移至100ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度、摇匀。准确吸取10ml、用水饱和的正丁醇分3次萃取，萃取液用正丁醇饱和的水洗涤、减压回收正丁醇、残渣用甲醇溶解并定溶于25ml容量瓶中,备用。
3 条件的选择
3.1 最大吸收波长的测定 精密吸取对照品溶液0.5ml，显色后，用可见紫外分光光度计在200～600nm范围内测定吸收度，结果表明最大吸收波长为445nm。
3.2 显色剂用量、反应温度、反应时间的考察 采用正交设计的方法，把显色剂用量、反应温度、反应时间作为三个因素，并且每个因素取三个水平，所以按L9(34)条件安排实验 ，见表1和表2。显色后在445nm处测出吸收度，并对有关数据(见表1和表2)作极差分析，找出最佳反应条件。
表1 实验因素与水平 略
表2 实验方案及所测吸收度值 略
表3 直观分析结果 略
4 标准曲线的制备
精密吸取对照品溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8ml，置容量瓶中，分别加入0.2ml香草醛- 5%冰醋酸溶液，0.8ml高氯酸， 60℃水浴加热30min，冷却再加冰醋酸至5ml，同法制得空白溶液，置于445 nm处测定吸光度，分别为：-0.0083、0.1562、0.3155、0.4546、0.6503、0.7862、0.9650、1.1125、1.3023 并以样品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制成标准曲线，得出标准曲线的回归方程：Y=6.4489X，r=0.9989。
5 重现性试验
分别吸取对照品溶液0.5ml 5份置试管中，同前操作，测定吸收度，试验结果见表4，表明此反应重现性较好，变异系数为RSD＝1.16%(n=5)。
6 样品的含量测定
精密吸取样品液0.5ml，按标准曲线制备方法操作、显色后置于445nm处测定吸收度，根据回归方程计算样品中总皂苷的含量。结果见表5。
7 回收率试验
精密吸取已知含量的样品溶液0.5ml，加入含量为(0.7452mg/ml)的对照品溶液0.5ml，按标准曲线项下方法测定皂苷含量、计算回收率。结果见表6。
表4 重现性试验结果 略
表5 青钱柳总皂苷含量测定结果 略
表6 回收率试验结果 略
8 小结
在试验过程中，发现糖类对试验结果有一定的影响，故用水饱和的正丁醇萃取后，再用正丁醇饱和的水洗涤，可消除大部分干扰。
另外，从试验条件选择中，我们发现高氯酸的用量对反应影响程度是最大的，所以在显色时，一方面要保持反应的用量，一方面不宜过量，避免带来不必要的测量误差。
【参考文献】
1 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志，第二十一卷.北京：科学出版社，1979，30.
2 舒任庚.青钱柳化学成分的研究.中药材，1995，18（7）：351-352.
3 舒任庚.青钱柳植物化学成分研究简报. 江西中医学院学报，1996，8（2）：34.
4 谢明勇. 青钱柳化学成分和生物活性研究概况.中草药，2001，32(4) :365-366.
5 舒任庚.青钱柳甜味成分的研究.药学学报，1995，30(10)：757-761.
基金项目：国家自然科学基金资助项目
作者单位： 330004 江西南昌，江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室
(编辑：邓 锋)