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【摘要】 目的 对三七叶甙质量标准进行研究，采用HPLC法测定三七叶甙中Rb1、Rc和Rb3的含量。方法 采用ODS色谱柱（150mm×4.0mm，5μm），乙腈-水为流动相，检测波长为205nm，按外标法定量。结果 人参皂甙Rb1、Rc和Rb3在0.85～5.1μg范围内呈现良好线性关系（r分别为：0.9988，0.9991，0.9997），平均加样回收率分别为：99.21%，97.32%，98.25%，RSD分别为2.1%，1.9%，2.9%，n=5。结论 本方法准确，可靠，适宜该制剂的质量控制。
【关键词】 质量标准；HPLC法；三七叶甙；人参皂甙Rb1；人参皂甙Rb3；人参皂甙Rc
【Abstract】 Objective This paper reports a simultaneous determination method of ginsenoside Rb1、Rc and Rb3 in sanqi leave using HPLC.Methods The ODS column (5μm，150mm×4.0mm) was used.The mobile phase consisted of acetonitrile water，The UV detector wavelength was 205nm.Results The calibration curve of ginsenoside Rb1、Rc and Rb3 were linear (r :0.9988，0.9991，0.9997 ) within the range of 0.85～5.1μg for puerarin ，the average recovery of ginsenoside Rb1、Rc and Rb3 were 99.21%(RSD 2.1% n=5))，97.32%(RSD 1.9% n=5)，98.25%(RSD 2.9% n=5) .Conclusion The method is accurate and reliable，suitable for the quality control of the drug.
【Key words】 qualification；ginsenoside Rb1；ginsenoside rb3；ginsenoside Rc；HPLC
三七为五加科（araliacease）人参属植物。对三七中化学成分的研究始于20世纪30年代初期，70年代，发现三七中含有一些与人参相似的化学成分，而引起了国内外植物药学界的重视。迄今为止，从三七［Panax notogineseng(Burk，)F.H.chen］的不同生长部位中分离到20种单体皂甙成分［1］，三七的地下部分和地上部分的皂甙不尽相同，含量各异。据报道［2］，在三七叶中以人参皂甙Rb3和Rc含量最高，是三七叶甙抗衰老作用的有效成分之一。目前，对三七叶甙的分析方法采用碘量法［3］，该方法主要是根据皂甙中的羟基进行定量，所以不能保证测定结果的准确性。为完善其质量标准，保证药品质量，本文对该制剂进行了质量标准研究，采用HPLC法对三七叶甙中的人参皂甙Rb1、Rc和Rb3的含量进行检测。该方法快速、准确，可作为该制剂的质量控制。现将结果报道如下。
1 仪器及试药
1.1 仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪：具有可变波长紫外检测器和色谱工作站。
1.2 试药 乙腈为色谱纯；水为乐百士纯净水；人参皂甙Rb1、Rc和Rb3对照品，含量分别为99.2%，98.21%，96.73%（归一化法测定）由云南省天然药物研究中心提供；三七叶甙由云南文山特安呐制药有限公司提供，批号为：20010904。
2 溶液制备
2.1 对照品溶液的制备 精密称取对照品人参皂甙Rb1、Rc和Rb3各适量，加水配置成Rb1、Rc、Rb3均为0.17mg/ml的混合溶液，作为对照品溶液。
2.2 供试品溶液的制备 精密称取三七叶甙0.2g（精确到0.0002g），置于10ml容量瓶中，加入适量水，超声10min，冷却至室温，再用水定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
3 色谱条件及系统适应性试验
色谱柱为 Extend ODS柱（150mm×4.6mm，5μm）；流动相为乙腈-水（梯度洗脱：29：71 10min 40：60）；流速为1.0ml/min，柱温为22℃，检测波长为205nm；进样量为20μl。按上述色谱条件分别对对照品溶液和供试品溶液进行分析，色谱图见图1，分离效果较好。
图1 对照品（A）和供试品（B）的色谱图
4 线性关系考察
精密吸取上述对照品溶液5，10，15，20，25，30μl，在上述色谱条件下进样，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标作标准曲线。人参皂甙Rb1、Rc和Rb3的回归方程（n=6）分别为：
y=217.38x+34.789 r=0.9988
y=87.116x+25.201 r=0.9991
y=134.83x+21.033 r=0.9997
表明人参皂甙Rb1、Rc和Rb3在进样量为0.85～5.1μg之间线性关系良好。
5 方法精密度试验
取上述对照品溶液重复进样6次，测得人参皂甙Rb1、Rc和Rb3峰面积的RSD分别为0.52%，0.23%，0.16%。
6 方法重复性试验
取三七叶甙样品（批号为：20010901）共5份，按2.2项制备溶液，测得人参皂甙Rb1、Rc和Rb3的含量RSD分别为4.1%，2.8%，2.2%。
7 回收率试验
取已测知含量的三七叶甙样品（批号为20010904）0.0502，0.1023，0.1522，0.2033，0.2563g供试品5份，分别加入等量的对照品人参皂甙Rb1 0.55mg，Rc 0.15mg和Rb3 0.09mg，按2.2项制备溶液，测定，结果平均回收率分别为99.21%，97.32%，98.25%，RSD分别为2.1%，1.9%，2.9%。
8 样品含量的测定结果
按上述方法对不同批号的三七叶甙样品进行了测定，结果见表1。
表1 样品含量的测定
Tab 1 Results of sample determination(略)
9 讨论
三七叶甙水溶性较好。本文对比了甲醇、乙醇和水作为溶剂的测定比较，结果发现采用用水直接溶解的方法，样品回收率高，杂质含量最低，提取最完全，并且简便快速，适宜生产过程中的质量控制。
【参考文献】
1 甘烦远，郑光植.三七化学成分研究概况.中国药学杂志，1992，27（3）：138.
2 陈德昌.中药化学对照品工作手册.北京:中国医药科技出版社，2000，36.
3 地方标准.滇Q/WS 784-1985.
(编辑：石 岚)
作者单位： 1 661100 云南蒙自，红河学院化学系
2 650106 云南昆明，云大科技股份有限公司
3 650091 云南昆明，云南大学药学院