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【摘要】 目的 建立高效液色谱相法测定复方氨酚烷胺分散片中马来酸氯苯那敏与咖啡因的含量均匀度。方法 采用Diammsil C18〔色谱柱（4.6mm×150mm，5μm），以0.5%三乙胺溶液与0.5%磷酸溶液（pH2.1）-乙腈（85：15）为流动相，检测波长为210nm。结果 马来酸氯苯那敏进样量在0.1143～0.8001μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0.9999，平均回收率为99.8%。咖啡因进样量在0.01517～0.10619μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0.9999，平均回收率为99.9%。结论 本方法操作简便，结果准确，可用于复方氨酚烷胺分散片中马来酸氯苯那敏与咖啡因的样品测定及含量均匀度的测定。
【关键词】 复方氨酚烷胺分散片；马来酸氯苯那敏；咖啡因；高效液相色谱法
【Abstract】 Objective To develop an HPLC method for determination of content uniformity of chlorphenamine maleate and caffeine in compound paracetamol and amantadine hydrochloride dispersible tablets.Methods The quantitative analysis was performed on a Diammsil C18 column（4.6mm×150mm，5μm）with a mobile phase of 0.5% triethylamine and 0.5% phosphoric acid (ph was adjusted to 2.1)- acetonitrile （85：15），and detection wavelength at 210nm.Results The calibration curve was linear in the range of 0.1143～0.8001μg for chlorphenamine maleate (r=0.9999). The average recovery was 99.8%; The calibration curve was linear in the range of 0.01517～0.10619μg for caffeine (r=0.9999). The average recovery was 99.9%.Conclusion The methed is simple and accurate.It is suitable for determination of content uniformity of chlorphenamine maleate and caffeine in compound paracetamol and amantadine hydrochloride dispersible tablets.
【Key words】 compound paracetamol and amantadine hydrochloride dispersible tablets ; chlorphenamine maleate; caffeine; HPLC
复方氨酚烷胺分散片是由对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、马来酸氯苯那敏、咖啡因、人工牛黄等药物组成的复方制剂，有解热镇痛之功效，用于流行感冒引起的发热头痛、咳嗽口干、咽喉疼痛等症。其中马来酸氯苯那敏、咖啡因在片剂中含量较低，不易混匀。本文采用高效液相色谱法，对马来酸氯苯那敏、咖啡因进行含量均匀度测定，精密度较高，可有效地对复方氨酚烷胺分散片进行质量控制。为药品质量标准的修订和生产工艺的改进提供科学依据。
1 仪器与试药
Dionex高效液相色谱仪(美国戴安公司)，包括P680四元泵，ASI-100自动进样器，TCC-100柱温箱，UVD170U紫外检测器，Chromeleon色谱工作站；马来酸氯苯那敏对照品（批号：171237-200304）、咖啡因对照品（批号：1215-9503）：供含量测定用，中国药品生物制品检定所提供；复方氨酚烷胺分散片（规格：每片含对乙酰氨基酚250mg，盐酸金刚烷胺 100mg，咖啡因15mg，马来酸氯苯那敏2mg，人工牛黄10mg，批号：20040101，20040102，20040103）由吉林省迈丰药业有限公司提供；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 色谱条件
色谱柱：Diammsil C18柱（4.6mm×150mm，5μm）；流动相：0.5%三乙胺溶液与0.5%磷酸溶液（pH2.1）-乙腈（85：15）；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：210nm。理论板数按马来酸氯苯那敏峰、咖啡因峰计算，均应不低于2000。
3 溶液的制备
3.1 对照品溶液 精密称取马来酸氯苯那敏0.01902g，置10ml量瓶中，加流动相适量，振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为马来酸氯苯那敏对照品溶液（每1ml中含马来酸氯苯那敏22.86μg）；精密称取咖啡因对照品0.01517g，置100ml量瓶中，加流动相适量，振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为咖啡因对照品溶液（每1ml中含咖啡因30.34μg）。
3.2 供试品溶液 取本品1片，置乳钵中，研细，加流动相适量研磨，用流动相分次转移置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，弃取初滤液，取续滤液作为马来酸氯苯那敏的供试品溶液；精密量取续滤液2ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为咖啡因的供试品溶液。
3.3 空白对照溶液 取按处方比例制成的除去对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、咖啡因的空白片，按“3.2”项下方法制成空白对照溶液。
4 方法与结果
4.1 空白干扰试验 吸取马来酸氯苯那敏对照品溶液、咖啡因对照品溶液、马来酸氯苯那敏的供试品溶液、咖啡因的供试品溶液、空白对照溶液各20μl，注入色谱仪，同法测定，结果在马来酸氯苯那敏、咖啡因峰相应位置上，空白对照无干扰，结果见图1。
图1 马来酸氯苯那敏对照品
4.2 线性关系考察 精密量取马来酸氯苯那敏对照品溶液、咖啡因对照品溶液各5，10，15，20，25，30，35μl注入色谱仪。记录色谱图，以峰面积为纵坐标，进样量(μg)为横坐标，绘制标准曲线。马来酸氯苯那敏、咖啡因回归方程分别为： Y =2.6429×103X-10.578，r=0.9999，Y =1.0965×104X -7.0521，r=0.9999。实验结果表明，马来酸氯苯那敏进样量在0.1143～0.8001μg范围内，咖啡因进样量在0.01517～0.10619μg范围内，与峰面积呈良好的线性关系，近似为一通过原点的直线。因此，采用外标一点法测定。
4.3 精密度试验 取马来酸氯苯那敏对照品溶液（每1ml中含马来酸氯苯那敏22.86μg）、咖啡因对照品溶液（每1ml中含咖啡因30.34μg），按上述色谱条件连续进样8次，每次进样20μl，马来酸氯苯那敏峰面积的RSD为0.54%（n = 8）；咖啡因峰面积的RSD为0.86%（n=8）。
4.4 稳定性试验 取马来酸氯苯那敏的供试品溶液、咖啡因的供试品溶液，按上述色谱条件，在0，4，8，12，16，20，24h，分别测定1次，进样20μl，考察马来酸氯苯那敏峰面积的RSD为0.70%（n = 5）；咖啡因峰面积的RSD为0.55%（n = 7）。结果表明，供试品在24h内稳定。
4.5 样品含量测定 取复方氨酚烷胺分散片20片，精密称定，研细，精密称取1片量，按“3.2”项下方法制备马来酸氯苯那敏的供试品溶液、咖啡因的供试品溶液，并按上述色谱条件，吸取马来酸氯苯那敏对照品溶液、咖啡因对照品溶液和马来酸氯苯那敏的供试品溶液、咖啡因的供试品溶液各20μl进样测定，按外标法计算，结果见表1。
4.6 回收率试验 取已知含量的样品（批号：20040101，每片含马来酸氯苯那敏1.9006mg、咖啡因14.754mg）细粉约0.5片量，精密称定，9份，分三组，每组分别精密加入咖啡因对照品60、75、90mg，马来酸氯苯那敏对照品8、10、12mg置100ml量瓶中，加流动相适量，振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。每组分别加入储备液10ml，加流动相适量，振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，按“3.2”项下方法测定马来酸氯苯那敏、咖啡因的含量，计算回收率，结果马来酸氯苯那敏、咖啡因平均回收率（n = 9）分别为99.8%，99.9%；RSD分别为0.16%，0.16%。
4.7 样品含量均匀度测定 按“3.2”项下方法制成马来酸氯苯那敏的供试品溶液、咖啡因的供试品溶液，并按上述色谱条件，吸取马来酸氯苯那敏对照品溶液、咖啡因对照品溶液和马来酸氯苯那敏的供试品溶液、咖啡因的供试品溶液各20μl进样测定，按外标法计算，结果见表1。
表1 复方氨酚烷胺分散片中马来酸氯苯那敏与咖啡因的含量均匀度测定结果 （略）
5 讨论
采用本文中的流动相，马来酸氯苯那敏、咖啡因色谱峰峰形良好，并且柱效高，空白对照无干扰。本文制定的高效液相色谱法测定马来酸氯苯那敏、咖啡因的含量均匀度，专属性强，重复性好，适于作为质量控制标准推广应用。通过对3批的复方氨酚烷胺分散片中的马来酸氯苯那敏、咖啡因含量均匀度测定，符合中国药典2005年版二部附录的有关规定［1］。
【参考文献】
1 ChP（中国药典）.2005，Vol Ⅱ（二部），附录：75.
(编辑：余 强)
作者单位： 130062 吉林长春，长春市药品检验所