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Home医源资料库在线期刊中华医药杂志2006年第6卷第3期

双灵固本散对肿瘤患者放疗、化疗后外周血淋巴细胞及免疫功能损伤的防护作用

来源:中华医药杂志
摘要:【摘要】目的观察双灵固本散对肿瘤患者放疗、化疗后外周血淋巴细胞及其免疫功能损伤的防护作用。方法60例肿瘤患者分成4组:放疗组,放疗联合服用双灵固本散治疗组(双灵放疗组),单纯化疗组,化疗联合双灵固本散治疗组(双灵化疗组)。采用CB法测定外周血双核淋巴细胞微核率(MNR)、T淋巴细胞转化率(TLTR)及IgG、......

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    【摘要】  目的  观察双灵固本散对肿瘤患者放疗、化疗后外周血淋巴细胞及其免疫功能损伤的防护作用。方法  60例肿瘤患者分成4组:放疗组,放疗联合服用双灵固本散治疗组(双灵放疗组),单纯化疗组,化疗联合双灵固本散治疗组(双灵化疗组)。采用CB法测定外周血双核淋巴细胞微核率(MNR)、T淋巴细胞转化率(TLTR)及IgG、IgA、IgM的变化。结果  放疗组和化疗组MNR(‰)显著性升高,而TLTR(%)和IgG、IgA、IgM均显著性降低。双灵放疗组和双灵化疗组MNR(‰)、TLTR(%)和IgG、IgA、IgM均无显著性变化。放疗对照组、化疗对照组放、化疗后外周血MNR(‰)与TLTR(%)呈负相关关系。结论  双灵固本散明显减轻肿瘤患者放疗、化疗后T淋巴细胞核DNA及其免疫功能损伤。

  【关键词】  双灵固本散;放疗;化疗;双核淋巴细胞微核;T淋巴细胞转化;免疫球蛋白
  
  Study on sunrecome preventing the patients with tumor from the injury of peripheral blood lymphocytes and protecting immunity after radio-chemotherapy

  HUANG Shi-chao,REN Wu-sheng.

  Shanghai Fudan Luyuan Out-Patient With Tumor Department, Shanghai 20032,China

  【Abstract】  Objective  To explore Sunrecome (Chinese Ganoderma Lucidum Essence) preventing the patients with tumor from the injury of peripheral blood lymphocytes and protecting immunity after radiotherapy and/or chemotherapy.Methods  60 patients with tumor were divided into four groups, namely, Radiotherapy Control Group, Radiotherapy with Sunrecome Group, Chemotherapy Control Group, and Chemotherapy with Sunrecome Group. Cytokinesis-block (CB)micronucleus assay was used to measure the change of  binucleate (BN) micronucleus(MN) frequency in peripheral blood lymphocytes, T lymphocyte transformation rates(TLTR) and IgG, IgA and IgM..Results  As compared with those before the therapy, the MN frequency in the two control groups after radiotherapy or chemotherapy was significantly higher, but the TLTR(%) and the IgG, IgA and IgM were much lower; while in the Sunrecome Groups, the MN frequency, the TLTR and the IgG, IgA, IgM had no significantly difference compares with those before the therapy. There existed a negative correlation between the BN micronucleus frequency and the TLTR in the Radiotherapy Control Group, Chemotherapy Control Group after chemotherapy or radiotherapy.Conclusion  Sunrecome can remarkably alleviate DNA damage in T lymphocytes and immunity injury of the patients with tumor after chemo-radiotherapy.

  【Key words】  sunrecome(Chinese ganoderma lucidum essence);radiotherapy;chemotherapy;binucleate (BN) micronucleus(MN);T lymphocyte transformation (TLT);immunoglobulin

  细胞微核是细胞在有丝分裂时,因各种有害因素损伤,使细胞核成分残留在核外的微小核染色质(CAN)块。细胞微核率测定可作为评价药物,放射线对人、动物及体外细胞DNA损伤的直观、可靠的方法[1]。人外周血淋巴细胞微核率的检测已用于监测化学药物和放射线所致DNA损伤效应[1,2]。用细胞松弛素B(CB)阻断细胞质分裂,观察双核淋巴细胞中微核率的方法(简称CB法),使观察的双核细胞均经1次分裂,因此,CB法检测淋巴细胞微核率更为敏感、完善、合理[3] 。本研究采用CB法测定外周血双核淋巴细胞微核率并用常规方法测定T淋巴细胞转化率以及lgG、lgA、lgM水平,以观察肿瘤患者放、化疗后外周血双核淋巴细胞损伤和免疫功能改变以及双灵固本散的防护作用。

  1  对象与方法

  1.1  研究对象  本研究对象为60例恶性肿瘤患者,男49例,女11例;年龄37~83岁,平均51.1±6.9岁,消化道癌、乳腺癌肺癌各20例。60例中放射治疗20例,化疗40例。按放疗、化疗是否联合双灵固本散将60例分为4个组:放疗联合双灵固本散治疗组(简称双灵放疗组)10例;放疗对照组10例;化疗联合双灵固本散治疗(简称双灵化疗组)20例;化疗对照组20例。4组患者一般情况见表1、表2。

  表1  双灵放疗组、放疗对照组一般情况比较  (略)

  由表1可见,双灵放疗组与放疗对照组2组患者的平均年龄、性别比、患癌症病种例及10次放疗累计剂量差异均无显著性,有可比性。

  表2  双灵化疗组、化疗对照组一般情况比较(略)

  由表2可见,双灵化疗组及化疗对照组2组患者的平均年龄、性别比、患癌症病种例数及各化疗药物使用例数差异均无显著性,有可比性。

  1.2  治疗方法及检测时间  联合双灵固本散的放疗、化疗患者于放疗前或化疗前5天起开始服用双灵固本散,每天2次,每次2g,连续服用,单纯放疗及单纯化疗除不服用双灵固本散外,其他治疗相同。放疗者于放疗前2~3天及放疗10次[累计放疗剂量为(1800+173)CGY]后第1~2天;化疗者于化疗前2~3天及化疗1个疗程后2~3天,测定外周血MNR、TLTR及免疫球蛋白LgG、LgA、LgM水平。

  1.3  检测方法

  1.3.1  外周血MNR检测方法  采用CB法[3] 。取患者静脉血1ml以肝素抗凝,用RPMI1640培养液4ml加小牛血清1ml、植物血凝素(PHA)0.2ml和受试血液0.5ml,在37℃下全血清培养48h后加细胞松弛素B,其终浓度为5μg/ml,继续在37℃下培养24h后,按常规方法收获细胞,以0.075mol/L KCI低渗处理10min,加甲醇冰醋酸固定5r/min,制片1天后,Giemsa染色,在油镜下随机读片,对每个标本统计500个双核淋巴细胞中的微核细胞数,微核率以千分率表示。

  1.3.2  外周血TLTR检测方法  采用T淋巴细胞转化试验测定[4] 。取肝素抗凝血0.1ml(无菌),加入1.8ml RPMI1640培养液中,同时加入PHA 0.1ml,于37℃水浴温育3天,每天摇动1次,培养结束后取出吸去大部分上清液,加入8.3g/L NH4Cl 4ml混匀,置37℃水浴10min,取出,2500r/min离心,弃去上清液,沉淀加5ml固定液(甲醇冰醋酸),室温作用10min,离心去上清液,留0.2ml沉淀,用气干法制片,Giemsa染色10~20min,在油镜下随机读片,计数200个淋巴细胞中转化细胞数,T淋巴细胞转化率以%表示。

  1.3.3  血清免疫球蛋白测定  采用终点散射比浊法[5] 测定血清免疫球蛋白lgG、lgA、lgM的浓度,以g/L表示。

  2  结果

  2.1  双灵放疗组、放疗对照组患者放疗前后MNR、TLTR及免疫球蛋白测定结果  见表3。

  表3  双灵放疗组、放疗对照组MNR、TLTR免疫球蛋白测定结果  (略)

  由表3可见,双灵放疗组放疗后MNR、TLTR及免疫球蛋白(lgG、lgA、lgM)浓度均无显著性变化,但放疗对照组放疗后MNR显著性高于放疗前,而TLTR及免疫球蛋白(lgG、lgA、lgM)浓度均显著性低于放疗前。在放疗前,该2组的MNR、TLTR及免疫球蛋白(lgG、lgA、lgM)的浓度差异均无显著性;但放疗后双灵放疗组的MNR显著性低于放疗对照组,而TLTR及免疫球蛋白(lgG、lgA、lgM)浓度显著性高于放疗对照组。

  2.2  双灵化疗组、化疗对照组患者化疗前后MNR、TLTR及免疫球蛋白测定结果  见表4。

  表4  双灵化疗组、化疗对照组MNR、TLTR免疫球蛋白测定结果  (略)

  由表4可见,双灵化疗组化疗后MNR、TLTR及免疫球蛋白(lgG、lgA、lgM)浓度均无显著性变化,但化疗对照组化疗后MNR显著性高于化疗前,而TLTR及免疫球蛋白(lgG、lgA、lgM)浓度均显著性低于化疗前。在化疗前,该2组的MNR、TLTR及免疫球蛋白(lgG、lgA、lgM)浓度比较差异均无显著性;但化疗后,双灵化疗组的MNR显著性低于化疗对照组,而TLTR及免疫球蛋白(lgG、lgA、lgM)浓度显著性高于化疗对照组。

  2.3  放疗对照组、化疗对照组患者放、化疗后外周血MNR与TLTR呈负相关关系  经回归方程为y=84.3x1.282,y为外周血TLTR(%),x为外周血MNR(‰)。分析显示,放疗对照组、化疗对照组患者放疗、化疗后外周血MNR与TLTR呈负相关。

  3  讨论

  本研究放疗对照组与双灵放疗组患者的平均年龄、性别比、患癌病种例数及放疗累计剂量差异均无显著性;化疗对照组与双灵化疗组患者的平均年龄、性别比、患癌病种例数及各化疗药物使用例数差异均无显著性,提示本研究所分4个组有可比性。人外周血MNR可敏感反映化疗药物和放射线所致淋巴细胞DNA损伤效应[1,2 ] 。本文研究结果显示放疗对照组和化疗对照组在放、化疗后外周血MNR均显著性升高,而双灵放疗组和双灵化疗组在放疗、化后外周血MNR与放疗、化疗前相比差异无显著性,且均显著性低于相应对照组,提示肿瘤患者放疗、化疗可致外周血淋巴细胞核DNA损伤,而双灵固本散可明显减轻肿瘤患者放疗、化疗所致外周血淋巴细胞核DNA损伤,这与文献报道大鼠骨髓细胞核和Ames试验结果所示的抗突变效应相一致[4]。

  淋巴细胞在体外培养中经植物血凝素(PHA)刺激可能转化为体积较大的母细胞,计数转化的母细胞(TLTR)可反映机体细胞免疫功能,血清免疫球蛋白(lgG、lgA、lgM)浓度可反映机体体液免疫功能[5]。本文研究结果显示放疗对照组和化疗对照组在放疗、化疗后TLTR和血清免疫球蛋白(lgG、lgA、lgM)浓度均显著性降低。而双灵放疗组和双灵化疗组在放疗、化疗后TLTR和血清免疫球蛋白(lgG、lgA、lgM)浓度均无显著改变,并显著性高于相应对照组。提示肿瘤患者放疗化疗后免疫功能(细胞免疫和体液免疫)均受到损伤,而双灵固本散可明显减轻肿瘤患者放疗、化疗所致免疫功能损伤。

  放疗对照组、化疗对照组放疗化疗后外周血MNR、TLTR呈负相关关系。淋巴细胞微核率可敏感反映放疗、化疗后淋巴细胞核DNA损伤,提示T淋巴细胞转化率与淋巴细胞核DNA损伤呈密切负相关,双灵固本散可明显减轻肿瘤患者放疗、化疗后淋巴细胞核DNA损伤,使T淋巴细胞转化率仍保持正常水平,从而明显减轻放化疗所致免疫功能损伤的程度。

  【参考文献】

  1  吴茅. 细胞微核的研究进展.临床血液学杂志,1999,12(6):279.

  2  Catena C. Peripheral blood lymphocyte decrease and micronucleus yields during radiotherapy.Jpn J Cancer Res,1997,88(9):907.

  3  顾祖维. 细胞松弛素B在微核试验中的应用.卫生毒理学杂志,1993,7(2):105.

  4  陈金生.双灵固本散抗肿瘤研究与临床应用. 中华医药杂志,2003,8(3):689.

  5  叶应抚,王毓三. 全国临床检验操作规程,第2版.南京:东南大学出版社,1997,361-379.

  (编辑:余  强)

  作者单位: 200032 上海,上海复旦绿源门诊肿瘤科

        201203 上海,上海绿谷生物医药研究所

作者: 黄士超,任武生 2006-8-19
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