Literature
Home医源资料库在线期刊中华医药杂志2006年第6卷第4期

注射用抗肾综合征出血热病毒单克隆抗体制剂的质量控制

来源:中华医药杂志
摘要:【摘要】目的对治疗用抗HFRS病毒单克隆抗体三批中试产品进行全面的检定。方法参照国家食品药品监督管理局颁布的《人用鼠源性单克隆抗体质量控制要点》进行各项检定。结果所有检定项目均合格,其中单抗蛋白纯度95%,单抗IgG单体纯度95%,残余骨髓瘤细胞(SP2/0)DNA含量100pg/剂量,微量细胞培养中和试验法检测抗体中......

点击显示 收起

  【摘要】  目的  对治疗用抗HFRS病毒单克隆抗体三批中试产品进行全面的检定。方法  参照国家食品药品监督管理局颁布的《人用鼠源性单克隆抗体质量控制要点》进行各项检定。结果  所有检定项目均合格,其中单抗蛋白纯度>95%,单抗IgG单体纯度>95%,残余骨髓瘤细胞(SP2/0)DNA含量<100pg/剂量,微量细胞培养中和试验法检测抗体中和效价>1:12800~1:25600,鼠源性病毒检测、支原体检测、无菌试验、安全试验、热原质试验均合格。在自检合格的基础上,送中国药品生物制品检定所检定合格。结论  抗HFRS病毒单克隆抗体三批中试产品符合临床研究的质量要求。

  【关键词】  质量控制;   单克隆抗体;   肾综合征出血热

  Quality control of monoclonal antibody against HFRS virus for therapeutic application

  ZOU Chang-yong,MIAO Yan-min, LEI Ji-jun,et al.Wuhan Institute of Biological Products,Wuhan 430060,China

  【Abstract】  Objective  To analyze the quality of prepared three lot products of monoclonal antibody(mAb) against hemorrhagic fever with renal syndrome(HFRS) virus. Methods  The overall quality control was performed according to the standardization on preparation and inspection of murine mAb for therapeutic application which was issued by SFDA in 1999.Results  All inspected items were qualified, the protein purity of IgG were above 95%,the neutrilizing titer of mAb varied from 1:12800 to 1:25600,no murine viruses contaminations were detected,and residual DNA was lower than 100pg/dose.Conclusion  The results proved that the prepared mAb are qualified for application in clinic trial.

  【Key words】  quality control;mAb; hemorrhagic fever with renal syndrome(HFRS)

  肾综合征出血热(Hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)是由汉坦病毒(Hantaviruses,HV)引起,由鼠类等传播的一种急性病毒性传染病。我国是世界上HFRS疫情最严重的国家,卫生部长期都将HFRS列为重点研究和防治的传染病之一[1,2]。本研究采用2株分泌对汉坦病毒具有高中和活性、高血凝抑制活性及对病毒感染动物具有良好保护作用的特异性单抗的杂交瘤细胞[3]小鼠制备腹水单抗,按照《人用鼠源性单克隆抗体质量控制要点》[4]的要求,连续中试制备出3批制剂,并进行了全面质量检定。结果表明,抗HFRS病毒单克隆抗体三批中试产品符合临床研究的质量要求。   

  1  材料与方法

  1.1  HFRS单抗3G1、3D8  杂交瘤细胞株3G1、3D8由第四军医大学微生物教研室建株并提供。从腹水单抗中分别提取单抗3G1、3D8,中试制备3批单抗制剂,批号为991101、991102、991103。

  1.2  单抗蛋白含量测定  Lowry法,蛋白含量不低于标示值(5mg/支)的90%。

  1.3  电泳纯度  用非还原或还原SDS-PAGE法,经扫描仪扫描,纯度应≥95%。

  1.4  单抗IgG单体纯度  HPLC法,IgG多聚体应≤10%,IgG单体纯度应≥95%。

  1.5  DNA含量测定  用DNA分子杂交法测定,每支制剂残余DNA含量应<100pg。

  1.6  支原体检查  按《人用鼠源性单克隆抗体质量控制要点》[3]进行。

  1.7  鼠源病毒检查  按《人用鼠源性单克隆抗体质量控制要点》[3]进行。

  1.8  无菌试验、安全试验、热原质试验  按《中国生物制品规程》(一部,1995年版)进行。

  1.9  抗体中和效价检定  采用微量细胞培养中和试验。

  1.10  水分测定  用K.Fischer法测定,其含量应≤3%。

  2  结果

  2.1  半成品检定结果  见表1,图1、图2。

  2.2  成品检定结果  见表2。表1  半成品检定结果表2  成品检定结果

  2.3  半成品和成品送中检所检定结果  3批中试单抗制剂在武汉生物制品研究所全面自检合格的基础上,送中国药品生物制品检定所检定,通过了中检所的检定,取得了中检所的检定合格报告。

  3  讨论

    临床上肾综合征出血热以发热、出血和急性肾功能损害为主要特征。同大多数病毒性疾病一样,目前尚无特效疗法,主要采用综合性对症治疗。近年来,早期治疗除了对症和支持治疗外,特别强调抗病毒疗法。据报道早期(5病日内)应用病毒唑和(或)干扰素、特异性免疫球蛋白和免疫血清可程度不同地缩短退热时间,加速尿蛋白转阴,提高越期率,降低病死率[5,6]。

    由于汉坦病毒是HFRS的始动病因,而免疫病理损伤则是继发性的,因而早期清除患者体内病毒对减轻病理损害,阻断病情发展具有重要意义。因此,努力开发新的高效特异性抗病毒药物是HFRS和其他病毒性疾病治疗研究中亟待解决的问题。

   特异性单抗是现代生物技术领域中研究开发最多的一类新型药物(制剂)。目前单抗对感染动物的实验性治疗已涉及到许多病毒性疾病,特别是一些危害严重的急性病毒病,如汉坦病毒、脑炎病毒、呼吸道合胞病毒等[7,8]。这些实验研究充分证明,单抗与一般的抗病毒药物相比,具有高度特异性,保护效果确切,而且有可能只需一次给药即可治愈。其对感染动物的保护机制主要是单抗对病毒的直接作用,包括中和病毒的作用和直接抑制病毒复制的作用。在上述感染动物实验性治疗的基础上,目前国内外已有几种单抗获准进入临床治疗病毒性传染病,初步结果证实单抗具有显著疗效。国内外的一系列实验和临床研究表明,人体反复注射异源性抗体有可能引起变态反应或降低疗效,但一次性使用(例如上述治疗急性病毒性传染病)则无明显副作用,使用是安全的。由武汉生物制品研究所和第四军医大学共同研制的该制剂属国家I类新生物制品,已获SFDA临床研究批件。目前正在进行临床研究。

  (致谢:抗体中和效价测定由第四军医大学微生物学教研室徐志凯主任、王海涛副教授完成,特此致谢)

  【参考文献】

  1  杨为松.肾综合征出血热.北京:人民军医出版社,1999,68.

  2  全国流行性出血热防治方案.中华人民共和国卫生部,1997年2月4日.

  3  卫立辛,汪美先.应用McAb和免疫血清对不同HFRS病毒株感染乳鼠保护作用的比较.单克隆抗体通讯,1990,6(2):18-21.

  4  新生物制品审批办法,1999年5月1日起施行,附件四:人用鼠源性单克隆抗体质量控制要点.

  5  徐海峰.特异性免疫球蛋白治疗早期流行性出血热的研究.中华实验和临床病毒学杂志,1990,4(4):340.

  6  沈济仓,徐志凯.单克隆抗体治疗肾综合征出血热的疗效观察.临床荟萃,1999,14(12): 557-558.

  7  Hindula J.Immunological and virological inteactions in patients receiving passive immunotherapy with HIV-1 neutralizing monoclonal antibodies.J Acquir Immune Defic Syndr,1994,7(9):340.

  8  过琴媛,张碧如,邹林,等.治疗用乙型脑炎单克隆抗体注射液的研制.  中国生物制品学杂志,1997,10(1):16-20.

  作者单位: 430060 湖北武汉,武汉生物制品研究所

   (编辑:黄  杰)

作者: 邹昌勇,缪燕敏,雷继军,杨 明,喻远祥,詹 骞,杜 2006-8-19
医学百科App—中西医基础知识学习工具
  • 相关内容
  • 近期更新
  • 热文榜
  • 医学百科App—健康测试工具