点击显示 收起
亲子鉴定是法医物证学检验的主要项目，近年来随着短串联重复序列分析技术（STR）的日趋完善，该技术在亲子鉴定领域的应用越来越广泛。人类基因组中约有50万个串联重复序列位点，其核心序列，一般为2～5bp，片段长度为100～500bp，由于分布广泛，扩增片段短小，且近一半STR位点具有遗传多态性，现在，通过PCR检测STR基因座基因型的技术已逐渐取代传统的法医血清学技术，成为法医物证学鉴定的主要方法。
HLA位于人类第6号染色体短臂6p21.3区域，具有高度的遗传多态性，是人类基因组中的一个重要标记，符合孟德尔遗传规律，属共显性遗传。在法医学中，HLA多用于亲子鉴定，HLA-A、B位点累计非父排除率可达90%以上［1］。笔者利用HLA和STR基因座进行祖孙血缘关系鉴定，现报告如下。
1 案例
两年前，王某怀疑其妻子与第三者有染，发生争执，不幸被其妻子伙同他人杀害，但王某妻子当时怀孕在身，未处极刑，后产下一子。王某的家属怀疑男孩不是王某亲生，因此，需对男孩的生父进行确认。由于王某已死，对男孩及其祖父、祖母分别进行13个STR位点的检测，同时对男孩及其祖父、祖母和伯父进行HLA鉴定。根据其中HLA-B位点的结果，得出小孩非王某所生的结论。
2 材料与方法
2.1 血样采集 对4名当事人各抽静脉血5ml，取其中的玻璃珠脱纤维抗凝血4ml用于HLA-A、B分型（血清学）；ACD-B抗凝血1ml用于STR、HLA-Ｂ（RELI-SSO）、HLA-DR（SSP）等项目检查。
2.2 HLA检测 HLA血清学按NIH标准进行微量淋巴细胞毒试验［2］；进行HLA-B（RELI-SSO）检测［3］；HLA-DR（SSP）检测［4］。
2.3 STR基因座检测 Profiler Plus和Cofiler体系对13个STR位点进行基因型检测［5］。
3 结果
3.1 Profiler Plus体系和Cofiler体系的13个STR基因座的检测 结果见表1、2，不能排除男孩与其祖父、祖母有血缘关系。表1 Profiler Plus体系的9个STR位点检测结果表2 Cofiler体系的6个STR位点检测结果
3.2 HLA-A、B、DR基因座的检测结果 见表3。表3 HLA-A、B（血清学）、HLA-B（RELI-SSO）及HLA-DR（SSP）的检测结果注：B*4001即为B60，B*4006即为B61，B*1558即为B75
根据祖父、母表型分析出男孩可能的单倍型没有一条可以来自祖父、祖母，可以排除男孩与祖父、祖母有血缘关系。由于在血清学分型方法中，B40组的B60，61之间会发生交叉反应，造成抗原分辨困难［6］，为了明确区分这两个抗原，笔者加做了HLA-B（RELI-SSO）DNA分型，以确认血清学结果的准确性。
4 讨论
短串连重复序列（STR）作为人类血型遗传系统的一个高度多态的遗传标记，非父排除能力强，在亲子鉴定中极具有使用价值。常规采用 Profiler Plus和Cofiler系统进行个13个STR位点的检测均能取得满意结果，但本案的情况较为特殊，由于孩子的父亲王某已故，其血型未知，而祖－孙只有1/4基因是相同的，其亲缘系数为1/4，称为二级亲属。通过男孩祖父、祖母的13个STR位点与男孩的13个STR位点的检测结果分析，不能排除王某与男孩有亲子关系。可见STR在祖－孙亲子鉴定中存在某些局限性。
通过HLA-A、B、DR位点的鉴定及王某家系的分析，同时为了确定家系的单倍型，又增检男孩伯父的HLA-A、B位点，可以推出王某的单倍型由（1）A24B61；A2B55和（2）A24B13；A24B61中各取1条组成。由于男孩母亲正在狱中服刑，其血型无法检测，根据结果3.2，男孩单倍型的可能性有以下4种：（1）A2B60，（2）A2B75，（3）A11B60，（4）A11B75，而没有一条单倍型来自王某的遗传，则可以判断王某与男孩无亲子关系。
应用HLA位点的检测，可提高祖－孙关系在亲子鉴定中非父的排除能力，弥补STR方法鉴定亲子关系的不足，多了一种判断亲子关系的依据，所以在当今亲子鉴定中广泛采用STR检测技术的同时，不能放弃一些传统的经典方法，如HLA系统、红细胞血型、血小板血型等。
综上所述，HLA分型技术是一种实用、有效的技术，具有很好的实用性，不仅能够应用于亲子鉴定，而且还可以应用于临床器官移植和HLA疾病相关性的研究。可以相信，HLA这一具有极高多态性的遗传标记系统，仍将在法医学个人识别和亲子鉴定中发挥较大的作用。
【参考文献】
1 冯明亮，冯哲，王健莲，等.中国汉族人群中5种血型系统在亲子鉴定应用中的探讨.中国输血杂志，1997，10（1）：21－22.
2 Lee J. The HLA system. New York: Springer Verlay，1990，108-114.
3 冯明亮，季芸，马俊，等.反向PCR-SSOP技术行HLA-AB分型与临床应用.中国实验血液学杂志，2001，9（4）：63.
4 Olerup O，Zetterquist H. HLA-DR typing by PCR amplification with sequence-specific primers（PCR-SSP） in 2 hours: An alternative to serological DR typing in clinical practice including donor-recipient matching in cadaver trandplantations. Tissue Antigens，1992，39（22）：5-235.
5 杜志淳，李莉，林源，等.“中国犯罪DNA数据库”模式库－13个STR位点基因在中国人群中的分布.法医学杂志，2002，16（1）：1－5.
6 冯明亮，马俊，季芸，等.HLA-B40组等位基因多态性和血清学分型不明确标本分析.免疫学杂志，2002，18（3）：215－217.
作者单位：200051 上海，上海市血液中心免疫遗传室
（编辑：汪 洋）