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Home医源资料库在线期刊中华医药杂志2006年第6卷第6期

家蝇幼虫血淋巴抗病毒作用初步研究

来源:中华医药杂志
摘要:【摘要】目的确定家蝇幼虫血淋巴的抗病毒作用。方法用鸡胚培养法检测经针刺免疫诱导及同期对照家蝇幼虫血淋巴的抗病毒活性。结果家蝇幼虫血淋巴确有抗病毒活性,经针刺免疫诱导组活性高于同期对照,该抗病毒活性物质初步估计为蛋白质或肽类,性质有待进一步确定。结论家蝇幼虫血淋巴中存在的抗病毒活性物质,为寻找......

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    【摘要】  目的  确定家蝇幼虫血淋巴的抗病毒作用。方法  用鸡胚培养法检测经针刺免疫诱导及同期对照家蝇幼虫血淋巴的抗病毒活性。结果  家蝇幼虫血淋巴确有抗病毒活性,经针刺免疫诱导组活性高于同期对照,该抗病毒活性物质初步估计为蛋白质或肽类,性质有待进一步确定。结论  家蝇幼虫血淋巴中存在的抗病毒活性物质,为寻找新的抗病毒药物提供了方向。

    【关键词】  家蝇;血淋巴;抗病毒作用

    A preliminary study on antiviral activity of Musca domestica larva

    LI Jin-fu,CHEN Yan.Department of Parasitology,Guiyang Medical College,Guiyang 550004,China

    【Abstract】  Objective  To study the antiviral activity of Musca domestica larva hemolymph.Methods  Examining the antiviral activity of larva hemolymph with chicken embryo method.Results  The larva hemolymph had antiviral activity though the active components were unknown,and the antiviral activity of the groups stimulated by needle were more obvious than control.Conclusion  The antiviral activity of larva hemolymph offers a new way to find new antiviral drugs.

    【Key words】  Musca domestica;hemolymph;antiviral activity

    家蝇呈世界性分布,其幼虫至成虫的发育过程多是在杂菌丛生的环境中完成的,有很强的抗病力。近来的研究表明,家蝇幼虫血淋巴中存在具有抗菌作用的抗菌肽[1,2]。为确定家蝇幼虫血淋巴是否还有抗病毒作用并开发利用这一潜在的医药价值,笔者首次进行了家蝇幼虫血淋巴抗流感病毒作用的研究,现将结果报告如下。

    1  材料与方法

    1.1  材料

    1.1.1  蝇种  在室外采集成蝇于实验室饲养传代,作为实验室用种蝇。

    1.1.2  家蝇饲料  奶粉、白糖、麦麸。

    1.1.3  闽中麻鸡鸡胚(9~10日龄)  购于贵州省畜牧兽医科学研究所种鸡场。

    1.1.4  流感病毒(FM1,申防77~78株)  本室自行传代保种获得。

    1.1.5  利巴韦林(病毒唑)注射液  贵州华圣制药有限责任公司产品,规格:0.1g/支。

    1.2  方法

    1.2.1  家蝇饲养  在25±1℃,RH 60%~70%的条件下饲养。成蝇喂以奶粉和白糖,每日更换饮水。幼虫饲养于人工饲料(麦麸加奶粉、白糖)中。

    1.2.2  家蝇幼虫的免疫诱导  采用0号昆虫针刺入生长已满3日的三龄幼虫的腹部即可。经针刺后的家蝇幼虫继续饲养24h提取血淋巴。

    1.2.3  家蝇幼虫血淋巴的提取  取针刺24h后或同期对照的家蝇幼虫,在75%酒精中浸泡1min后用无菌millipore水洗3次,在冷麻醉、无菌条件下,剪去幼虫头部,所得血淋巴滴入预先放入少量蛋白酶抑制剂(苯基硫脲颗粒)并置于冰浴中的无菌离心管内,4℃、10000r/min离心10min,取上清存于-80℃备用。

    1.2.4  家蝇幼虫血淋巴抗流感病毒实验  (1)将含100EID50(半数鸡胚感染剂量)的流感病毒与等量不同稀释度的家蝇幼虫血淋巴液(A、B、C、D液)分别于小试管内混合,置37℃水浴箱中1h。(2)将前述混合液分别接种于9~10日龄鸡胚尿囊腔内,每只鸡胚接种0.2ml,每个稀释度接种4只鸡胚。(3)同时作病毒对照、利巴韦林对照(作3个不同稀释度)和空白对照。(4)37℃温箱中孵育48h,每日检查鸡胚死亡情况,24h内死亡鸡胚弃去不计,鸡胚孵育48h后放入4℃冰箱过夜。(5)定性测定每个鸡胚尿囊液的血球凝集情况。

    2  结果

    家蝇幼虫经针刺刺激后,其血淋巴的抗病毒活性高于未经针刺的同期对照组,且抗病毒活性随血淋巴的稀释度增加而降低(见表1)。表1  家蝇幼虫血淋巴抗病毒作用结果注:A液、B液、C液、D液分别为血淋巴原液稀释至8倍、16倍、32倍、64倍的稀释液,最大无毒剂量为血淋巴原液稀释至4倍的稀释液“-”示无血球凝集现象发生,该液有完全抗病毒作用,鸡胚尿囊液中无病毒生长;“+~+++”示有不同程度的血球凝集现象发生,该液有一定抗病毒作用,鸡胚尿囊液中有一定量病毒生长;“++++” 示有最高程度的血球凝集现象发生,该液完全无抗病毒作用,鸡胚尿囊液中有大量病毒生长

    3  讨论

    近来的研究表明昆虫抗菌肽不仅有抗菌作用[3~5],还有抗病毒[6]等作用。但这些研究多是基于蚕等大中个体昆虫的研究,国内王远程等[7]首先对家蝇进行研究,发现家蝇幼虫血淋巴中有抗菌物质的存在,认为该物质可能为一种类似天蚕素的肽类。其后的一些研究均是针对家蝇抗菌物质的研究,而有关家蝇幼虫血淋巴是否有抗病毒的作用却未见报道。因此,笔者进行了家蝇幼虫血淋巴抗流感病毒的实验。

    实验结果表明家蝇幼虫血淋巴中确实存在抗病毒活性物质,且加针刺24h后幼虫血淋巴组抗病毒活性高于同期对照幼虫,说明该物质的产生是可以诱导的。但随着血淋巴稀释倍数的增加,其抗病毒活性也逐渐消失,表明血淋巴中该物质的含量较少。

    关于家蝇幼虫体内抗病毒活性物质的组成及性质尚未做明确的研究,还有待于进一步确定。但根据该物质可以经诱导产生以及近来对血淋巴抗菌成分的研究,初步估计该抗病毒物质可能是一种蛋白质或肽类。对家蝇幼虫血淋巴抗病毒活性物质的研究与开发利用将有一个非常广阔的前景。

    【参考文献】

    1  王远程,刘伟,杨峰,等.家蝇血淋巴的提取及抗菌物质的诱导.微生物学报,1992,32(6):439.

    2  吴建伟,吴健桦,杨鹤萍,等.家蝇幼虫血淋巴抗白念珠菌作用的初步研究.中国人兽共患病杂志,2002,18(3):57.

    3  李文楚,张家明,温刘发,等.柞蚕抗菌肽对热带作物病原菌的杀菌作用.热带作物学报,1994,15(1):97.

    4  龚琪,孟阳春,周洪福.不同诱导源诱导美洲大蠊血淋巴抗菌物质的研究.中国媒介生物学及控制杂志,1993,(4):81.

    5  Casteels P,Ampe C,Riviere L,et al. Isolation and characterization of abaccin,a major antibacterial response pepetide in the honeybee(Apis mellifera).Eur J Biochem,1990,187:381.

    6  Ourth DD,Renis HE. Antiviral melanization reaction of Heliothis Virescens hemolymph against DNA and RNA Viruses in vitro.Comp-Bicchem-physiol-B,1993,105(3-4):719.

    7  王远程,左晓峰,孙东旭,等.家蝇幼虫抗菌物质组成及其理化性质.微生物学报,1997,37(2):148.

     作者单位: 550004 贵州贵阳,贵阳医学院寄生虫学教研室

  (编辑:邓  锋)

作者: 李金福,陈 艳 2006-8-19
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