血液光量子疗法对急性白血病患者血小板相关抗体产生的影响

　　【摘要】  目的  探讨血液光量子疗法对急性白血病患者血小板输注后血小板相关抗体产生的影响。方法  将74例血小板减少的急性白血病患者随机分为两组，治疗组采用血液光量子疗法进行血小板输注，对照组单纯行血小板输注。两组均采用酶联免疫吸附法(ELISA)，在血小板输注前后定量测定血小板表面相关抗体(PAIgG和PAIgM)；计数血小板，计算1、24h血小板增值(CCI)；观察其临床效果和非溶血性输血反应(NHFTR)。结果  血小板输注前两组PAIgM及PAIgG值差异无显著性，输注后两组PAIgM差异无显著性，而治疗组PAIgG值明显低于对照组(P＜0.05)；两组的CCI 1h差异无显著性，治疗组CCI 24h和临床效果明显优于对照组(P＜0.05)；治疗组的NHFTR低于对照组(P＜0.05)，其临床效果优于对照组(P＜0.05)。结论  血液光量子疗法可减少血小板输注无效。

    【关键词】  血液光量子疗法；急性白血病；血小板输注；血小板相关抗体

     【Abstract】  Objective  To investigate the effect of ultraviolet irradiation and oxygenation(UBIO)on platelet transfusion of acute leukemia patients.Methods  Divide 74 platelet-reduced acute leukemia patients into two groups with randomized allocation.Therapy group transfuses platelet with UBIO,and control group only transfuses platelet.We mensurate platelet-associated antibody(PAIgG and PAIgM) of the two groups before and after platelet transfusion with Enzyme-linked Immuno Sorbent Assay (ELISA),count platelet amount and calculate 1 and 24 hour corrected count increament(CCI),and observe clinical effect and non-hemolytic febrile reaction(NHFTR).Results  There is no significant difference in PAIgM and PAIgG between two groups before platelet transfusion.After transfusion,there is no significant difference in PAIgM between two groups,but PAIgG of therapy group is lower than control group (P＜0.05).There is no differnece of CCI 1h between two groups.CCI 24h and clinical effect of therapy group are better than control group(P＜0.05).And NHFTR of therapy group is lower than control group(P＜0.05).Its clinical effect is better than control group(P＜0.05).Conclusion  UBIO can reduce refractoriness to platelet transfusion.

    【Key words】  ultraviolet irradiation and oxygenation(UBIO)；acute leukemia；platelet transfusion；platelet-associated antibody

    血小板输注适用于防治血小板减少或血小板功能缺陷引起的出血，是重要的支持疗法，已广泛用于临床。然而，患者多次血小板输注后可产生血小板相关抗体，导致血小板输注无效，这是长期困扰临床的棘手问题。2004～2005年，笔者应用血液光量子疗法对血小板悬液进行紫外线照射和充氧，观察对急性白血病患者血小板输注后相关抗体产生的影响。

    1  资料与方法

    1.1  临床资料  74例急性白血病患者，均有血小板减少及输血史，其中男45例，女29例；年龄9～63岁，平均36岁。其中AML-M2a 26例，AML-M2b 5例，AML-M3 13例，AML-M5 20例，ALL 10例。患者均有皮肤紫癜、血尿、消化道出血等严重出血表现；或血小板计数＜30×109/L。将患者随机分为治疗组和对照组各37例，两组年龄、性别、输血史、白血病类型及影响输血效果的其他因素(如脾大、感染、DIC、出血等)差异均无显著性。

    1.2  血小板输注方法  (1)治疗组：取ABO同型新鲜单采血小板16u，与患者血样交叉配合后，置于中国科技大学顺达高技术医疗设备有限公司研制的JLX-2型激光磁化血液治疗仪上，以波长632.8nm的氦氖激光及10个生物剂量(253.7nm)的紫外线照射10min，同时以5L/min的流量充氧，然后立即按常规方法进行输注。(2)对照组：取ABO同型新鲜单采血小板16u，与患者血样交叉配合后，立即按常规方法进行输血。两组输血前均肌注非那根25mg或地塞米松5mg，以预防输血反应。

    1.3  检测方法  两组患者输注血小板悬液前及输注后2～3周，均采静脉血2～4ml，采用酶联免疫吸附法(ELISA)定量测定血小板相关抗体G(PAIgG)和血小板相关抗体G(PAIgG)和血小板相关抗体M(PAIgM)。试剂由福建太阳生物技术公司生产。正常值PAIgG＜108ng/107PA,PAIgM＜40ng/107PA。

    1.4  非溶血性输血反应(NHFTR)判定标准  输血过程中观察患者有无NHFTR。NHFTR诊断标准：输注血小板后4h内发热，或体温较输血前升高1℃以上和(或)伴皮疹、畏寒、寒战、心悸、气喘等症状，无溶血性输血反应的症状和体征，尿三胆阴性［1］。

    1.5  血小板输注效果及临床效果判定标准  (1)血小板输注效果：输注血小板悬液前及输注后1、24h分别采静脉血计数血小板，计算体表面积和校正血小板计数增值(CCI)。体表面积(m2）＝0.0061×身高(cm)+0.0128×体重(kg)-0.01529；CCI=(输后血小板计数-输前血小板计数)×体表面积(m2)÷输入血小板总数(1011)。若CCI 1h＜10×109/L，24h＜7.5×109/L，为血小板输注无效；反之为有效。(2)临床效果：①有效：血小板计数升高，出血停止或明显减轻；或血小板计数无上升，但出血症状明显好转。②无效：血小板计数无上升，出血症状无明显好转。

    1.6  统计学处理  样本均数比较用t检验，率的比较应用χ2检验。

    2  结果

    2.1  两组血小板相关抗体比较  见表1。从表1可看出，两组输注血小板前PAIgG和PAIgM值差异无显著性；输注后治疗组PAIgG显著低于对照组，两组比较差异有显著性(P＜0.05)，但两组PAIgM比较差异无显著性。表1  两组治疗前后PAIgG、PAIgM比较注：与对照组比较，P＜0.05

    2.2  两组CCI比较  对照组CCI 1h 49.57±20.41，治疗组69.69±3.53，两组比较差异无显著性；对照组CCI 24h 17.00±13.49，治疗组42.87±27.84，两组比较差异有显著性(P＜0.05)。

    2.3  两组输注血小板次数、输血总次数(红细胞、血小板、血浆等)、输注有效率、临床效果、NHFTR比较见表2。表2  两组输血次数、输注效果及NHFTR比较注：与对照组比较，P＜0.05由表2可看出，两组输注血小板均有效，但治疗组有效率高于对照组(P＜0.05)；NHFTR治疗组明显低于对照组(P＜0.05)。

    3  讨论

    出血是急性白血病致死的主要原因之一，血小板输注可起到暂时止血作用，但随着输注次数的增加，部分患者出现血小板输注无效。究其原因分为非免疫因素(如脾大、发热、感染、出血和DIC等)和免疫因素两种。据报道，血小板输注无效80%～90%为人类白细胞抗原抗体引起，5%～8%为血小板特异性抗原抗体引起，即免疫因素是引起血小板输注无效的主要原因。

    自Kahn等1985年提出使用中波紫外线照射灭活浓缩血小板中的白细胞作为白细胞过滤的替代方法以来，关于紫外线照射(或紫外线照射加充氧)是否可以抑制同种免疫一直没有定论。本研究基本均衡了治疗组和对照组的非免疫因素，着重研究血液光量子疗法对血小板输注的影响。结果表明，血液光量子疗法可减少血小板相关抗体产生，有效地降低同种免疫反应。其机制可能为：(1)紫外线照射后，受体T细胞与供体APC相互作用时细胞表面分子结构与功能发生改变。Fiebig等应用流式细胞仪定量检测经UVB照射浓缩血小板，研究CD14细胞UVB表面粘附分子的表达，结果发现UVB照射能抑制细胞间粘附分子-1、人类白细胞抗原-DR(HLA-DR)表达升高，而这些分子是与抗原递呈有关的重要分子［2］。许多临床试验证实，UVB照射能有效地预防HLA同种免疫。(2)与细胞膜(Ca2+)离子通道受阻，影响免疫效应细胞和抗原递呈细胞间的信息传递过程有关［3］。

    实验证实，血液光量子疗法可减少血小板无效输注。其机制除使血小板的免疫性破坏减少外，可能与此疗法有利于维持血小板的功能有关。浓缩血小板悬液血小板密度高，持续振荡有利于紫外线更均匀的照射，防止局部有害代谢产物堆积，充氧可保证血小板的气体交换，两者都有利于保持合适的pH值，以维持血小板的活力和功能。

    近年来体外实验提示，紫外线照射对血小板有激活和形态损害作用［4］；亦有研究提示，紫外线照射可影响血小板的聚集功能，但这些实验所采用的紫外线波长和剂量各不相同。还有资料显示，经紫外线照射后血小板计数持续降低，这是因为血小板糖蛋白构型发生改变，使其与纤维蛋白的结合加速，导致血小板聚集体形成。一般紫外线照射后，血小板代谢加快，从而影响浓缩血小板的保存。本文实验血小板经紫外线照射后立即输注，不涉及保存问题，紫外线照射后能有效的灭活其中混杂的白细胞；但高剂量照射能诱导血小板聚集，导致α-颗粒及致密颗粒释放，损坏血小板功能。理想的紫外线照射应对白细胞进行有效的灭活，而对血小板功能无明显影响。本实验未进行血小板形态、功能等指标的检测，但证实血液光量子疗法能使血小板数量增多，临床效果改善。另外，本实验进一步证实紫外线照射可以减少NHFTR的发生。浓缩血小板保存过程中细胞因子含量升高是导致NHFTR的主要原因，而浓缩血小板保存过程中细胞因子主要来源于残留白细胞的合成与释放。有报道，大于1.5J/cm2 UVB于保存前对浓缩血小板进行照射，可有效的预防保存过程中细胞因子含量升高，这可能与紫外线照射后促进浓缩血小板中混杂的单个核细胞凋亡有关；另外，紫外线照射能抑制单个核细胞表面细胞间粘附分子ICAM-1及HLA-DR上调表达，从而抑制细胞因子的产生。

    总之，本研究表明血液光量子疗法可减少血小板相关抗体产生，有效降低同种免疫反应，输血后使血小板数量增多，输注无效率降低，临床效果改善，减少输血反应。

    【参考文献】

    1  韩增工，田丁，路继莲，等.单采血小板输注减少同种免疫反应的研究.中国输血杂志，1996，9(3)：117.

    2  Feibig E,Lane TA. Effect of storage and ultraviolet B irradiation on CD14-bearing antigen-presenting cells(monocytes) in platelet concentrates.Transfusion,1994,34:846-851.

    3  Spielberg H,June CH,Blair OC,et al.UV irradiation of lymphocytes an increase in intracelluler Ca2+ and prevents lectin-stimulated Ca2+ mobilization.Exp Hematol,1991,19:742-748.

    4  栾建凤，朱培元，雷千红，等.光量子血液疗法对血小板的影响.临床检验杂志，2001，19(3)：157-158.

    作者单位： 255029 山东淄博，淄博市第三人民医院

　 (编辑：齐  永)