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【摘要】 目的 用HPLC法建立鸡胆汁分散片中牛磺鹅去氧胆酸钠的定量分析方法。方法 采用Diamonsil C18色谱柱（4.6mm×150mm,5μm）,以乙腈-水-1%三氟乙酸为流动相，检测波长为205nm，按外标法定量。结果 牛磺鹅去氧胆酸钠在1.162～46.48μg范围内呈现良好线性关系，相关系数r=0.99999;平均加样回收率为100.6%，RSD分别为0.45%(n=9)。结论 本方法操作简便、准确、可靠，适宜该制剂的质量控制。
【关键词】 HPLC法；鸡胆分散片；牛磺鹅去氧胆酸钠
【Abstract】 Objective To establish a HPLC method to determine the sodium taurochenodeoxycholic acid in fowl bile dispersible tablets. Methods The DiamonsilC18 column(4.6mm×150mm,5μm)was used.The mobil ephase:acetonitrile-water-1% trifluoroacetic acid(35:55:10),the UVdetector wavelength was 205nm.Results The calibration curve of sodium taurochenodeoxycholic acid was linear (r:0.99996) within the range of 0.98～19.60μg for puere in. The average recovery rate of sodium taurochenodeoxycholic acid was 100.4% ,and RSD was 0.12% (n=9). Conclusion The methool is simple and accurate and reliable,suitable for the quality control of the drug.
【Key words】 HPLC；fowl bile dispersible tablet； sodium taurochenodeoxycholic acid
鸡胆汁分散片是以鸡胆浸膏为原料的制剂，为镇咳药。鸡胆浸膏中的主要成分是牛磺鹅去氧胆酸钠(TCDCA)，约占浸膏总重量的40%。还含少量的牛磺胆酸钠和其他成分。本文采用高效液相色谱法［1］对鸡胆汁分散片中的TCDCA进行测定，方法简便，精密度较高，可有效地对鸡胆汁分散片进行质量控制，为药品质量标准的修订和生产工艺的改进提供科学依据。
1 仪器与试剂
安捷仑1100高效液相色谱仪，G1315B DAD 紫外检测器；G1313A 输液泵；G1270A色谱工作站；牛磺鹅去氧胆酸钠对照品（批号：110846-200304）供含量测定，中国药品生物制品检定所提供。供试品：鸡胆汁分散片［规格：每片含牛磺鹅去氧胆酸钠（C26H44NNaO6S），不得少于15.0mg，批号：20040701，20040702，20040703］由吉林省七星山药业提供；乙腈为色谱纯，三氟乙酸为分析纯。
2 色谱条件色谱柱
Diamonsil C18柱（150mm×4.6mm,5μm）；流动相：乙腈-水-1%三氟乙酸溶液（35：55：10）；pH为2.9；流速:1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长205nm［2］；理论板数按牛磺鹅去氧胆酸钠峰计算，应不低于1500。
3 溶液的制备
3.1 对照品溶液 分别取在五氧化二磷减压干燥器中干燥24h的牛磺鹅去氧胆酸钠对照品12.5mg,精密称定，置25ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得。
3.2 供试品溶液 取本品1片，置乳钵中，研细，加流动相适量研磨，用流动相分次转移置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。
3.3 空白对照溶液 取按处方比例制成的除去鸡胆浸膏的空白片，按“3.2”项下方法制成空白对照溶液。
4 方法与结果
4.1 空白干扰试验 吸取上述对照品溶液、供试品溶液及空白对照溶液各20μl，注入色谱仪，同法测定，结果在TCDCA峰相应位置上，空白对照无干扰，结果见图1。
4.2 最低检出限和最低定量限的确定
4.2.1 最低检出限 精密称取牛磺鹅去氧胆酸钠对照品0.01081g，置25 ml容量瓶中加流动相至刻度，取1ml置 25ml容量瓶中加流动相至刻度，进样1μl,记录色谱图，结果显示,信噪比为3.4，牛磺鹅去氧胆酸钠最低检出限为0.08648μg。
4.2.2 最低定量限 取上述对照品溶液，进样2μl,记录色谱图，结果显示,信噪比为10.1，牛磺鹅去氧胆酸钠最低定量限为0.17296μg。
4.3 线性关系试验 精密量取牛磺鹅去氧胆酸钠对照品溶液1 、2 、5 、10、20、 30 、40μl注入色谱仪。记录色谱图，以峰面积为纵坐标，进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线。回归方程为：Y=1.77965×102X+23.40 ， r=0.99999。实验结果表明，牛磺鹅去氧胆酸钠进样量在1.162～46.48μg范围内，与峰面积呈良好的线性关系，近似为一通过原点的直线。因此，采用外标一点法测定。
4.4 精密度试验 取牛磺鹅去氧胆酸钠对照品溶液（每1ml中含牛磺鹅去氧胆酸钠0.5mg），按上述色谱条件连续进样8次，每次进样10μl，牛磺鹅去氧胆酸钠峰面积的RSD为0.71% (n=8)。
4.5 稳定性试验 取上述供试品溶液，按上述色谱条件，在0、2、4、6、8、12、24h分别测定1次，进样10μl，考察 TCDCA峰面积的RSD为0.3% (n=7)。结果表明，供试品溶液在24h内稳定。
4.6 重复性试验 取鸡胆汁分散片20片（批号：20040702），精密称定，研细，精密称取1片量，共5份，含量的RSD为1.2%。
4.7 回收率试验 取已知含量的样品（批号：20040702）20片，精密称定，研细，精密称取9份，每3份为1组，每组分别为0.5片量的70%、100%和130%，分别精密加入等量的对照品0.245mg，按“3.2”项下方法制备供试品溶液，测定，结果平均回收率为100.6%, RSD为0.45%(n=9)。
4.8 供试品含量测定结果 分别取鸡胆汁分散片（批号：20040701、20040702、20040703）10片，精密称定，研细，精密称取1片量，按“3.2”项下方法制备供试品溶液，并按上述色谱条件，吸取供试品溶液10μl进样测定，按峰面积外标法计算，测得每片含牛磺鹅去氧胆酸钠（C26H44NNaO6S）分别为34.13mg、33.81mg和33.63 mg，RSD分别为0.56%、0.83%和0.79%（n=3）
5 结论
本文采用测定牛磺鹅去氧胆酸钠控制鸡胆汁分散片质量的方法，因测定波长为205nm，基线噪声大。所以笔者在色谱条件的选择上，考察了不同配比的流动相对保留时间和峰形的影响。并尝试不同比例3%、5%和10%的三氟乙酸，结果表明，三氟乙酸的比例低时，峰形不好，有拖尾。流动相pH≤2.9时,峰形较好。本法经实验表明其方法简便，可靠，样品检测结果准确，精密度及重复性高，回收率为100.6%。可用于作为质量标准控制药品生产。
【参考文献】
1 国家药典委员会.中国药典，2005年版二部.北京：化学工业出版社，2005，附录ⅪⅩA:28-30.
2 张启明，殷晓建，严克东，等.高效液相色谱法直接测定熊胆粉中牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸的含量.药物分析杂志，1993，13（5）:321-323.
作者单位：1 130061 吉林长春 吉林大学第一临床医院
2 130062 吉林长春，长春市药品检验所
(编辑：黄 杰)